单加氧酶基因phzO、编码的蛋白质、基因工程菌株及其构建方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种单加氧酶基因phzO、编码蛋白质、基因工程菌株及其构建方法和应用。所述单加氧酶基因phzO的编码序列如SEQ ID NO:1所示，所述单加氧酶基因phzO的上游非编码区的DNA序列如SEQ ID NO:2所示。编码的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。本发明专利技术将绿针假单胞菌LX24单加氧酶基因phzO基因及其上游非编码区替换至绿针假单胞菌GP72AN的內源phzO位点，使2

【技术实现步骤摘要】
单加氧酶基因phzO、编码的蛋白质、基因工程菌株及其构建方法和应用


[0001]本专利技术涉及基因工程
，具体地，涉及一种单加氧酶基因phzO、编码蛋白质、基因工程菌株及其构建方法和应用。

技术介绍

[0002]2‑
羟基吩嗪在拮抗小麦全蚀病病原菌、菌核病原菌和炭疽病原菌的效果良好，具有很好的应用前景。此外，2
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羟基吩嗪已证明对哺乳动物没有毒性，并且该物质在自然条件中两周左右可以被环境微生物降解，是一种安全可降解的微生物源活性物质。目前，可以通过化学和生物的方法合成2
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羟基吩嗪，但是化学合成产量不高，需要昂贵的催化剂和高温反应条件，并产生氧化铅、苯胺、苯二胺等有毒有害物质，阻碍了其生产应用。微生物发酵法合成2
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羟基吩嗪的过程安全无污染，是一种环境友好、资源节约的合成方案。然而，微生物合成2
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羟基吩嗪的效价较低，这是2
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羟基吩嗪尚未实现产业化的重要因素。微生物合成2
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羟基吩嗪的效价低的主要原因是关键催化基因phzO本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种单加氧酶基因phzO及其上游非编码区的DNA序列，其特征在于，所述单加氧酶基因phzO的编码序列如SEQ ID NO:1所示，所述单加氧酶基因phzO的上游非编码区的DNA序列如SEQ ID NO:2所示。2.根据权利要求1所述的一种单加氧酶基因phzO及其上游非编码区的DNA序列，其特征在于，所述单加氧酶基因phzO来自绿针假单胞菌LX24。3.一种单加氧酶基因phzO编码的蛋白质，其特征在于，所述单加氧酶基因phzO的编码序列如SEQ ID NO:1所示，所述蛋白质的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示。4.一种基因工程菌株，其特征在于，所述基因工程菌株携带权利要求1所述的单加氧酶基因phzO及其上游非编码区的DNA序列。5.根据权利要求4所述的基因工程菌株，其特征在于，所述基因工程菌株为，用来自绿针假单胞菌LX24的单加氧酶基因phzO及其上游非编码区的DNA序列替换绿针假单胞菌GP72AN中的可产2
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羟基吩嗪的內源phzO位点后得到的菌株ANOX。6.一种权利要求5所述的基因工程菌株的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤1、克隆单加氧酶基因phzO与其上游非编码区的DNA序列；步骤2、克隆可产2
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羟基吩嗪的待替换序列的上下游同源臂；步骤3、将单加氧酶基因phzO及其上游非编码区DNA序列与可产2
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羟基吩嗪的待替换序列的上下游同源臂连接在pK18mobsacB质粒上构建重组质粒，经过测序验证后转化至大肠杆菌s17感受态中；步骤4、将含有pK18mobsacB重组质粒的S17
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1菌株与作为受体菌株的绿针假单胞菌GP72ANON进行接合转移；步骤5、筛选突变株将接合转移后长出的菌株采用双抗板筛选单交换突变株，将单交换突变株用单抗板筛培养筛选出双交换突变株，然后通过第一引物对筛选出双交换突变株进行PCR验证；所述第一引物对序列如下所示,F
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O：5
′‑
TTACAGCCGTAGGGTACCGAGATA
‑3′
R
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O：5
′‑
CTATTTGGCGTTGAGCCCCA
‑3′
；步骤6、将PCR验证正确的基因工程菌株接到LB液体培养基中过夜，提取基因组测序验证，验证正确即为成功导入绿针假单胞菌LX24 p...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡洪波，岳圣杰，张雪洪，刘文慧，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：