【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】检测MTBR tau同种型的方法及其用途
[0001]相关申请的交叉引用本申请要求于2019年8月13日提交的美国临时申请号62/886,165、于2020年2月6日提交的美国临时申请号62/970,950、以及于2020年6月26日提交的美国临时申请号63/044,836的优先权，所述美国临时申请各自在此通过引用以其整体并入。
[0002]政府权利本专利技术在由美国国立卫生研究院(National Institutes of Health)授予的NS095773下，由政府支持完成。政府在本专利技术中拥有一定权利。
[0003]序列表的引用本申请含有序列表，其已经由EFS
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Web以ASCII格式提交，并且在此通过引用以其整体并入。ASCII副本创建于年月日，命名为“665135_ST25.txt”且大小为14 KB字节。
[0004]本公开内容涵盖将血液或CSF样品转化成适合于通过质谱法、免疫测定法或本领域已知的其它测定法定量MTBR tau种类的方法。本公开内容还涵盖血液或CSF中的MTBR t
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于测量生物样品中的tau的方法，所述方法包括：(a)提供选自血液样品或CSF样品的生物样品，其中所述生物样品(i)任选地包含同位素标记的tau的内部标准，并且(ii)任选地耗尽淀粉样蛋白β、N末端tau、中部结构域tau或其任何组合；(b)通过蛋白质沉淀从生物样品中去除蛋白质，并分离沉淀的蛋白质以获得上清液；(c)通过固相提取从上清液中纯化tau；(d)用蛋白酶切割纯化的tau，并且然后任选地通过固相提取使所得的切割产物脱盐，以获得包含tau的蛋白酶解肽的样品；和(e)对包含tau的蛋白酶解肽的样品执行液相层析
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质谱法，以检测且测量tau的至少一种蛋白酶解肽的量。2.权利要求1的方法，其中使所述生物样品耗尽淀粉样蛋白β、N末端tau、中部结构域tau或其任何组合。3.权利要求2的方法，其中(i)使所述生物样品耗尽淀粉样蛋白β、N末端tau和中部结构域tau，(ii)使所述生物样品耗尽N末端tau和中部结构域tau，或(iii)使所述生物样品耗尽中部结构域tau。4.权利要求1的方法，其中所述步骤(c)中的固相包含吸附tau的反相吸附剂。5. 前述权利要求中任一项的方法，其中：步骤(b)包括混合酸以沉淀生物样品的蛋白质，任选地其中所述酸是高氯酸；和/或在步骤(e)中，所述液相层析
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质谱法通过纳米
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LC/MS系统来执行。6.一种用于测量生物样品中的tau的方法，所述方法包括：(a)通过亲和力耗尽降低生物样品中的N末端tau、中部结构域tau或N末端tau和中部结构域tau，并且任选地通过亲和力耗尽降低淀粉样蛋白β，其中所述生物样品是血液样品或CSF样品，并且所述生物样品任选地包含同位素标记的tau的内部标准；(b)通过包括以下的方法富集MTBR tau：(i)通过蛋白质沉淀从生物样品中去除另外的蛋白质，并分离沉淀的蛋白质以获得上清液，并且然后通过固相提取从上清液中纯化tau，或(ii)使MTBR tau亲和纯化，从而通过(i)或(ii)产生富集的MTBR tau；(c)用蛋白酶切割富集的MTBR tau，并且然后任选地通过固相提取使所得的切割产物脱盐，以获得包含tau的蛋白酶解肽的样品；和(d)对包含tau的蛋白酶解肽的样品执行液相层析
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质谱法(LC/MS)，以检测且测量tau的至少一种蛋白酶解肽的量。7. 权利要求6的方法，其中步骤(a)包括降低(i) N末端tau、中部结构域tau或N末端tau和中部结构域tau，和(ii)淀粉样蛋白β。8. 权利要求6的方法，其中所述生物样品包含人tau，并且其中步骤(a)进一步包括使生物样品与至少一种表位结合剂接触，所述表位结合剂与tau
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441的包含端点在内的氨基酸1至243内的表位特异性结合；或使生物样品与第一表位结合剂和第二表位结合剂接触，所述第一表位结合剂与tau
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441的包含端点在内的氨基酸1至103内的表位特异性结合，所述第二表位结合剂与tau
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441的包含端点在内的氨基酸104至243内的表位特异性结合；或使生物样品与第一表位结合剂、第二表位结合剂和第三表位结合剂接触，所述第一表
ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7和SEQ ID NO: 9的氨基酸序列。21. 权利要求19的方法，其中步骤(d)包括检测且测量tau的至少两种蛋白酶解肽的浓度，其中所述tau的两种蛋白酶解肽具有选自SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8和SEQ ID NO: 9的氨基酸序列。22. 权利要求21的方法，其中所述tau的至少两种蛋白酶解肽具有SEQ ID NO: 6和SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 6和SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 3和SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 3和SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 3和SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 4和SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 4和SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 5和SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 5和SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 4和SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 5和SEQ ID NO: 6、或者SEQ ID NO: 9和SEQ ID NO: 5的氨基酸序列。23.权利要求6至11中任一项的方法，其中所述蛋白酶是胰蛋白酶。24. 权利要求23的方法，其中步骤(d)包括检测且测量MTBR tau的至少一种蛋白酶解肽的浓度，其中所述tau的蛋白酶解肽具有选自SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8和SEQ ID NO: 9的氨基酸序列。25. 