本发明专利技术属于农业生物技术领域，涉及一种利用草豆蔻茎尖快速繁育种苗的方法，包括诱导分化不定芽、继代增殖、生根诱导、移栽和管理过程。本发明专利技术工艺流程简单，以笋芽或未开花的分蘖株的茎尖为外植体直接诱导分化不定芽，不定芽经过继代增殖形成丛芽、不定芽生根、移栽等过程，在短时间内获得大量可用于生产栽培的健康、优质种苗，周期短，且获得的种苗生理年龄一致，生长整齐，适合工厂化育苗和规模化栽培，解决人工种植对优良种苗的需求，对促进草豆蔻的开发利用及野生资源的保护起重要的作用。开发利用及野生资源的保护起重要的作用。开发利用及野生资源的保护起重要的作用。
【技术实现步骤摘要】
一种利用草豆蔻茎尖快速繁育种苗的方法
[0001]本专利技术属于农业生物
，涉及一种草豆蔻组织培养繁育种苗的方法，具体涉及一种利用草豆蔻茎尖快速繁育种苗的方法。该方法利用草豆蔻茎尖直接诱导分化不定芽，通过不定芽继代增殖、生根诱导、移栽等过程，获得大量种苗。
技术介绍
[0002]草豆蔻(Alpinia katsumadai Hayata)又名豆蔻、漏蔻、草果、豆蔻子、草蔻、大草蔻、偶子、草蔻仁、飞雷子、弯子等，为姜科山姜属植物，多年生草本，在中国海南、云南、广西均有栽培。其干燥种子入药，具有很高的药用价值和开发前景。
[0003]进行草豆蔻的规模化人工种植，培育健康、优质的种苗是关键。现今，草豆蔻主要的育苗方式是种子繁殖或分株繁殖。播种育苗，一则种子必须采随收随播种，季节限制明显；二则草豆蔻种子是产品器官，播种育苗耗费成本较高；三则种子萌发率低，据王俊(2017)研究表明种子无菌萌发率最高只有48.33％；四则播种过程也比较繁琐，播种前需要先将果皮剥去，清水浸泡，然后用粗沙与种子充分搓擦洗净果肉后方可使用。分株繁殖，一方面繁殖效率较低，种苗不整齐；另一方面容易携带病虫害，加剧病虫害的传播蔓延，种苗质量堪忧。因此，播种育苗和分株繁殖都不是草豆蔻种苗批量繁殖的理想方法。
[0004]植物组织培养具有原材料需求量少、不受时间和地点限制、繁殖系数高、可保持母本优良性状等特点，在植物种苗繁育上广泛应用。为加速草豆蔻优良品种推广种植，有必要建立能高效、稳定扩繁草豆蔻健康优质组培种苗的生产技术体系。
[0005]王俊,(2017，仲恺农业工程学院硕士论文)选择成熟的草豆蔻种子作为外植体，经过特殊处理促进种子直接萌发或诱导产生愈伤组织，再通过愈伤组织分化成芽，但过程比较繁琐，且存在以下缺点：(1)以种子为起始材料，取材受季节限制；(2)种子有分离，种苗不整齐；(3)种子的萌发时间较长，从取材到获得再生植株需要的时间长，周期长；(4)步骤比较繁琐，在进行无菌播种前，需要将果皮剥去，洗净果肉，浸种，温水浸泡或浓硫酸处理等过程。
技术实现思路
[0006]本专利技术的目的是提供一种一种利用草豆蔻茎尖快速繁育种苗的方法，利用草豆蔻优良植株的茎尖为外植体，通过茎尖直接分化不定芽的方式繁殖，可在短时间内获得批量性状一致、生长整齐的草豆蔻组培苗，适合工厂化育苗和规模化栽培，解决人工种植对优良种苗的需求，对促进草豆蔻的开发利用及野生资源的保护起重要的作用。
[0007]本专利技术所采用的技术方案：
[0008]一种利用草豆蔻茎尖快速繁育种苗的方法，包括诱导分化不定芽、继代增殖、生根诱导、移栽和管理过程，其步骤如下：
[0009]1、诱导分化不定芽过程
[0010]取草豆蔻的笋芽或未开花的分蘖株，清洗消毒后剥取茎尖接种于诱导培养基上诱
导分化不定芽。所述诱导培养基是以WT为基本培养基，并添加6
‑
BA 5.0～10.0mg/L、NAA 0.5～1.0mg/L、蔗糖30g/L、卡拉胶6.5g/L，pH值为5.8。
[0011]2、增殖培养过程
[0012]将不定芽转接到增殖培养基上进行继代增殖培养形成丛芽。所述增殖培养基是以WT为基本培养基，并添加6
‑
BA 3.0～5.0mg/L、NAA 0.1～0.5mg/L、蔗糖30g/L、卡拉胶6.5g/L，pH值为5.8。
[0013]3、诱导生根过程
[0014]待丛芽长到3～4cm高时，切取单株，接种于生根培养基上诱导生根，获得完整植株。所述生根培养基是以1/2MS培养基为基本培养基，并添加NAA 0.1～1.0mg/L、蔗糖30g/L、卡拉胶6.5g/L，pH为5.8。
[0015]4、移栽和管理过程
[0016]A.移栽：将生根苗连瓶放置在控温大棚中炼苗，一周后将苗移出培养瓶外，洗净小苗根部的培养基，在600倍液的多菌灵溶液中浸泡30s～60s后，移栽到经多菌灵溶液消毒好的基质上；
