本发明专利技术涉及一种香菇柄中多酚类化合物的提取与分离方法，该方法以水解释放结合态多酚，70％乙醇水溶液提取菇柄粉中多酚类化合物，与配位金属离子盐如氯化钙形成络合物、在有机溶剂中共沉淀的方式分离，获得了具有抗氧化活性的多酚类提取物。本发明专利技术的提取与分离工艺简单快捷、成本低，得到的产品易于进一步加工使用，且所得的多酚类物质具有消除自由基、抗氧化、预防心血管疾病等多种生理和区理功效，该多酚类物质可以开发成为安全、高效的天然抗氧化剂。然抗氧化剂。然抗氧化剂。
【技术实现步骤摘要】
香菇柄中多酚类化合物的提取分离方法以及提取所得的多酚类化合物与应用
[0001]本专利技术属于天然产物提取领域，具体涉及一种香菇柄中多酚类化合物的提取与分离方法。
技术介绍
[0002]香菇(Lentinus edodes)属真菌界、真菌门、担子菌亚门、层菌纲、伞菌目，素有“山珍之王”的美誉，是珍贵的食用菌。我国是全球最大的香菇生产国，栽培历史已有800多年。香菇营养丰富，含多种活性物质，目前对香菇中活性物质的研究多集中在香菇多糖方面，香菇多糖具有抗病毒、抗肿瘤、调节免疫功能和刺激干扰素形成等作用，并已应用于医药中，现已经有各类香菇多糖产品上市。除多糖外，多酚类化合物也是香菇中含有一类具有生物活性的物质。多酚是一类具有多酚羟基化合物的总称，按结构大致可分为类黄酮、芪、酚酸和木酚素等。目前已分离鉴定出8000多种多酚类物质。
[0003]菇柄占香菇总重约30％
‑
50％，大都没有充分开发利用，常被当作废弃物处理。近年来，香菇柄的开发和利用受到重视，并已进行了各种尝试，目前主要集中在香菇柄中的多糖、氨基酸和微量元素的利用，对其多酚类物质的开发利用相对较少，因此有必要设计出一种香菇柄中多酚类化合物的提取与分离方法，以满足香菇柄中多酚类物质进一步研究的需要。
技术实现思路
[0004]本专利技术的目的在于提供一种提取率高、操作便捷的香菇柄中多酚类化合物的提取与分离方法。
[0005]本专利技术的目的通过如下技术方案实现：
[0006]一种香菇柄中多酚类化合物的提取与分离方法，它包括以下工艺步骤：
[0007](1)香菇柄中多酚类物质的提取：
[0008]步骤
①
超声提取：将香菇柄粉按1：10(w/v)料液比加入70％乙醇水溶液，超声30min提取菇柄粉中的多酚类物质，形成乙醇
‑
多酚混合物，4500rpm离心5min后取上清液；
[0009]步骤
②
水解萃取：在步骤
①
离心后的残渣中按1：5(w/v)料液比依次加入水和4mol/L NaOH溶液(含1％抗坏血酸和10mmol/L EDTA)，充氮于40℃振荡避光水解4h，以4mol/L HCl溶液调节pH至2，按1：5(w/v)料液比加入石油醚(含0.2％BHA(m/v))振荡萃取，取萃取液，重复操作一次，合并萃取液；
[0010]步骤
③
减压蒸馏并复溶：将步骤
①
所得的上清液与步骤
②
所得的萃取液合并减压蒸馏近干，之后以1：1(w/v)料液比加入甲醇复溶，得提取液；
[0011](2)形成多酚
‑
金属离子络合物沉淀：在步骤
③
所得的提取液中按10:1(v/w)加入碳酸氢钠，加入氯化钙(与提取液比例为1:5，w/v)，静置10min，4500rpm离心，弃去上清液，获得多酚
‑
金属离子络合物沉淀，即多酚类物质。
[0012](3)利用液相色谱质谱联用对提取的多酚类物质进行分析；分析时，称取部分提取所得的多酚类物质溶解在去离子水中形成待测的样品溶液；
[0013]其中，UPLC
‑
MS/MS分析条件如下：
[0014]液相色谱条件：
[0015]色谱柱：Waters Acquity HSS T3 column(50mm
×
2.1mm，1.8μm)；柱温：40℃；进样量：5μL；流动相：A为乙腈，B为0.05％(v/v)甲酸水溶液；流速：0.3mL/min；梯度洗脱程序：0～1.0min，90％B～80％B；1.0～2.0min，80％B～70％B；2.0～2.5min，70％B～65％B；2.5～3.5min，65％B～10％B；3.5～5.0min，10％B；5.0～7.0 90％B；
[0016]质谱条件：
[0017]电离源：电喷雾离子源(ESI)；监测模式：多反应监测(MRM)；扫描模式：负离子模式；雾化电压(IS)为4500V；离子化温度(TEM)为400℃；雾化气(GAS 1)为345kPa；辅助气(GAS 2)为345kPa；碰撞气(CAD)为Medium；气帘气(CUR)为207kPa。
[0018]以没食子酸、奎宁酸、对羟基苯甲酸及儿茶素为代表，典型性多酚类物质的质谱分析参数见表1；
