低甲基化PDGFRL基因作为α辐射损伤预测的分子标志物的用途制造技术

本发明专利技术属于生物检测技术领域，涉及低甲基化PDGFRL基因作为α辐射损伤预测的分子标志物的用途。所述的低甲基化PDGFRL基因是PDGFRL基因的启动子区域的甲基化水平为24.62

【技术实现步骤摘要】
低甲基化PDGFRL基因作为
α
辐射损伤预测的分子标志物的用途


[0001]本专利技术属于生物检测
，涉及低甲基化PDGFRL基因作为α辐射损伤预测的分子标志物的用途。

技术介绍

[0002]α粒子的辐射致癌效应是辐射生物效应研究领域的关注重点。ICRP第31号出版物综述了大量的动物实验结果，认为包括钚在内的α放射性核素的生物效应主要表现为淋巴细胞减少、呼吸功能不全、肺和淋巴结纤维化、细胞变性、肺癌和骨肉瘤等，由于血液受照，淋巴细胞水平降低，会影响动物的免疫能力，进而使肿瘤发生的易感性增高。
[0003]在α辐射致癌损伤的分子机制中，除导致基因结构的改变外，还可通过产生表观遗传改变，可导致某些关键基因的表达变化，影响生物学功能，如促使癌基因激活、抑癌基因失活、干扰细胞周期调控等。
[0004]DNA甲基化是表观遗传修饰的主要形式。PDGFRL(platelet derived growth factor receptor like，血小板衍生生长因子受体，GenBank登陆号：NC_000008:17576433..17643144)的蛋白结构与血小板来源的生长因子受体β的配体结合域具有显著的序列相似性，称为PDGFR“样”蛋白。目前研究结果认为PDGFRL基因作为一种癌基因，参与细胞增殖、发育、血管生成等过程，可能与某些肿瘤的发生发展有关。促癌基因的低甲基化在肿瘤的早期诊断中具有重要的临床意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供低甲基化PDGFRL基因作为α辐射损伤预测的分子标志物的用途，以能够便捷、准确、低成本的进行早期α辐射损伤的预测。
[0006]为实现此目的，在基础的实施方案中，本专利技术提供低甲基化PDGFRL基因作为α辐射损伤预测的分子标志物的用途(即低甲基化PDGFRL基因作为分子标志物用于制备α辐射损伤诊断的试剂盒的用途)，所述的低甲基化PDGFRL基因是PDGFRL基因的启动子区域的甲基化水平为24.62
±
5.93％(对应对照组甲基化水平29.33
±
7.14％，P＜0.05)。
[0007]我国放射作业人员逐年增加，受照途径包括外照射和内照射。α内照射对人体产生持续内照射，但是其健康损伤效应不明确，特异的健康监护指标缺失。DNA甲基化是一种最重要的表观遗传修饰形式。研究证明，DNA甲基化改变是癌症发生早期的重要生物学基础。目前临床上已将DNA甲基化用于癌症早期诊断和预后的指标。在电离辐射致癌的早期分子生物学改变中，DNA甲基化及其调控机制是目前电离辐射生物效应研究的热点。
[0008]在一种优选的实施方案中，本专利技术提供低甲基化PDGFRL基因作为α辐射损伤预测的分子标志物的用途，其中PDGFRL基因的甲基化位点包括启动子区域的cg25912517的CG位点。
[0009]在一种优选的实施方案中，本专利技术提供低甲基化PDGFRL基因作为α辐射损伤预测
的分子标志物的用途，其中所述的辐射损伤为局部或全身的组织器官不良反应(如恶心、呕吐、食欲减退、白细胞下降和/或皮肤发红变痒等)。
[0010]本专利技术的有益效果在于，利用本专利技术的低甲基化PDGFRL基因作为α辐射损伤预测的分子标志物的用途，能够便捷、准确、低成本的进行早期α辐射损伤的预测。
具体实施方式
[0011]通过如下的实施例对本专利技术的实施作进一步说明，但本专利技术的实施方式并不局限于如下的实施例。
[0012]实施例1：
[0013]1、利用基因芯片对α受照人员外周血DNA甲基化检测、分析，初步筛选显著差异甲基化基因
[0014]1)样本的采集
[0015]选取受照人员(钚内照射剂量范围为24.0mSv
‑
2254.0mSv)和对照人员的血液样本。
[0016]2)外周血基因组DNA提取
[0017]提取样本的基因组DNA。采用Illumina公司血液基因组DNA提取试剂盒，按照产品说明书进行样本全血基因组DNA提取。用分光光度计检测提取DNA浓度，同时评估A260/A280比值在1.8
‑
2.0之间，质量满足实验要求，可进行后续实验。
[0018]3)亚硫酸盐转化
[0019]用亚硫酸盐试剂(NaHSO3，生工生物工程(上海)股份有限公司)溶解样本DNA，加入亚硫酸盐反应成分(NaHSO3，生工生物工程(上海)股份有限公司)，在PCR仪中启动循环、扩增(条件见表1)，PCR完成亚硫酸盐作用下的DNA转化。
[0020]表1 PCR反应条件
[0021]序号程序温度时间1变性95℃5min2复性60℃25min3变性95℃5min4复性60℃85min5变性95℃5min6复性60℃175min7保持20℃——
[0022]4)DNA甲基化芯片检测
[0023]采用Illumina850K甲基化芯片(简称850K芯片，Zymo CA，Illumina公司)测定全基因组DNA甲基化水平。
[0024]5)甲基化芯片筛选差异甲基化位点
[0025]①
Δβ值：即为对照组与受照组各CpG位点的甲基化值β相减的结果，即实验组与对照组在每个位点的甲基化的差异程度。
[0026]②
差异分值(Diff Score值)：比较每个基因位点在受照组与对照组之间的表达差异，差异分值取正值表示受照组较对照组甲基化程度升高，取负值则表示降低。
[0027]③
差异甲基化基因位点的筛选标准：
[0028]实验组样本差异分值>|13|且Δβ值>|0.10|，(Δβ值的计算，即为实验组与对照组在每个位点的甲基化的差异程度)。
[0029]利用生物信息分析，筛选出PDGFRL基因启动子区域低甲基化位点，见表2。
[0030]表2初步筛选出PDGFRL基因启动子区域低甲基化位点
[0031][0032]2、利用焦磷酸测序技术对实验验证位点进行人群验证
[0033]1)样本的采集照射及染色体畸变分析
[0034]采集30名左右受照人员(钚内照射剂量范围为24.0mSv
‑
2254.0mSv)和15名左右对照组人员外周血。
[0035]2)外周血基因组DNA提取
[0036]提取样本的基因组DNA。采用Illumina公司血液基因组DNA提取试剂盒，按照产品说明书进行全血基因组DNA提取。用分光光度计检测提取DNA浓度，同时评估A260/A280比值在1.8
‑
2.0之间，质量满足实验要求，可进行后续实验。
[0037]3)焦磷酸测序检测PDGFRL基因甲基化程度
[0038]①
引物设计
[0039]表3 PDGFRL基因引物设计
[0040][0041]②
PCR扩增反应
[0042]表4 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.低甲基化PDGFRL基因作为α辐射损伤预测的分子标志物的用途，其特征在于：所述的低甲基化PDGFRL基因是PDGFRL基因的启动子区域的甲基化水平为24.62
±
5.93％。2.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：古晓娜，薛向明，张艳娜，苏丽霞，林海鹏，杨彪，杨雪，武钊，茹尚敏，段宇建，刘沛瑶，刘晓明，战景明，李建国，
申请(专利权)人：中国辐射防护研究院，
类型：发明
国别省市：