胆汁细菌作为肝门部胆管癌诊断及预后标志物的用途制造技术

本发明专利技术公开了胆汁细菌作为肝门部胆管癌诊断及预后标志物的用途，本发明专利技术首次发现f_Bacillaceae、g_Herbaspirillum、g_Anoxybacillus、g_Xylophilus、和/或o_Verrucomicrobiales能够用于早期肝门部胆管癌的诊断，s_Methylobacterium_komagatae能够用于预测肝门部胆管癌的预后，经验证发现，所述标志物对肝门部胆管癌的诊断和预后具有较高的诊断效能和准确性，在临床上具有很好的应用前景。用前景。用前景。

【技术实现步骤摘要】
胆汁细菌作为肝门部胆管癌诊断及预后标志物的用途


[0001]本专利技术属于生物医学
，具体地，本专利技术涉及胆汁细菌作为肝门部胆管癌诊断及预后标志物的用途，更具体地，本专利技术所述的诊断标志物包括f_Bacillaceae、g_Herbaspirillum、g_Anoxybacillus、g_Xylophilus、和/或o_Verrucomicrobiales，本专利技术所述的预后标志物为s_Methylobacterium_komagatae。

技术介绍

[0002]胆管癌(Cholangiocarcinoma，CCA)是起源于肝管上皮细胞的恶性肿瘤，其发病率在肝胆恶性肿瘤中位居第二位，仅次于肝细胞癌。胆管癌根据其发病部位不同可分为肝内胆管癌(Intrahepatic cholangioncarciaoma，ICCA)、肝门部胆管癌(Hilar cholangiocarcinoma，HCCA)、远端胆管癌(Distal cholangiocarcinoma，DCCA)，而其中肝门部胆管癌最为常见。肝门部胆管癌约占所有肝外胆管癌的40％
‑
60％，是一种位于胆囊管开口及以上的肝外胆管癌，常侵犯肝管汇合部甚至一侧或双侧肝管的黏膜上皮癌，又称Klatskin肿瘤，占所有人类恶性肿瘤的2％。肝门部胆管癌患者的预后一般较差，根治性R0切除术后与胆管癌相关的5年生存率为10％
‑
40％。原发性硬化性胆管炎、胆总管囊肿、胆石症、胆囊炎和寄生虫感染等都是肝门部胆管癌的风险因素。然而，导致肝门部胆管癌的发展和进展的基本机制目前很少被报道。
[0003]近年来，肝门部胆管癌在亚洲国家的发病率呈逐年上升的趋势。外科手术根治切除肿瘤是其目前最佳的治疗方式，但因肝门部胆管癌起病隐匿，缺乏特异的早期症状，早期不易被发现，患者多于出现黄疸、腹痛等明显症状时才就诊，而此时多已进展至中晚期。同时，因肝门部胆管癌的解剖部位特殊、肿瘤早期易发生转移，导致其总体手术切除率不高，预后较差，术后复发率高。而肝门部胆管癌对放化疗敏感性低，晚期病人多缺乏有效的治疗方法。肝门部胆管癌是一种恶性程度较高、手术风险大、术后并发症较多及远期预后较差的胆管恶性肿瘤，早期诊断是提高其远期疗效的关键。目前常用于诊断肝门部胆管癌的血清生物标志物、计算机断层扫描和B型超声检查的敏感性和特异性都很低，因此，探索肝门胆管癌发生发展过程中起关键作用的分子，寻找特异性高和敏感性强的生物标志物作为肝门胆管癌诊断、治疗和预后的靶点，对于早期诊断肝门部胆管癌、早期干预治疗以及改善肝门部胆管癌患者的预后均具有重要意义。
[0004]微生物群与健康和疾病密切相关。粪便、口腔、血液和胆汁等来源的微生物组已被定性，以探讨微生物群和宿主之间的关系。胆汁对消化和营养吸收至关重要，其含有蛋白质、脂类、碳水化合物、维生素、矿物盐和其他微量元素。胆汁是一种天生的抗菌洗涤剂样的化合物。研究人员已经发现了原发性硬化性胆管炎(Primary sclerosing cholangitis，PSC)和远端胆管癌(DCCA)中胆汁的细菌特征，这两种疾病都与微生物菌群的失调有关。相关学者经研究发现原发性硬化性胆管炎的特征是上消化道和胆管的菌群发生显著改变，胆道菌群的失调与促炎和潜在致癌剂牛磺酸石胆酸浓度增加有关；胆道微生态紊乱可能是远端胆管癌发展的决定性因素。胆汁微生物群，包括细菌和真菌，目前尚未有肝门部胆管癌患
者中的胆汁微生物群的相关研究和报道，胆汁微生物群是否与肝门部胆管癌的发展和预后有关目前尚不清楚。

