靶向CD7的嵌合抗原受体及其用途制造技术

本发明专利技术提供一种工程化免疫细胞，其特征在于：(1)表达包含抗原结合区的嵌合抗原受体，所述抗原结合区包含抗CD7抗体；(2)内源性CD7、至少一种TCR/CD3基因和至少一种MHC

【技术实现步骤摘要】
靶向CD7的嵌合抗原受体及其用途


[0001]本专利技术属于免疫治疗领域。更具体地，本专利技术涉及靶向CD7的嵌合抗原受体，及其在治疗疾病中的用途。

技术介绍

[0002]近几年，癌症免疫治疗技术发展迅速，尤其是嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)相关的免疫疗法，作为一种新型的过继性免疫治疗技术，已经在多种实体肿瘤和血液肿瘤的治疗中显示出非常显著的临床疗效。
[0003]根据构建CAR-T细胞所用的T细胞的来源不同，可以分成自体CAR-T细胞和同种异体CAR-T细胞(也称为通用型CAR-T)两类。自体CAR-T细胞的优势在于不会产生免疫排斥风险，因为起始T细胞来自于接受CAR-T疗法的患者本身；但其缺点也非常明显：造价高昂、制备周期长。因此，越来越多的研究聚焦于通用型CAR-T细胞的开发。通用型CAR-T可以用健康供体外周血分离的T细胞进行制备，大大缩短患者等待治疗的时间。此外，从健康供体获得的T细胞的活力和功能也优于患者来源的T细胞，这可以增加CAR细胞的感染率，提高治疗效果。
[0004]CD7是一种细胞表面糖蛋白，分子量为约40kDa，属于免疫球蛋白超家族的一员。CD7在大多数的T细胞、NK细胞、髓细胞、T细胞急性淋巴细胞白血病/淋巴瘤、急性粒细胞性白血病和慢性粒细胞白血病中均有表达。据报道，CD7分子通过与其配体K12/SECTM1的结合在T细胞活化期间起到共刺激信号的作用。并且，破坏小鼠T祖细胞中的CD7分子依然会产生正常的T细胞发育和体内平衡，表明CD7似乎对T细胞的发育和功能不会产生关键性的影响，这使其成为治疗T细胞急性淋巴细胞白血病(T-ALL)的非常合适的治疗靶点。实际上，CD7作为治疗白血病和淋巴瘤的细胞毒性分子的靶标已被广泛研究。
[0005]目前针对CD7的CAR-T疗法，尤其是通用型CAR-T疗法仍然非常有限。因此，本专利技术旨在提供一种高效的靶向CD7的通用型CAR-T细胞，及其在治疗疾病中的用途。

