一种融合蛋白及含有其的由双脱氨酶介导的碱基编辑系统和应用技术方案

本发明专利技术公开了一种融合蛋白及含有其的由双脱氨酶介导的碱基编辑系统和应用。所述融合蛋白包括核酸酶、胞嘧啶脱氨酶和腺嘌呤脱氨酶，所述核酸酶包括含有D10A突变的SpCas9蛋白。本发明专利技术所述融合蛋白能够和sgRNA形成复合物组成由双脱氨酶介导的碱基编辑系统，在该系统中，sgRNA与融合蛋白形成复合物后，sgRNA能引导融合蛋白对靶序列进行识别和切割，并发生类型多样的碱基编辑。使用本发明专利技术的碱基编辑系统，可以高效地实现包括C

【技术实现步骤摘要】
一种融合蛋白及含有其的由双脱氨酶介导的碱基编辑系统和应用


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种融合蛋白及含有其的由双脱氨酶介导的碱基编辑系统和应用。

技术介绍

[0002]利用越来越广泛的高通量测序技术，人们已经在人类及动植物基因组上，发现了大量与人类疾病或者生物性状相关的基因突变体，包括涉及多个碱基突变的随机插入或删除，或单核苷酸变异(single nucleotide variants，SNVs)。然而，这些存在的突变——尤其是特定基因区域上的碱基突变——与基因的结构及功能之间的关系尚未得到明确的证实。要建立特定基因与基因功能、基因特异性点突变与特定功能之间的联系，最有效的方法是建立全基因组突变文库或者与某特定基因相关的饱和突变文库，通过功能性筛选和富集，以及PCR扩增和深度测序分析，来发掘与表型相关的基因或者对特定基因的核苷酸突变进行大规模的功能表征。
[0003]基于CRISPR/Cas9的基因sgRNA文库筛选，是目前使用最为广泛可用于全基因组范围突变库建立的工具，但是CRISPR/Cas9系统一般只能通过插入或删本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括核酸酶、胞嘧啶脱氨酶和腺嘌呤脱氨酶，所述核酸酶包括含有D10A突变的SpCas9蛋白；所述融合蛋白具有包括式(Ⅰ)或式(Ⅱ)所示的结构；A
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L1‑
B
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L2‑
C
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式(Ⅰ)；B
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L1‑
C
‑
L2‑
A
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式(Ⅱ)；其中A为胞嘧啶脱氨酶，B为腺嘌呤脱氨酶，C为核酸酶，L1和L2为无或各自独立地为连接肽。2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，所述胞嘧啶脱氨酶包括鼠源胞嘧啶脱氨酶或人源胞嘧啶脱氨酶；优选地，所述鼠源胞嘧啶脱氨酶包括APOBEC1；优选地，所述人源胞嘧啶脱氨酶包括APOBEC3A；优选地，所述APOBEC1的氨基酸序列包括SEQ ID NO.1所示的序列；优选地，所述APOBEC3A的氨基酸序列包括SEQ ID NO.2所示的序列；优选地，所述人源胞嘧啶脱氨酶还包括改造的APOBEC3Ai，所述改造的APOBEC3Ai包括SEQ ID NO.3所示的序列；优选地，所述腺嘌呤脱氨酶包括wild
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type ecTadA
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ecTadA*7.10、ecTadA8e或含有V106W突变的ecTadA8e；优选地，所述wild
‑
type ecTadA
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ecTadA*7.10的氨基酸序列包括SEQ ID NO.4所示的序列；优选地，所述ecTadA8e的氨基酸序列包括SEQ ID NO.5所示的序列；优选地，所述含有V106W突变的ecTadA8e的氨基酸序列包括SEQ ID NO.6所示的序...

【专利技术属性】
技术研发人员：赖良学，王可品，梁艳慧，谢精科，
申请(专利权)人：中国科学院广州生物医药与健康研究院，
类型：发明
国别省市：