权利要求23的方法，其中步骤(d)包括检测且测量MTBR tau的至少两种蛋白酶解肽的浓度，其中所述tau的两种蛋白酶解肽具有选自SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8和SEQ ID NO: 9的氨基酸序列。26. 权利要求25的方法，其中所述MTBR tau的至少两种蛋白酶解肽具有SEQ ID NO: 6和SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 6和SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 3和SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 3和SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 3和SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 4和SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 4和SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 5和SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 5和SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 4和SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 5和SEQ ID NO: 6、以及SEQ ID NO: 9和SEQ ID NO: 5的氨基酸序列。27.权利要求12的方法，其中所述蛋白酶是胰蛋白酶。28.权利要求13的方法，其中所述蛋白酶是胰蛋白酶。29.权利要求15的方法，其中所述蛋白酶是胰蛋白酶。30. 权利要求27、28或29中任一项的方法，其中步骤(d)包括检测且测量MTBR tau的至少一种蛋白酶解肽的浓度，其中所述tau的蛋白酶解肽具有选自SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8和SEQ ID NO: 9的氨基酸序列。31. 权利要求27、28或29中任一项的方法，其中步骤(d)包括检测且测量MTBR tau的至少两种蛋白酶解肽的浓度，其中所述tau的蛋白酶解肽具有选自SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 8和SEQ ID NO: 9的氨基酸序列。
32. 权利要求31的方法，其中所述MTBR tau的至少两种蛋白酶解肽具有SEQ ID NO: 6和SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 6和SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 3和SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 3和SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 4和SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 4和SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 5和SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 5和SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 2和SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 4和SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 5和SEQ ID NO: 6、以及SEQ ID NO: 9和SEQ ID NO: 5的氨基酸序列。33.权利要求6至32中任一项的方法，其中所述方法进一步包括检测且测量在步骤(a)中从生物样品中去除的N末端tau、中部结构域tau或淀粉样蛋白β的浓度。34. 一种用于测量受试者中的阿尔茨海默氏病(AD)有关病理状况的方法，所述方法包括：提供从受试者中获得的处理的CSF或血液样品，其中使所述CSF或血液样品耗尽中部结构域tau且富集MTBR tau；和在所述处理的样品中，定量包含SEQ ID NO: 3的氨基酸序列的MTBR tau种类、包含SEQ ID NO: 6的氨基酸序列的MTBR tau种类、包含SEQ ID NO: 7的氨基酸序列的MTBR tau种类、包含SEQ ID NO: 8的氨基酸序列的MTBR tau种类或其组合，其中所述定量的MTRB
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tau种类的量或其比率是受试者的脑中的AD有关病理状况的表示。35.一种用于测量受试者中的阿尔茨海默氏病(AD)有关病理状况的方法，所述方法包括根据权利要求6至18中任一项的方法测量CSF或血液样品中的tau，其中所述测量的tau是包含SEQ ID NO: 3的氨基酸序列的MTBR tau种类、包含SEQ ID NO: 6的氨基酸序列的MTBR tau种类、包含SEQ ID NO: 7的氨基酸序列的MTBR tau种类、包含SEQ ID NO: 8的氨基酸序列的MTBR tau种类或其组合，其中所述测量的MTRB
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tau种类的量或其比率是受试者的脑中的AD有关病理状况的表示。36.权利要求34或35的方法，其中所述AD有关病理状况是受试者的脑中的tau沉积。37.权利要求34或35的方法，其中所述AD有关病理状况是受试者的脑或脑动脉中的淀粉样蛋白β沉积。38. 一种用于测量受试者的脑中的阿尔茨海默氏病(AD)有关tau沉积的方法，所述方法包括：提供从受试者中获得的处理的CSF或血液样品，其中使所述处理的CSF或血液样品耗尽中部结构域tau且富集MTBR tau；和在所述处理的样品中，定量所述处理的CSF或血液样品中的包含SEQ ID NO: 3 (LQTAPVPMPDLK)的氨基酸序列的MTBR tau种类，其中所述定量的MTRB
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tau种类的量是受试者的脑中的AD有关tau沉积的表示。39.一种用于测量受试者的脑中的阿尔茨海默氏病(AD)有关tau沉积的方法，所述方法包括根据权利要求6至18中任一项的方法测量CSF或血液样品中的tau，其中所述测量的tau是包含SEQ ID NO: 3 (LQTAPVPMPDLK)的氨基酸序列的MTBR tau种类，并且其中所述测量的MTRB
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tau种类的量是受试者的脑中的AD有关病理状况的表示。40. 一种用于测量受试者的脑中的阿尔茨海默氏病(AD)有关tau沉积的方法，所述方法包括：提供从受试者中获得的处理的CSF或血液样品，其中使所述CSF或血液样品耗尽中部结
ID NO: 6的氨基酸序列的MTBR tau种类、包含SEQ ID NO: 7的氨基酸序列的MTBR tau种类、包含SEQ ID NO: 8的氨基酸序列的MTBR tau种类或其组合；和计算第二样品与第一样品中定量的MTBR tau种类之间的差异，其中所述第二样品中定量的...
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