一种血平片指纹图谱的建立方法及其指纹图谱技术

本发明专利技术涉及中药分析领域，特别涉及一种血平片指纹图谱的建立方法及其指纹图谱。本发明专利技术步骤包括供试品的制备；对照品溶液的制备；注入液相色谱仪联合紫外检测器和蒸发光散射检测器，记录色谱图；所得色谱图导入中药指纹图谱相似度评价系统进行相似度评价。通过采用液相色谱法联合紫外检测器和蒸发光散射检测器建立的指纹图谱，弥补传统检测器无法对无紫外吸收或紫外末端吸收的大分子成分进行检测的不足，从整体上对血平片多组分进行分析，标定了23个共有峰，其中10个化合物经过对照品验证，反应信息比较完全，本发明专利技术建立的血平片指纹图谱与相应的对照图谱进行相似度评价，其相似度大于0.9，能够有效的表征血平片处方中各药材的特有成分，能有效的表征其质量，有利于全面监控产品的质量。本发明专利技术具有方便、快捷、稳定、精密度高和重现性好等优点，能更加全面、客观、科学地评价血平片的质量，从而保障其在治疗上的有效性。疗上的有效性。疗上的有效性。

【技术实现步骤摘要】
一种血平片指纹图谱的建立方法及其指纹图谱


[0001]本专利技术涉及中药制剂的质量控制方法，特别是涉及一种用高效液相色谱法对血平片制剂指纹图谱的构建方法及其所获取的指纹图谱。

技术介绍

[0002]中药质量控制是中药现代化的重要内容，指纹图谱技术被认为是中药质量控制的有效手段。中药指纹图谱能科学地反映中药制剂中相关处方药的化学物质的种类，是实现中药真实性、质量可控性和产品稳定性的可行模式，能更好地反映中药的内在品质。建立中药指纹图谱将能较为全面地反映中药及其制剂中所含化学成分的种类与数量，进而对药品质量进行整体描述和评价。
[0003]血平片由地黄、熟大黄、地榆、三七、海螵蛸、茜草、蒲黄(炒)七味药制成的中药复方制剂。具有清热化瘀，止血调经的作用。用于血热挟淤所致的崩漏。现行的血平片的质量标准以HPLC测定大黄酸和大黄酚的含量，再进一步有研究人员通过HPLC法同时测定血平片中大黄和三七含量，实现一次性测定大黄中大黄素、大黄酚及三七中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1含量的方法。但这些方法都是仅选取其中几种成分状况来说明产品的内在质量，这些控制方法不足以代表其质量整体，具有一定的局限性。不能真实反映其内在品质及批次之间产品质的一致性。直至目前未见有血平片的宏观指纹图谱研究的成果报道。
[0004]血平片成分复杂，含有一些无紫外吸收或只具有紫外末端吸收等不适合采用紫外检测器检测的成分。而蒸发光散射检测器通常被认为是通用型检测器，可用于检测缺少发色体的药物、碳水化合物、多聚糖、脂类、植物油、脂肪酸等。因此采用高效液相色谱法联合紫外检测器与蒸发光散射检测器对血平片进行整体全面的质量控制。