技术实现思路

[0006]在第一个方面，本专利技术提供一种工程化免疫细胞，其特征在于：(1)表达包含抗原结合区的嵌合抗原受体，所述抗原结合区包含抗CD7抗体；(2)内源性CD7、至少一种TCR/CD3基因和至少一种MHC-II类相关基因的表达被抑制或沉默。
[0007]在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体包含抗CD7抗体、跨膜结构域和胞内信号传导结构域。
[0008]在一个实施方案中，所述抗CD7抗体包含分别如SEQ ID NO：1、2和3所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，和如SEQ ID NO：4、5和6所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3。在一个优选的实施方案中，所述抗CD7抗体包含与选自SEQ ID NO：7、10、13、16和19所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区和与选自SEQ ID NO：8、11、14、17和20所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区。在一个优选的实施方案中，所述抗CD7抗体的氨基酸序列
选自SEQ ID NO：9、12、15、18和21。
[0009]在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体的抗原结合区还包含靶向第二抗原的抗体，所述第二抗原选自：TSHR、CD19、CD123、CD22、BAFF-R、CD30、CD171、CS-1、CLL-1、CD33、EGFRvIII、GD2、GD3、BCMA、GPRC5D、Tn Ag、PSMA、ROR1、FLT3、FAP、TAG72、CD38、CD44v6、CEA、EPCAM、B7H3、KIT、IL-13Ra2、间皮素、IL-l lRa、PSCA、PRSS21、VEGFR2、LewisY、CD24、PDGFR-β、SSEA-4、CD20、AFP、Folate受体α、ERBB2(Her2/neu)、MUC1、EGFR、CS1、CD138、NCAM、Claudin18.2、Prostase、PAP、ELF2M、Ephrin B2、IGF-I受体、CAIX、LMP2、gploo、bcr-abl、酪氨酸酶、EphA2、Fucosyl GMl、sLe、GM3、TGS5、HMWMAA、o-乙酰基-GD2、Folate受体β、TEM1/CD248、TEM7R、CLDN6、GPRC5D、CXORF61、CD97、CD 179a、ALK、多聚唾液酸、PLAC1、GloboH、NY-BR-1、UPK2、HAVCR1、ADRB3、PANX3、GPR20、LY6K、OR51E2、TARP、WT1、NY-ESO-1、LAGE-la、MAGE-A1、豆荚蛋白、HPV E6、E7、MAGE Al、ETV6-AML、精子蛋白17、XAGE1、Tie 2、MAD-CT-1、MAD-CT-2、Fos相关抗原1、p53、p53突变体、前列腺特异性蛋白、存活蛋白和端粒酶、PCTA-l/Galectin 8、MelanA/MARTl、Ras突变体、hTERT、肉瘤易位断点、ML-IAP、ERG(TMPRSS2 ETS融合基因)、NA17、PAX3、雄激素受体、Cyclin Bl、MYCN、RhoC、TRP-2、CYP1B 1、BORIS、SART3、PAX5、OY-TES 1、LCK、AKAP-4、SSX2、RAGE-1、人端粒酶逆转录酶、RU1、RU2、肠道羧酸酯酶、mut hsp70-2、CD79a、CD79b、CD72、LAIR1、FCAR、LILRA2、CD300LF、CLEC12A、BST2、EMR2、LY75、GPC3、FCRL5、IGLL1、PD1、PDL1、PDL2、TGFβ、APRIL、NKG2D和它们的任意组合。更优选地，所述靶向第二抗原的抗体是靶向CD19的抗体。在一个优选的实施方案中，所述抗CD19抗体包含与选自SEQ ID NO：52和55所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的轻链可变区和与选自SEQ ID NO：53和56所示的氨基酸序列具有至少90％同一性的重链可变区。在一个优选的实施方案中，所述抗CD19抗体的氨基酸序列选自SEQ ID NO：54和57。
[0010]在一个实施方案中，所述跨膜结构域选自以下蛋白质的跨膜结构域：TCRα链、TCRβ链、TCRγ链、TCRδ链、CD3ζ亚基、CD3ε亚基、CD3γ亚基、CD3δ亚基、CD45、CD4、CD5、CD8α、CD9、CD16、CD22、CD33、CD28、CD37、CD64、CD80、CD86、CD134、CD137和CD154。优选地，跨膜结构域选自CD8α、CD4和CD28的跨膜结构域。
[0011]在一个实施方案中，所述胞内信号传导结构域选自以下蛋白的胞内区：FcRγ、FcRβ、CD3γ、CD3δ、CD3ε、CD3ζ、CD22、CD79a、CD79b和CD66d。优选地，所述胞内信号传导结构域包含CD3ζ胞内区。
[0012]在一个实施方案中，所述嵌合抗原受体还包含一个或多个共刺激结构域，其选自以下蛋白质的胞内区：TLR1、TLR2、TLR3、TLR4、TLR5、TLR6、TLR7、TLR8本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种工程化免疫细胞，其特征在于：(1)表达包含抗原结合区的嵌合抗原受体，所述抗原结合区包含抗CD7抗体；(2)内源性CD7、至少一种TCR/CD3基因和至少一种MHC-II类相关基因的表达被抑制或沉默。2.权利要求1所述的工程化免疫细胞，其中所述嵌合抗原受体包含抗CD7抗体、跨膜结构域和胞内信号传导结构域。3.权利要求1或2所述的工程化免疫细胞，其中所述抗CD7抗体包含分别如SEQ ID NO：1、2和3所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，和如SEQ ID NO：4、5和6所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3。4.权利要求1-3任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述嵌合抗原受体的抗原结合区还包含靶向第二抗原的抗体或其功能性片段，所述第二抗原选自：TSHR、CD19、CD123、CD22、BAFF-R、CD30、CD171、CS-1、CLL-1、CD33、EGFRvIII、GD2、GD3、BCMA、GPRC5D、Tn Ag、PSMA、ROR1、FLT3、FAP、TAG72、CD38、CD44v6、CEA、EPCAM、B7H3、KIT、IL-13Ra2、间皮素、IL-l lRa、PSCA、PRSS21、VEGFR2、LewisY、CD24、PDGFR-β、SSEA-4、CD20、AFP、Folate受体α、ERBB2(Her2/neu)、MUC1、EGFR、CS1、CD138、NCAM、Claudin18.2、Prostase、PAP、ELF2M、Ephrin B2、IGF-I受体、CAIX、LMP2、gploo、bcr-abl、酪氨酸酶、EphA2、Fucosyl GMl、sLe、GM3、TGS5、HMWMAA、o-乙酰基-GD2、Folate受体β、TEM1/CD248、TEM7R、CLDN6、GPRC5D、CXORF61、CD97、CD 179a、ALK、多聚唾液酸、PLAC1、GloboH、NY-BR-1、UPK2、HAVCR1、ADRB3、PANX3、GPR20、LY6K、OR51E2、TARP、WT1、NY-ESO-1、LAGE-la、MAGE-A1、豆荚蛋白、HPV E6、E7、MAGE Al、ETV6-AML、精子蛋白17、XAGE1、Tie 2、MAD-CT-1、MAD-CT-2、Fos相关抗原1、p53、p53突变体、前列腺特异性蛋白、存活蛋白和端粒酶、PCTA-l/Galectin 8、MelanA/MARTl、Ras突变体、hTERT、肉瘤易位断点、ML-IAP、ERG(TMPRSS2 ETS融合基因)、NA17、PAX3、雄激素受体、Cyclin Bl、MYCN、RhoC、TRP-2、CYP1B 1、BORIS、SART3、PAX5、OY-TES 1、LCK、AKAP-4、SSX2、RAGE-1、人端粒酶逆转录酶、RU1、RU2、肠道羧酸酯酶、mut hsp70-2、CD79a、CD79b、CD72、LAIR1、FCAR、LILRA2、CD300LF、CLEC12A、BST2、EMR2、LY75、GPC3、FCRL5、IGLL1、PD1、PDL1、PDL2、TGFβ、APRIL、NKG2D和它们的任意组合。5.权利要求1-4任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述嵌合抗原受体包含抗CD7抗体和抗CD19抗体。6.权利要求1-5任一项所述的工程化免疫细胞，其中所述跨膜结构域选自以下蛋白质的跨膜结构域：TCRα链、TCRβ链、TCRγ链、TCRδ链、CD3ζ亚基、CD3ε亚基、CD3γ亚基、CD3δ亚基、CD45、CD4、CD5、CD...

【专利技术属性】
技术研发人员：周亚丽，姜小燕，陈功，任江涛，贺小宏，王延宾，韩露，
申请(专利权)人：江苏浦珠生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：