用于检测GIPC1基因5制造技术

本发明专利技术提供了一种用于OPDM致病突变GIPC1基因5

【技术实现步骤摘要】
用于检测GIPC1基因5
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UTR区域CGG扩增次数的PCR检测试剂盒及应用


[0001]本专利技术属于生物
，具体地说，是关于一种基于滑动引物PCR技术的检测OPDM致病突变GIPC1基因5
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UTR区域CGG扩增次数的PCR检测试剂盒及应用。

技术介绍

[0002]眼咽型远端肌病(OPDM)是一种遗传性疾病，其特征是成人发作，上睑下垂，外部眼肌麻痹，面部肌肉无力，四肢远端肌肉无力和萎缩以及咽部受累，导致吞咽困难和构音障碍。骨骼肌活检显示肌病改变，液泡增加。
[0003]OPDM致病突变GIPC1基因是最新发现的一个OPDM的致病基因，目前没有很多有效的方法去检测，常规的PCR方法由于目标区域的序列具有高GC含量及高度重复的特征，不能有效的检测。
[0004]滑动引物PCR技术即三引物PCR(TP-PCR)。滑动引物PCR技术是在引物中添加了待检测的重复序列的重复单元，使得引物可以在重复区域中任意位置结合并扩增，可以减少由于重复序列过长难以扩增导致的假阴性结果。