技术实现思路

[0005]鉴于此，为了克服目前本领域存在的上述技术问题，本专利技术的目的在于寻找一种全新的灵敏度、特异度均较高的用于诊断肝门部胆管癌的生物标志物，提供胆汁细菌作为肝门部胆管癌诊断及预后标志物的用途。
[0006]本专利技术的上述目的通过以下技术方案得以实现：
[0007]本专利技术的第一方面提供了检测样本中微生物标志物丰度的试剂在制备诊断肝门部胆管癌的产品中的应用。
[0008]进一步，所述微生物标志物为f_Bacillaceae、g_Herbaspirillum、g_Anoxybacillus、g_Xylophilus、和/或o_Verrucomicrobiales中的任意一种或多种；
[0009]优选地，所述微生物标志物为f_Bacillaceae、g_Herbaspirillum、g_Anoxybacillus、g_Xylophilus、和o_Verrucomicrobiales联合。
[0010]进一步，所述样本为受试者的胆汁。
[0011]进一步，在本专利技术中，所述受试者优选为人。
[0012]进一步，所述样本中微生物标志物丰度的检测方法包括宏基因组测序、16S rDNA测序、和/或qPCR定量检测中的任意一种或多种。
[0013]进一步，所述试剂包括检测所述微生物标志物的特异性的引物或探针。
[0014]进一步，在本专利技术中，所述试剂包括(但不限于)所述微生物标志物的特异性的引物或探针，还包括所述微生物标志物的特异性的反义寡核苷酸、适配体或抗体等。
[0015]进一步，所述试剂还包括提取样本DNA的试剂。
[0016]进一步，所述产品包括试剂盒、试纸、或芯片。
[0017]宏基因组测序(Metagenomics sequencing)，是指对特定环境样品中的微生物群体的基因组(尤其是那些种类众多的难于培养的微生物)进行序列测定。测序的过程可分为四步，分别为样品制备、文库构建、上机测序和数据分析。通过宏基因组测序可以进行功能基因的发掘，分析微生物群体基因组成及功能，解读微生物群体的多样性与丰度，发掘和研究新的、具有特定功能的基因。目前宏基因组测序技术为微生物的研究和发展提供了很好的策略，在发现新基因，开发新的微生物活性物质，研究微生物种群结构、基因功能活性、微生物之间的相互协作关系以及微生物与环境之间的关系等方面得到广泛的应用。
[0018]16S rDNA测序(16S rDNA sequencing)，16S rDNA是原核生物编码16S rRNA的基因，长度约为1500bp，由10个保守区和9个可变区(V1
‑
V9)组成，可变区反映了物种间的差异性。16S rDNA测序是通过提取微生物菌群的DNA，选择可变区的特定区段(V3
‑
V4)进行PCR扩增，再通过高通量测序的方法，分析特定环境样品中微生物群体基因组成及功能、微生物群体的多样性与丰度，进而分析微生物与环境、微生物与宿主之间的关系，发现具有特定功能的基因。在医学领域，主要应用于微生物与疾病的关联分析，揭示疾病与健康个体之间微生物的差异。
[0019]进一步，在本专利技术的具体实施方式中，所述诊断肝门部胆管癌为诊断区分肝门部胆管癌与良性胆道疾病。
[0020]本专利技术的第二方面提供了一种用于早期诊断肝门部胆管癌的产品。
[0021]进一步，所述产品中包括检测样本中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.检测样本中微生物标志物丰度的试剂在制备诊断肝门部胆管癌的产品中的应用，其特征在于，所述微生物标志物为f_Bacillaceae、g_Herbaspirillum、g_Anoxybacillus、g_Xylophilus、和/或o_Verrucomicrobiales中的任意一种或多种；优选地，所述微生物标志物为f_Bacillaceae、g_Herbaspirillum、g_Anoxybacillus、g_Xylophilus、和o_Verrucomicrobiales联合。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述样本为受试者的胆汁。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述样本中微生物标志物丰度的检测方法包括宏基因组测序、16S rDNA测序、和/或qPCR定量检测中的任意一种或多种。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂包括检测所述微生物标志物的特异性的引物或探针。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括试剂盒、试纸、或芯片。6.一种用于早期诊断肝门部胆管癌的产品，其特征在于，所述产品中包括检测样本中微生物标志物丰度的试剂，所述微生物标志物为f_Bacillaceae、g_Herbaspirillum、g_Anoxybacillus、g_Xylophilus、和/或o_Verrucomicrobiales中的任意一种或多种；优选地，所述微生物标志物为f_Bacillaceae、g_Herbaspirillum、g_Anoxybacillus、g_Xylophilus、和o_Verrucomicrobiales联合；优选地，所述样本为受试者的胆汁；优选地，所述试剂包括检测所述微生物标志物的特异性的引物或探针；更优选地，所述试剂还包括宏基因组测序用试剂；更优选地，所述试剂还包括16S rDNA测序用试剂；更优选地，所述试剂还包括qPCR定量检测用试剂。7.检测样本中微生物标志物丰度的试剂在制备诊断肝门部胆管癌的系统或装置中的应用，其特征在于，所述微生物标志物...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆荫英，贾晓东，卢姗姗，李爽，雷光林，李因茵，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院第五医学中心，
类型：发明
国别省市：