靶向DNA去甲基化的方法、融合蛋白及其应用技术

技术编号:33631115 阅读:35 留言:0更新日期:2022-06-02 01:35
本发明专利技术涉及一种靶向的DNA去甲基化方法(Mini

【技术实现步骤摘要】
靶向DNA去甲基化的方法、融合蛋白及其应用


[0001]本专利技术属于生物
,具体是涉及一种靶向DNA去甲基化的方法、融合蛋白及其应用。

技术介绍

[0002]DNA甲基化是最常见的一种DNA修饰形式,通常是在胞嘧啶5号碳位上共价连接一个甲基基团,使得胞嘧啶(C)转为5

甲基胞嘧啶(5mC)。DNA甲基化导致染色质结构、DNA与蛋白质结合能力等的改变,从而影响基因表达和遗传性状。DNA甲基化是可逆的,通常甲基化抑制基因表达,而去甲基化促进基因表达。因此,甲基化和去甲基化在不改变DNA序列的前提下调控了基因表达,是最常见的表观遗传调控类型之一。真核生物的DNA甲基化通常发生在基因组上CpG岛位置(CpG岛是指基因组富含CG双核苷酸的某些区段,主要位于基因的启动子和外显子区域)。正确的DNA甲基化与生长发育、生理状态等密切相关,错误的DNA甲基化会导致生长发育异常、促进癌症发生和发展。例如,Ras相关区域家族1A(Ras association domain family 1A,RASSF1A)是一个典型的抑癌基因,其编码本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白,其特征在于,其包括由截短后的CjCas9以及截短后的ROS1通过包括连接子的中间序列连接而成,其中,所述截短后的CjCas9为:CjCas9蛋白被移除其481

640位氨基酸、剩余氨基酸用连接子连接、并进行D8A点突变的氨基酸片段;所述截短后的ROS1为:ROS1蛋白被移除其1

509位氨基酸和628

855位氨基酸、剩余氨基酸用连接子连接的氨基酸片段,且所述ROS1蛋白的971位的氨基酸为天冬氨酸。2.根据权利要求1所述的融合蛋白,其特征在于,所述截短后的CjCas9的氨基酸组成从N端到C端依次为:SEQ ID NO.1或其经过一个或多个氨基酸突变、取代但生物活性不变的序列、连接子、和SEQ ID NO.2经过一个或多个氨基酸突变、取代但生物活性不变的序列。3.根据权利要求1或2所述的融合蛋白,其特征在于,所述截短后的ROS1的氨基酸组成从N端到C端依次为:SEQ ID NO.3或其经过一个或多个氨基酸突变、取代但生物活性不变的序列、连接子、和SEQ ID NO.4经过一个或多个氨基酸突变、取代但生物活性不变的序列。4.根据权利要求1

3任一项所述的融合蛋白,其特征在于,所述融合蛋白从N端到C端的包括:SEQ ID NO.1或其经过一个或多个氨基酸突变、取代但生物活性不变的序列、连接子、和SEQ ID NO.2经过一个或多个氨基酸突变、取代但生物活性不变的序列;中间序列;SEQ ID NO.3或其经过一个或多个氨基酸突变、取代但生物活性不变的序列、连接子、和SEQ ID NO.4经过一个或多个氨基酸突变、取代但生物活性不变的序列。5.根据权利要求1所述的融合蛋白,其特征在于,所述中间序列包括NLS核定位信号肽、酶切位点和连接子构成。6.根据权利要求1所述的融合蛋白,其特征在于,所述融合蛋白的截短后的CjCas9的前端还具有前序序列,所述前序序列包括NLS核定位信号肽和酶切位点。7.编码权利要求1

6任一项融合蛋白的核苷酸序列,或为上述核苷酸序列且具有一个或多个核苷酸突变,但编码相同氨基酸的核苷酸序列。8.表达权利要求1
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【专利技术属性】
技术研发人员:余细勇朱昱光申翱张灵敏
申请(专利权)人:广州医科大学
类型:发明
国别省市:

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