一种鉴定罗氏沼虾中铁壳虾个体的引物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种鉴定罗氏沼虾中铁壳虾个体的引物及其应用，属于SSR引物技术领域，该鉴定罗氏沼虾中铁壳虾个体的引物，包括：MRMSSR

【技术实现步骤摘要】
一种鉴定罗氏沼虾中铁壳虾个体的引物及其应用


[0001]本专利技术涉及SSR引物
，特别是涉及一种鉴定罗氏沼虾中铁壳虾个体的引物及其应用。

技术介绍

[0002]罗氏沼虾是我国重要淡水养殖虾种，近年来出现生长阻滞现象，相同密度相同饲养条件下，生长阻滞个体平均体重远小于正常生长个体，渔民称之为“铁壳虾”，近年来“铁壳虾”现象平均发生率高达三成以上，严重影响经济效益。“铁壳虾”生长缓慢的现象在苗种繁育及大棚培育期间并不明显，通常在大塘养殖一个多月后，生长缓慢症状相继出现，主要表现为生长明显变慢，虾壳变硬，雌虾5公分、雄虾6公分左右性腺发育成熟，雌虾抱卵、雄虾长出巨大的蓝色大鳌，此后生长极为缓慢，上市季节产量不及正常养殖池塘的一半，严重影响渔民收益，阻碍了罗氏沼虾养殖业的健康发展。由于长期以来缺乏罗氏沼虾“铁壳虾”的判断和检测方法，渔民在购买虾苗时无法判断后期出现“铁壳虾”的概率，增大了养殖风险，因此开发一种罗氏沼虾“铁壳虾”的检测方法迫在眉睫。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是提供一种鉴定罗氏沼虾中铁壳虾个体的引物及其应用，以解决上述现有技术存在的问题，辅助渔民在购买虾苗时对其进行质量检测，规避“铁壳虾”风险，提高养殖收益，同时有利于罗氏沼虾养殖业的健康可持续发展。
[0004]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0005]本专利技术提供一种鉴定罗氏沼虾中铁壳虾个体的引物，包括：
[0006]MRMSSR
‑
7AF：CAACTGGTCACGCAAATCAA；
[0007]MRMSSR
‑
7AR：GAGTTCAGCCTCATACCCCA。
[0008]本专利技术还提供一种试剂盒，包括如上所述的引物。
[0009]本专利技术还提供一种检测罗氏沼虾中铁壳虾个体的方法，包括以下步骤：
[0010](1)提取待测罗氏沼虾的肌肉组织RNA；
[0011](2)对所得RNA进行cDNA反转录；
[0012](3)利用如上所述的引物进行PCR扩增，获得扩增产物；
[0013](4)对所得扩增产物进行毛细管电泳，根据电泳条带判断待测罗氏沼虾中是否为铁壳虾个体。
[0014]进一步地，在步骤(3)中，所述PCR扩增体系包括：DNA1μl，正向荧光引物(10μM)1μl，反向普通引物(10μM)1μl，10*buffer 2μl，dNTP 0.5μl，Taq酶0.5μl，ddH2O 14μl。
[0015]进一步地，在步骤(3)中，所述PCR扩增反应程序为：95℃ 5min，95℃ 30s、62
‑
52℃ 30s、72℃ 30s共10个循环，95℃ 30s、52℃ 30s、72℃ 30s共25个循环，72℃ 7min。
[0016]进一步地，所述电泳条带中存在双条带说明待测罗氏沼虾为铁壳虾个体。
[0017]本专利技术还提供一种如上所述的鉴定罗氏沼虾中铁壳虾个体的引物或如上所述的
试剂盒在鉴定罗氏沼虾中铁壳虾个体方面的应用。
[0018]本专利技术公开了以下技术效果：
[0019]本专利技术提供一种鉴定罗氏沼虾中铁壳虾个体的引物，利用该引物对罗氏沼虾肌肉组织进行检测，便于采样，可将检测虾的时间提前，甚至在虾苗阶段就可以将铁壳虾个体检测出来，可缩短铁壳虾的养殖时间，节省养殖的人力、物力和后期投入。
[0020]利用本专利技术引物构建的检测方法，相对于传统的通过表型数据选育，不仅成本低、操作简便，结果准确，并且该方法简单易行，可重复性强，在普通实验室即可进行。
附图说明
[0021]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0022]图1为引物筛选的凝胶电泳结果MRMSSR
‑1‑
8；
[0023]图2为引物筛选的凝胶电泳结果MRMSSR
‑9‑
16；
[0024]图3为引物筛选的凝胶电泳结果MRMSSR
‑
17
‑
24；
[0025]图4为引物筛选的凝胶电泳结果MRMSSR
‑
25
‑
32；
[0026]图5为引物MRMSSR
‑
7在铁壳虾雌虾肌肉中的毛细管电泳结果；
[0027]图6为引物MRMSSR
‑
7仅在铁壳虾雄虾及正常虾中的毛细管电泳结果。
具体实施方式
[0028]现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
[0029]应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
[0030]除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
[0031]在不背离本专利技术的范围或精神的情况下，可对本专利技术说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本专利技术的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本专利技术说明书和实施例仅是示例性的。
[0032]关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
[0033]实施例1
[0034]1、引物设计
[0035]对正常个体MRCK
‑
M和铁壳虾MR_M的罗氏沼虾肌肉组织进行转录组测序，根据测序得到的序列和位点，批量设计引物，共筛选获得32条序列，设计引物32对，如表1所示。引物由上海Sangon生物工程股份有限公司合成。
[0036]表1 32对引物
[0037][0038][0039][0040]2、引物筛选
[0041]反应体系：20μl：DNA模板1μl、上游引物0.5μl、下游引物0.5μl、2*GoldStar Best MasterMix 10μl(购自康为世纪)和水8μl。
[0042]PCR反应条件：95℃ 5min，95℃ 30s、60
‑
45℃本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种鉴定罗氏沼虾中铁壳虾个体的引物，其特征在于，包括：MRMSSR
‑
7AF：CAACTGGTCACGCAAATCAA；MRMSSR
‑
7AR：GAGTTCAGCCTCATACCCCA。2.一种试剂盒，其特征在于，包括权利要求1所述的引物。3.一种检测罗氏沼虾中铁壳虾个体的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)提取待测罗氏沼虾的肌肉组织RNA；(2)对所得RNA进行cDNA反转录；(3)利用权利要求1所述的引物进行PCR扩增，获得扩增产物；(4)对所得扩增产物进行毛细管电泳，根据电泳条带判断待测罗氏沼虾中是否为铁壳虾个体。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述PCR扩增体...

【专利技术属性】
技术研发人员：李喜莲，高强，慎佩晶，孟纪伦，蒋文枰，徐洋，程海华，
申请(专利权)人：浙江省淡水水产研究所，
类型：发明
国别省市：