[0017]B.基质配比及处理：分别取草炭土、椰糠和河沙，按体积比计：草炭土：椰糠：河沙＝3:2:1的比例混匀，用多菌灵溶液淋透后盖上薄膜捂3～5d后揭开，用清水淋透后种苗；
[0018]C.管理：移栽后7～10d内，覆盖薄膜保湿，基质湿度保持80％～90％，然后逐渐降低到70％；空气湿度90％以上，然后逐渐降低到60％～70％；遮阴60％～70％，然后逐渐减少到30％；
[0019]D.施肥：待移栽的幼苗发新根后，晴天上午采用0.1％～0.2％尿素溶液进行叶面喷施，每7～15d施肥1次；
[0020]E.病虫害防治：利用500倍多菌灵、500倍百菌清、800倍甲霜灵复合防病，利用菊酯类杀虫剂除虫。
[0021]本专利技术工艺流程简单，以笋芽或未开花的分蘖株的茎尖为外植体直接诱导分化不定芽，不定芽经过继代增殖形成丛芽、不定芽生根、移栽等过程，在短时间内获得大量可用于生产栽培的健康、优质种苗，周期短，且获得的种苗生理年龄一致，生长整齐，适合工厂化育苗和规模化栽培，解决人工种植对优良种苗的需求，对促进草豆蔻的开发利用及野生资源的保护起重要的作用。
附图说明
[0022]图1是本专利技术的培养过程效果图。A：草豆蔻剥取米粒大小的茎尖；B：草豆蔻茎尖诱导分化不定芽；C：草豆蔻继代培养形成丛芽；D：草豆蔻生根培养。
具体实施方式
[0023]下面结合实施例，对本专利技术的具体实施方式作进一步详细描述。以下实施例用于说明本专利技术，但不用来限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法,通常按照常规条件,或按照制造厂商所建议的条件。
[0024]一、草豆蔻种苗繁育
[0025]实施例一：
[0026]1、茎尖诱导分化不定芽过程
[0027]取草豆蔻未开花的分蘖株，清洗消毒后用无菌纸吸干水分，剥取米粒大小(0.5
‑
1mm)的茎尖，接种于诱导培养基(WT+6
‑
BA 6.0mg/L+NAA 0.9mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶6.5g/L，pH为5.8)上诱导分化不定芽。培养条件：培养温度24～26℃，光照培养，光照时间10～12h/d，光照强度20～30μmol
·
m
‑2·
s
‑1。培养30d左右，开始分化不定芽。
[0028]2、增殖培养过程
[0029]将不定芽转接到增殖培养基(WT+6
‑
BA 3.0mg/L+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶6.5g/L，pH为5.8)上进行继代增殖培养形成丛芽。培养条件同步骤1。
[0030]3、诱导生根过程
[0031]待丛芽长到3～4cm高时，切取单株，接种于生根培养基(1/2MS+NAA 0.5mg/L+蔗糖30g/L+卡拉胶6.5g/L，pH为5.8)上诱导生根，培养条件同步骤1。培养10d后，开始产生不定根，培养30d后本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种利用草豆蔻茎尖快速繁育种苗的方法，其特征在于，包括诱导分化不定芽、继代增殖、生根诱导、移栽和管理过程，其步骤如下：1)诱导分化不定芽过程取草豆蔻的笋芽或未开花的分蘖株的茎尖为外植体，清洗消毒后接种于诱导培养基上诱导分化不定芽；所述诱导培养基是以WT为基本培养基，并添加6
‑
BA 5.0～10.0mg/L、NAA 0.5～1.0mg/L、蔗糖30g/L、卡拉胶6.5g/L，pH值为5.8；2)增殖培养过程将不定芽转接到增殖培养基上进行继代增殖培养形成丛芽；所述增殖培养基是以WT为基本培养基，并添加6
‑
BA 3.0～5.0mg/L、NAA 0.1～0.5mg/L、蔗糖30g/L、卡拉胶6.5g/L，pH值为5.8；3)诱导生根过程待丛芽长到3～4cm高时，切取单株，接种于生根培养基上诱导生根，获得完整植株；所述生根培养基是以1/2MS培养基为基本培养基，并添加NA...
【专利技术属性】
技术研发人员：李志英，符运柳，徐立，
申请(专利权)人：中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所，
类型：发明
国别省市：
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