一种T淋巴细胞发育亚群免疫分型的方法和试剂盒技术

本发明专利技术涉及免疫学技术领域，尤其涉及一种T淋巴细胞发育亚群免疫分型的方法和试剂盒。该方法包括：取不同荧光标记的抗体，与待检测样品混合，孵育后，经流式细胞术检测，得检测数据；所述抗体包括：抗CD45的抗体、抗CD3的抗体、抗CD4的抗体、抗CD8的抗体、抗CD25的抗体、抗CD127的抗体、抗CD45RO的抗体、抗CD28的抗体、抗CD197的抗体和抗CD95的抗体。本发明专利技术提供的分型方法实现了对T淋巴细胞发育亚群进行更加全面的免疫分型，所需待测样品少，操作简单、所需时间短、准确性高、可广泛应用于T淋巴细胞发育亚群的免疫分型。育亚群的免疫分型。

【技术实现步骤摘要】
一种T淋巴细胞发育亚群免疫分型的方法和试剂盒


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种T淋巴细胞发育亚群免疫分型的方法和试剂盒。

技术介绍

[0002]T淋巴细胞即胸腺依赖性淋巴细胞，简称T细胞，是一类功能极为活跃的细胞群体，其介导细胞免疫应答。T细胞来源于造血干细胞，在胸腺中发育成熟。外周血中，T细胞约占淋巴细胞总数的60％左右。
[0003]按照免疫应答中的功能不同，可以将T细胞分成若干亚群：辅助性T细胞(HelperT cells,Th)、细胞毒性T细胞(Cytotoxic T cells,Tc)、调节性T细胞(RegulatoryT cells，Tr)。随着科学技术的进步，根据不同的表面标记可以定义更加精细的T细胞亚群的表型：初始T细胞、记忆T细胞和效应T细胞。免疫应答、体内平衡和记忆的建立和维持都依赖于T细胞。T细胞表达一种受体，具有从病原体、肿瘤和环境中识别多种抗原的潜能，并保持免疫记忆和自我耐受。T细胞也被认为是许多炎症和自身免疫性疾病的主要驱动因素，T细胞对于诱导对病原体或癌症的保护性免疫至关重要。
[0004]血液样品中的T淋巴细胞的亚群与机体的免疫系统的关系至关重要。T淋巴细胞在外周血淋巴细胞中约占60％左右，因此CD3+T细胞也相应为60％。但是，由于技术原因，检测的T淋巴细胞常达不到外周血淋巴细胞的总数。采用的技术单克隆玫瑰花结实验的阳性率最低，为50％左右，而采用单克隆抗体荧光显微镜法阳性率有所升高。目前，常采用流式细胞计数仪检测T淋巴细胞，但是，没有对T淋巴细胞的发育情况进行进一步的检测。综述上述T细胞检测方法，检测面窄，操作复杂，样品需要量大，耗时较长。如果要对T细胞发育进行更加精细的免疫分型，需要采用更为简单、省时和样品量需求小的方法和定量分析。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了一种T淋巴细胞发育亚群免疫分型的方法和试剂盒，该方法可实现T淋巴细胞更全面、精细地免疫分型和定量分析，效率高，且节约了待测样品的用量，用时短，更适合T淋巴细胞发育亚群的分型和定量分析。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]本专利技术提供了一种T淋巴细胞发育亚群免疫分型的方法，包括：
[0008]取不同荧光标记的抗体组合1，与待检测样品混合，孵育后，经流式细胞术检测，得检测数据，根据检测数据判定细胞型别；
[0009]所述抗体组合1包括：
[0010]抗CD45的抗体、抗CD3的抗体、抗CD4的抗体、抗CD8的抗体、抗CD25的抗体、抗CD127的抗体、抗CD45RO的抗体、抗CD197的抗体、抗CD28的抗体和抗CD95的抗体；
[0011]所述细胞型别的判定方法为：
[0012]细胞表面标志CD3
+
CD4
+
CD25
+
CD127
‑
代表Treg细胞；
[0013]细胞表面标志CD3
+
CD4
+
CD197
+
CD45RO
‑
CD28
+
CD95
‑
代表辅助初始T细胞；
[0014]细胞表面标志CD3
+
CD4
+
CD197
+
CD45RO
‑
CD28
+
CD95
+
代表辅助干细胞记忆T细胞；
[0015]细胞表面标志CD3
+
CD4
+
CD197
+
CD45RO
+
CD28
+
CD95
+
代表辅助中心记忆T细胞；
[0016]细胞表面标志CD3