[0019]表1代表性多酚类物质的质谱分析参数
[0020][0021](4)菇柄提取物中多酚含量的测定；具体测定方法如下：
[0022]称取0.50g步骤(2)得到的多酚类物质，加水定容至100mL；以没食子酸为对照品测定多酚含量；准确移取0、0.50、1.00、1.50、2.00、2.50mL的100μg/mL标准溶液与0.50mL样液于50mL容量瓶中，分别加入5mL福林酚试剂和10mL蒸馏水，摇匀，反应3min后加入10mL20％Na2CO3溶液，加去离子水定容，室温下暗处放置60min，于730nm处测定吸光度，以没食子酸质量浓度为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线，并根据线性方程得出多酚浓度。
[0023]本专利技术还提供一种由所述的提取与分离方法所得的多酚类化合物。
[0024]本专利技术还提供所述的多酚类化合物在制备抗氧化剂药物中的应用。
[0025]较之现有技术而言，本专利技术的优点在于：本专利技术提出了一种从香菇柄中提出多酚类物质的方法，以水解释放结合态多酚，70％乙醇水溶液提取菇柄粉中多酚类化合物，与配位金属离子盐如氯化钙形成络合物、在有机溶剂中共沉淀的方式分离，获得了具有抗氧化活性的多酚类提取物。本专利技术工艺简单快捷、成本低，得到的产品易于进一步加工使用。本专利技术所得的多酚类物质具有消除自由基、抗氧化、预防心血管疾病等多种生理和区理功效，该多酚类物质可以开发成为安全、高效的天然抗氧化剂。
附图说明
[0026]图1是不同提取溶剂的提取效果图。
[0027]图2是氯化钙添加量优化图。
[0028]图3多酚类物质与抗坏血酸的羟基自由基清除率比较图。
具体实施方式
[0029]下面结合说明书附图和实施例对本
技术实现思路
进行详细说明：
[0030]一种香菇柄中多酚类化合物的提取与分离方法，它包括以下工艺步骤：
[0031](1)香菇柄中多酚类物质的提取：
[0032]步骤
①
超声提取：将香菇柄粉按1：10(w/v)料液比加入70％乙醇水溶液，超声30min提取菇柄粉中的多酚类物质，形成乙醇
‑
多酚混合物，4500rpm离心5min后取上清液；
[0033]步骤
②
水解萃取：在步骤
①
离心后的残渣中按1：5(w/v)料液比依次加入水和4mol/L NaOH溶液，其中，NaOH溶液含1％抗坏血酸和10mmol/L EDTA；之后，充氮于40℃振荡避光水解4h，以4mol/L 本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种香菇柄中多酚类化合物的提取与分离方法，其特征在于：它包括以下工艺步骤：(1)香菇柄中多酚类物质的提取：步骤
①
超声提取：将香菇柄粉按1：10(w/v)料液比加入70％乙醇水溶液，超声30min提取菇柄粉中的多酚类物质，形成乙醇
‑
多酚混合物，4500rpm离心5min后取上清液；步骤
②
水解萃取：在步骤
①
离心后的残渣中按1：5(w/v)料液比依次加入水和4mol/L NaOH溶液，其中，NaOH溶液含1％抗坏血酸和10mmol/L EDTA；之后，充氮于40℃振荡避光水解4h，以4mol/L HCl溶液调节pH至2，按1：5(w/v)料液比加入石油醚，其中，石油醚含0.2％BHA(m/v)，再振荡萃取，取萃取液，重复操作一次，合并萃取液；步骤
③
减压蒸馏并复溶：将步骤
①
所得的上清液与步骤
②
所得的萃取液合并减压蒸馏近干，之后以1：1(w/v)料液比加入甲醇复溶，得提取液；(2)形成多酚
‑
金属离子络合物沉淀：在步骤
③
所得的提取液中按10:1(v/w)加入碳酸氢钠，按与提取液比例为1:5(w/v)加入氯化钙，静置10min，4500rpm离心，弃去上清液，获得多酚
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金属离子络合物沉淀，即多酚类物质。2.根据权利要求1所述的香菇柄中多酚类化合物的提取与分离方法，其特征在于：它还包括步骤(3)利用液相色谱质谱联用对提取的多酚类物质进行分析；其中，UPLC
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MS/MS分析条件如下：液相色谱条件：色谱...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈巧霞，
申请(专利权)人：福州承成食品有限公司，
类型：发明
国别省市：
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