技术实现思路

[0005]本专利技术所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，建立了一种血平片指纹图谱的质量控制方法及其依该方法所得到的具有血平片特征的指纹图谱，该方法以高效液相色谱法联合紫外检测器与蒸发光散射检测器对血平片中的指标成分进行全面检测，获得指纹图谱，用于评价和控制血平片的质量，以确保证血平片的质量稳定性、一致性和可控性，从而提高血平片的安全性和有效性。
[0006]本专利技术提供一种血平片指纹图谱的建立方法，具体步骤包括：
[0007](a)供试品的制备：不同批次的血平片，除去包衣研细后，取一定量的血平片粉末置于容器中，加入一定浓度的甲醇溶液进行回流提取，放冷，用甲醇溶液补足减失重量，滤过，即得供试品溶液；
[0008](b)对照品的制备：精密称取毛蕊花糖苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚、地榆皂苷
‑
II、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1对照品适量，分别加甲醇制成一定浓度的对照品溶液；
[0009](c)测定方法：精密吸取参照物和供试品溶液，注入液相色谱仪联合紫外检测器和
蒸发光散射检测器，测定，记录色谱图，洗脱过程为梯度洗脱；
[0010](d)将获得的血平片色谱图导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”进行相似度评价。
[0011]本专利技术前述血平片指纹图谱的建立方法，优选地，步骤(a)供试品的制备具体操作过程为：精密称取2.0g的血平片粉末，精密加入50％～90％甲醇溶液25ml，称重，加热回流2小时，放冷，用50％～90％甲醇补足减失重量，滤过，取续滤液即得供试品溶液。
[0012]本专利技术前述血平片指纹图谱的建立方法，优选地，步骤(b)对照品的制备具体操作过程为：精密称取毛蕊花糖苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚、地榆皂苷
‑
II、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1对照品适量，分别加甲醇制成每1ml含0.04mg/mL的对照品溶液。
[0013]本专利技术前述血平片指纹图谱的建立方法，优选地，步骤(c)测定方法具体操作过程为：分别精密吸取对照品和供试品溶液，注入液相色谱仪联合紫外检测器和蒸发光散射检测器，测定，记录色谱图的时间为90min。
[0014]本专利技术前述血平片指纹图谱的建立方法，优选地，步骤(c)中，血平片指纹图谱测定条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以0.1％甲酸水溶液为流动相B，按下表中规定进行梯度洗脱；柱温30℃；流速为每分钟1ml，检测波长为254nm；理论板数按大黄酚计算应不低于3000；漂移管温度60℃；气流速350KPa；增益值6/32倍。3000；漂移管温度60℃；气流速350KPa；增益值6/32倍。
[0015]本专利技术前述血平片指纹图谱的建立方法，优选地，色谱柱规格为Thermo ODS Hypersil
‑
C18，5um，4.6*250mm。
[0016]本专利技术前述血平片指纹图谱的建立方法，优选地，步骤(a)供试品的制备具体操作过程为：精密称取2.0g的血平片粉末，精密加入50％～90％甲醇溶液25ml，称重，加热回流2小时，放冷，用50％～90％甲醇补足减失重量，滤过，取续滤液即得供试品溶液；
[0017]步骤(b)对照品的制备具体操作过程为：精密称取毛蕊花糖苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚、地榆皂苷
‑
II、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1对照品适量，分别加甲醇制成每1ml含0.04mg/mL的对照品溶液；
[0018]步骤(c)测定方法具体操作过程为：分别精密吸取对照品和供试品溶液，注入液相色谱仪联合紫外检测器和蒸发光散射检测器，测定，记录色谱图的时间为90min；
[0019]血平片指纹图谱测定条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以0.1％甲酸水溶液为流动相B，按下表中规定进行梯度洗脱；柱温30℃；流速为每分钟1ml，检测波长为254nm；理论板数按大黄酚计算应不低于3000；漂移管温度60℃；气流速350KPa；增益值6/32倍。
[0020]本专利技术前述血平片指纹图谱的建立方法，优选地，步骤(d)具体操作过程为：将获得的血平片色谱图导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”2012版，进行相似度评价。
[0021]一种血平片在紫外检测器波长254nm条件下得到的指纹图谱中所述的18个特征共有峰与峰17的相对保留时间如下：峰1∶0.094；峰2∶0.148；峰3∶0.187；峰4∶0.333；峰5∶0.444；峰6∶0.465；峰7∶0.575；峰8∶0.67；峰9∶0.691；峰10∶0.705；峰11∶0.783；峰12∶0.813；峰13∶0.847；峰14∶0.869；峰15∶0.884；峰16∶0.97；峰17∶1；峰18∶1.049。其中峰5为毛蕊花糖苷，峰12为芦荟大黄素，峰15为大黄酸，峰16为大黄素，峰17为大黄酚，峰18为大黄素甲醚。
[0022]一种血平片在蒸发光散射检测器条件下得到的指纹图谱中所述的5个特征共有峰与峰22的相对保留时间如下：峰19∶0.507；峰20∶0.727；峰21∶0.767；峰22∶1.000；峰23∶1.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种血平片指纹图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(a)供试品的制备：不同批次的血平片，除去包衣研细后，取一定量的血平片粉末置于容器中，加入一定浓度的甲醇溶液进行回流提取，放冷，用甲醇溶液补足减失重量，滤过，即得供试品溶液；(b)对照品的制备：精密称取毛蕊花糖苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚、地榆皂苷
‑
II、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1对照品适量，分别加甲醇制成一定浓度的对照品溶液；(c)测定方法：精密吸取参照物和供试品溶液，注入液相色谱仪联合紫外检测器和蒸发光散射检测器，测定，记录色谱图；(d)将获得的血平片色谱图导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”2012版，进行相似度评价。2.据权利要求书1所述的指纹图谱的建立方法，其特征在于，供试品的制备方法如下：精密称取2.0g的血平片粉末，精密加入50％～90％甲醇溶液25ml，称重，加热回流2小时，放冷，用50％～90％甲醇补足减失重量，滤过，取续滤液即得供试品溶液。3.据权利要求书1所述的指纹图谱的建立方法，其特征在于，对照品的制备方法如下：精密称取毛蕊花糖苷、大黄素、芦荟大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚、地榆皂苷
‑
II、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1对照品适量，分别加甲醇制成每1ml含0.04mg/mL的对照品溶液。4.据权利要求书1所述的指纹图谱的建立方法，其特征在于，步骤(c)记录色谱图的时间为90min。5.据权利要求书1所述的指纹图谱的建立方法，其特征在于，血平片指纹图谱测定的色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以0.1％甲酸水溶液为流动相B，按下表中规定进行梯度洗脱；柱温30℃；流速为每分钟1ml，检测波长为254nm；理论板数按大黄酚计算应不低于3000；漂移管温度60℃；气流速350KPa；增益值6/32倍。板数按大黄酚计算应不低于3000；漂移管温度60℃；气流速350KPa；增益值6/32倍。6.据权利要求书1所述的指纹图谱的建立方法，其特征在于，(a)供试品的制备：不同批次的血平片，除去包衣研细后，精密称取2.0g的血平片粉末，精密加入50％～90...

【专利技术属性】
技术研发人员：周朝忠，吴志平，罗祎明，王翠，龙军，康兴东，郭邦亮，旷春兰，何慧莹，夏淑英，康爱华，肖绍川，
申请(专利权)人：江西普正制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：