技术实现思路

[0005]本专利技术针对最新发现的OPDM致病突变GIPC1基因5
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UTR区域的CGG扩增构建了一种基于滑动引物PCR技术检测GIPC1基因5
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UTR区域CGG扩增次数的PCR检测试剂盒，该PCR检测试剂盒对于GIPC1基因5
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UTR区域CGG扩增次数的检测具有明显的优势，且对重复次数较高的样本具有更好的适应性。因此，本专利技术的第一个目的是提供一种用于检测OPDM致病突变GIPC1基因5
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UTR区域CGG扩增次数的PCR检测试剂盒。本专利技术的第二个目的是提供一种用于检测OPDM致病突变GIPC1基因5
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UTR区域CGG扩增次数的PCR检测试剂盒的应用。本专利技术的第三个目的是提供一种非疾病诊断目的的基于滑动引物PCR技术检测GIPC1基因5
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UTR区域CGG扩增次数的方法。
[0006]为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]作为本专利技术的第一个方面，一种用于OPDM致病突变GIPC1基因5
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UTR区域CGG扩增次数的PCR检测试剂盒，包括反应体系，所述反应体系包括甜菜碱、二甲基亚砜、dNTP、5
×
LongAmp Taq反应液、特异性引物对、Taq DNA聚合酶、DNA模板和水，其中，所述特异性引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。
[0008]根据本专利技术，所述反应体系为25μL，包括5M甜菜碱7μL，100％二甲基亚砜1.25μL，2.5mM dNTP 2μL，5
×
LongAmp Taq反应液5μL，特异性引物对各1μL、Taq DNA聚合酶1μL、DNA模板1μL，余量为水。
[0009]根据本专利技术，所述PCR检测试剂盒还包括PCR反应条件：94℃预变性3min；94℃变性30s,64℃退火30s,68℃延伸1min，共扩增35个循环；68℃延伸10min。
[0010]作为本专利技术的第二个方面，一种用于检测OPDM致病突变GIPC1基因5
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UTR区域CGG
扩增次数的PCR检测试剂盒的应用，所述PCR检测试剂盒用于检测OPDM致病突变GIPC1基因5
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UTR区域的CGG扩增次数。
[0011]作为本专利技术的第三个方面，一种非疾病诊断目的的基于滑动引物PCR技术检测GIPC1基因5
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UTR区域CGG扩增次数的方法，包括如下步骤：
[0012]步骤一、以待测样品的基因组DNA为模板，进行滑动引物PCR扩增，获得扩增产物；
[0013]步骤二、对扩增产物进行毛细管电泳，获得CGG重复信息；
[0014]其中，所述扩增的反应体系包括：甜菜碱、二甲基亚砜、dNTP、5
×
LongAmp Taq反应液、特异性引物对、Taq DNA聚合酶、DNA模板和水；
[0015]所述特异性引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。
[0016]根据本专利技术，PCR扩增的反应体系为25μL，包括5M甜菜碱7μL，100％二甲基亚砜1.25μL，2.5mM dNTP 2μL，5
×
LongAmp Taq反应液5μL，特异性引物对各1μL、Taq DNA聚合酶1μL、DNA模板1μL，余量为水。
[0017]根据本专利技术，PCR扩增的反应条件：94℃预变性3min；94℃变性30s,64℃退火30s,68℃延伸1min，共扩增35个循环；68℃延伸10min。
[0018]本专利技术的有益效果：本专利技术的PCR检测试剂盒和检测方法，具有针对性强、操作简便、成本较低、准确率高，能够有效检测GIPC1基因5
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UTR区域CGG扩增次数，可以用于医学辅助诊断、孕前指导、医学研究等，具有较好的应用前景。
附图说明
[0019]图1为检测GIPC1基因的5
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UTR区域CGG扩增的方法的流程示意图。
具体实施方式
[0020]以下结合具体实施例，对本专利技术做进一步说明。应理解，以下实施例仅用于说明本专利技术而非用于限制本专利技术的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或厂商提供的条件进行。
[0021]本专利技术实施例中的DNA Polymerase和DNase-Free water均可通过市售获得。
[0022]本专利技术的实施例中，通过对扩增产物进行毛细管电泳对扩增产物长度进行检测，通过引物设计的预期片段长度计算获得GIPC1基因的5
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UTR区域CGG扩增次数。
[0023]本专利技术的实施例中，样本的来源并不受特别限制。基因组DNA样本是从人源样本中分离，优选的，基因组DNA核酸样本是从健康人或病人的抗凝血样本中分离的，或者是脱离人体的组织血液等。
[0024]本专利技术的实施例中，以提取的基因组DNA为模板进行扩增，其中所使用的聚合酶包括但不限于常规的taq酶、pfu高保真酶或其它聚合酶，优先选用taq DNA聚合酶。
[0025]本专利技术的实施例中，还包括对步骤2的扩增产物纯化回收，纯化方法包括但不限于琼脂糖凝胶回收、磁珠纯化和纯化柱纯化。
[0026]本专利技术的实施例中，将纯化回收的产物定量，使用的荧光定量分析仪定量包括但不限于Qubit。
[0027]本专利技术的实施例中，通过毛细管电泳仪或Sanger测序仪进行检测，优选ABI3500、ABI3730平台。
[0028]实施例1特异性引物对的设计
[0029](1)本实施例的第一引物对和第二引物对都是针对GIPC1基因的5
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UTR区域C本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于OPDM致病突变GIPC1基因5
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UTR区域CGG扩增次数的PCR检测试剂盒，其特征在于，包括反应体系，所述反应体系包括甜菜碱、二甲基亚砜、dNTP、5
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LongAmp Taq反应液、特异性引物对、Taq DNA聚合酶、DNA模板和水，其中，所述特异性引物对的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。2.如权利要求1所述的PCR检测试剂盒，其特征在于，所述反应体系为25μL，包括5M甜菜碱7μL，100％二甲基亚砜1.25μL，2.5mM dNTP 2μL，5
×
LongAmp Taq反应液5μL，特异性引物对各1μL、Taq DNA聚合酶1μL、DNA模板1μL，余量为水。3.如权利要求1所述的PCR检测试剂盒，其特征在于，还包括PCR反应条件：94℃预变性3min；94℃变性30s,64℃退火30s,68℃延伸1min，共扩增35个循环；68℃延伸10min。4.一种用于检测OPDM致病突变GIPC1基因5
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UTR区域CGG扩增次数的PCR检测试剂盒的应用，其特征在于，所述PCR检测试剂盒用于检测OPDM致病突变GIPC1基因5<...

【专利技术属性】
技术研发人员：王曦路，朱雯华，岳冬曰，赵重波，吴群峰，奚剑英，窦同海，杜雪柯，
申请(专利权)人：复旦大学附属华山医院上海市静安区中心医院复旦大学附属华山医院静安分院，
类型：发明
国别省市：