一种提高CAR-T细胞抗肿瘤效果的方法技术

本发明专利技术涉及免疫学技术领域，尤其涉及一种提高CAR

【技术实现步骤摘要】
一种提高CAR
‑
T细胞抗肿瘤效果的方法


[0001]本专利技术涉及免疫学
，尤其涉及一种提高CAR
‑
T细胞抗肿瘤效果的方法。

技术介绍

[0002]重氮氧代正亮氨酸(DON)是一种从链霉菌中分离出来的非蛋白质氨基酸。在分子结构上，DON是由一个碱化基团取代谷氨酰胺侧链氨基形成的重氮酮化合物，是一种谷氨酰胺类似物。DON能够不可逆地抑制一系列谷氨酰胺相关酶活性，阻断谷氨酰胺代谢，具有止痛、抗菌、抗病毒以及抗肿瘤的作用。谷氨酰胺是细胞代谢中重要的氮源和碳源，参与糖酵解、三羧酸循环、氧化磷酸化等代谢途径。研究表明，阻断谷氨酰胺代谢能够抑制肿瘤细胞的增殖，控制肿瘤生长。2019年，发表在Science上题为“阻断谷氨酰胺诱导不同代谢程序从而抵抗肿瘤免疫逃逸”的文章揭示了T细胞与肿瘤细胞于阻断谷氨酰胺后在能量供应及代谢途径中的差异。
[0003]嵌合抗原受体T细胞(CAR
‑
T)疗法在血液肿瘤，如复发或难治性B细胞急性淋巴细胞白血病以及非霍奇金淋巴瘤治疗领域展现出较好的临床治疗效果。

技术实现思路

[0004]为了解决现有技术存在的问题，本专利技术提供一种提高CAR
‑
T细胞抗肿瘤效果的方法，通过重氮氧代正亮氨酸处理CAR
‑
T细胞可以有效提高CAR
+
T细胞中T
N
(CD45RA
+
CCR7
+
)和T
CM
(CD45RA
‑
CCR7
+
)亚群的比例，进而提高其杀伤肿瘤细胞的能力。
[0005]本专利技术所称重氮氧代正亮氨酸为6
‑
重氮
‑5‑
氧代
‑
L
‑
正亮氨酸(DON)。
[0006]本专利技术研究发现T细胞的分化状态很大程度上决定了其持久性，相较于分化程度更高的效应T细胞(TEFF)和效应记忆T细胞(TEM)，处于低分化状态的初始T细胞(TN)和中枢记忆T细胞(TCM)具有更强的生存能力和抗肿瘤功能。T细胞在免疫应答中的分化过程伴随着代谢途径的改变，因此，本专利技术通过改变细胞体外培养环境，采用DON对其处理，干预T细胞的代谢过程，能够改变其分化状态，获得更多低分化的T细胞，进而延长CAR
‑
T细胞回输体内后的存活时间，有利于增强CAR
‑
T细胞的抗肿瘤效果，为肿瘤患者带来福音。
[0007]第一方面，本专利技术提供一种提高CAR
‑
T细胞抗肿瘤效果的方法，包括：
[0008]采用重氮氧代正亮氨酸处理CAR
‑
T细胞。
[0009]进一步地，所述重氮氧代正亮氨酸的浓度为1～10μmol/L。
[0010]进一步地，所述采用重氮氧代正亮氨酸处理CAR
‑
T细胞为：
[0011]在制备CAR
‑
T细胞的过程中的培养基中加入1～10μmol/L的重氮氧代正亮氨酸。
[0012]进一步地，所述方法包括：
[0013]采用包含有CAR核苷酸序列的慢病毒在T细胞培养基中感染T细胞；
[0014]所述T细胞培养基中含有2.5～5μmol/L的重氮氧代正亮氨酸。
[0015]进一步地，所述慢病毒的MOI为(5～15)：1。
[0016]进一步地，所述T细胞培养基还包括：OKT3和CD28抗体。
[0017]进一步地，所述T细胞培养基可以采用本领域常规的用于制备CAR
‑
T细胞的T细胞培养基，其中为了激活T细胞，均含有OKT3和CD28抗体，例如包括：X
‑
VIVO 15无血清培养基、IL2、IL
‑
7、IL
‑
15、OKT3抗体和CD28抗体。
[0018]更进一步地，所述T细胞培养基以X
‑
VIVO 15无血清培养基为基础，还包括IL2 10～100U/mL、IL
‑
7 1～20ng/ml、IL
‑
151～20ng/ml、OKT3抗体10～100ng/ml和CD28抗体0.1～10μg/ml。
[0019]作为一种优选的具体实施方式，本专利技术提供一种提高CAR
‑
T细胞抗肿瘤效果的方法，包括：
[0020](1)构建携带靶向肿瘤细胞的CAR核苷酸序列的慢病毒载体；
[0021](2)将所述慢病毒载体转染293FT细胞制备得到携带靶向肿瘤细胞的CAR核苷酸序列的慢病毒；
[0022](3)采用所述慢病毒于T细胞培养基中感染T细胞48～96小时，MOI＝(5～15)：1。
[0023]所述T细胞培养基以X
‑
VIVO 15无血清培养基为基础，还包括IL210～100U/mL、IL
‑
7 1～20ng/ml、IL
‑
151～20ng/ml、OKT3抗体10～100ng/ml和CD28抗体0.1～10μg/ml。
[0024]本专利技术进一步提供重氮氧代正亮氨酸在促进T细胞分化为低分化T细胞中的应用。
[0025]进一步地，所述低分化T细胞包括：初始T细胞和/或中枢记忆T细胞。
[0026]本专利技术进一步提供重氮氧代正亮氨酸在提高CAR
‑
T细胞制备效率中的应用。
[0027]本专利技术进一步提供重氮氧代正亮氨酸在这制备用于提高CAR
‑
T细胞的肿瘤杀伤效率的药物中的应用。
[0028]本专利技术具备如下有益效果：
[0029]现有技术中，常规制备CAR
‑
T细胞的过程中一般都需要CD3和CD28抗体的刺激，使得获得的CAR
‑
T细胞中T
EM
和T
EFF
比例较高，本专利技术发现在体外培养的培养基中加入DON可以提高获得的CAR
‑
T细胞中T
N
和T
CM
的比例，进而增强其体内持久性，从而提高其杀伤肿瘤细胞的能力，因此DON体外处理的CAR
‑
T具有更好的治疗效果。
附图说明
[0030]图1为本专利技术实施例1提供的DON处理组和对照组中T
N
(CD45RA
+
CCR7
+
)和T
CM
(CD45RA
‑
CCR7
+
)亚群的统计结果示意图；其中A为T
N
亚群的统计结果，B为T
CM
亚群的统计结果。
[0031]图2为本专利技术实施例2提供的DON对于CAR
‑
T细胞的影响的统计结果示意图；其中A为感染72小时后，CAR
‑
T细胞所占比本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种提高CAR
‑
T细胞抗肿瘤效果的方法，其特征在于，包括：采用重氮氧代正亮氨酸处理CAR
‑
T细胞。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述重氮氧代正亮氨酸的浓度为1～10μmol/L。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述采用重氮氧代正亮氨酸处理CAR
‑
T细胞为：在制备CAR
‑
T细胞的过程中的培养基中加入1～10μmol/L的重氮氧代正亮氨酸。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法包括：采用包含有CAR核苷酸序列的慢病毒在T细胞培养基中感染T细胞；所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆哲明，申潞艳，张超亭，
申请(专利权)人：北京肿瘤医院北京大学肿瘤医院，
类型：发明
国别省市：