+
CD4
+
CD197
‑
CD45RO
+
CD28
‑
CD95
+
代表辅助效应记忆T细胞；
[0017]细胞表面标志CD3
+
CD4
+
CD197
‑
CD45RO
+
CD28
+
CD95
+
代表辅助过渡记忆T细胞；
[0018]细胞表面标志CD3
+
CD8
+
CD197
+
CD45RO
‑
CD28
+
CD95
‑
代表细胞毒性初始T细胞；
[0019]细胞表面标志CD3
+
CD8
+
CD197
+
CD45RO
‑
CD28
+
CD95
+
代表细胞毒性干细胞记忆T细胞；
[0020]细胞表面标志CD3
+
CD8
+
CD197
+
CD45RO
+
CD28
+
CD95
+
代表细胞毒性中心记忆细胞；
[0021]细胞表面标志CD3
+
CD8
+
CD197
‑
CD45RO
+
CD28
‑
CD95
+
代表细胞毒性效应记忆T细胞；
[0022]细胞表面标志CD3
+
CD8
+
CD197
‑
CD45RO
+
CD28
+
CD95
+
代表细胞毒性过渡记忆T细胞。
[0023]在本专利技术中，流式细胞术中所用到的抗体可以为与待测样品同源的抗体或也可以为与待测样品非同源的抗体，只要该抗体能够与待测样品中细胞表面标志物产生抗原
‑
抗体特异性结合反应即可。
[0024]在本专利技术中，“+”代表阳性，即表示该抗原在细胞表面有表达；
[0025]“++”代表强阳性，即表示该抗原在细胞表面高表达；
[0026]“‑”
代表阴性，即表示该抗原在细胞表面不表达。
[0027]淋巴细胞在各自正常分化成熟的不同阶段及活化过程中，其细胞膜表面均表达可供鉴别的表面标志，利用荧光素标记的单克隆抗体作为分子探针，可对这些细胞表面标志进行流式细胞术检测，进而对细胞的种类、亚类以及功能特性进行分析。本专利技术经过大量创造性的研究和试验验证，提供了一种针对的T细胞发育亚群免疫分型的方法：细胞表面标志为CD3
+
CD4
+
CD25
+
CD127
‑
时，可对Treg细胞进行免疫分型；细胞表面标志为CD3
+
CD4
+
CD197
+
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种T淋巴细胞发育亚群免疫分型的方法，其特征在于，包括：取不同荧光标记的抗体组合1，与待检测样品混合，孵育后，经流式细胞术检测，得检测数据，根据检测数据判定细胞型别；所述抗体组合1包括：抗CD45的抗体、抗CD3的抗体、抗CD4的抗体、抗CD8的抗体、抗CD25的抗体、抗CD127的抗体、抗CD45RO的抗体、抗CD28的抗体、抗CD197的抗体和抗CD95的抗体；所述细胞型别的判定方法为：细胞表面标志CD3
+
CD4
+
CD25
+
CD127
‑
代表调节性T细胞；细胞表面标志CD3
+
CD4
+
CD197
+
CD45RO
‑
CD28
+
CD95
‑
代表辅助初始T细胞；细胞表面标志CD3
+
CD4
+
CD197
+
CD45RO
‑
CD28
+
CD95
+
代表辅助干细胞记忆T细胞；细胞表面标志CD3
+
CD4
+
CD197
+
CD45RO
+
CD28
+
CD95
+
代表辅助中心记忆T细胞；细胞表面标志CD3
+
CD4
+
CD197
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CD45RO
+
CD28
‑
CD95
+
代表辅助效应记忆T细胞；细胞表面标志CD3
+
CD4
+
CD197
‑
CD45RO
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CD28
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CD95
+
代表辅助过渡记忆T细胞；细胞表面标志CD3
+
CD8
+
CD197
+
CD45RO
‑
CD28
+
CD95
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：赵耀，牛琳琳，谭冰倩，杨宇婷，
申请(专利权)人：重庆医科大学附属儿童医院，
类型：发明
国别省市：