SP1的反义寡核苷酸及其在制备抑制SP1阳性癌症核酸药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了SP1的反义寡核苷酸及其在制备抑制SP1阳性癌症核酸药物中的应用。用生物信息学在线工具分析SP1蛋白转录组序列信息，筛选长度在20碱基的、能够结合的反义寡核苷酸位点，同时利用分子生物学实验验证，证明反义寡核苷酸ASO

【技术实现步骤摘要】
SP1的反义寡核苷酸及其在制备抑制SP1阳性癌症核酸药物中的应用


[0001]本专利技术属于生物医学领域，涉及SP1的反义寡核苷酸及其在制备抑制SP1阳性癌症核酸药物中的应用。

技术介绍

[0002]2018年全球有高达18078957新增癌症病例，发病率236.9/10万，世界标准人口标化发病率197.9/10万；癌症死亡病例高达9555027例，死亡率125.2/10万，世界标准人口标化死亡率101.1/10万。全球185个国家中，有105个国家男性发病第1的癌症是前列腺癌；肺癌是37个国家男性发病的首位；肝癌和结直肠癌分别是13个和10个国家发病首位。肺癌在全球93个国家的男性中排死因第1位，46个国家的男性主要死于前列腺癌，20个国家是肝癌。此外膀胱癌的发病中，男性患者人数也四倍于女性患者。而女性死亡率分布更为复杂：103个国家乳腺癌是癌症死亡的首位，42个国家宫颈癌是首位，而男性最常见的死因—肺癌，在28个国家中的女性死因中也位居第一。由此可见，肺癌，肝癌，前列腺癌，乳腺癌，宫颈癌，膀胱癌等癌症，严重威胁着人类的生活质量与生命健康。
[0003]Sp1蛋白属于Sp/类Krtippel转录因子家族(Sp/KLF家族)，依功能不同可以分为4个部分：DNA结合区域、Spl的活化区、Btd盒以及Sp盒。Sp1在胃癌、胰腺癌、乳腺癌和甲状腺肿瘤细胞中都有高表达。Zhang等人发现，在同一患者体内，肿瘤组织中的Sp1表达水平显著高于周围正常组织；且与肿瘤的浸润程度呈正相关，Sp1高表达的患者中位生存时间显著短于低表达或不表达Sp1的胃癌患者，而下调Sp1的过表达能抑制癌细胞形成肿瘤。
[0004]反义核酸药物从1978年发现并提出理论，到世纪之交第一种药物上市、推出2代反义技术，再到后来发展遇到低谷，药品退市，人们对其理解与运用的过程经历了一种螺旋式的上升。其研发伊始就承担着攻克普通药物无法治愈的疾病(如肿瘤)的希冀。随着近年来几种治疗癌症的反义核酸药物获批进入临床试验，此类药物重新回到了生物制药研究的舞台，再次展现了这种药物在基因治疗领域的广阔前景。
[0005]关于靶向SP1反义寡核苷酸的研究还未见报道，且其抑制剂的研发尚不充分。

技术实现思路

[0006]为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的之一是提供针对SP1的反义寡核苷酸。
[0007]本专利技术的目的之二是提供一种治疗SP1阳性癌症的手段。
[0008]为了实现上述目的，本专利技术采用了如下技术方案：
[0009]本专利技术第一方面提供了一种反义寡核苷酸，所述反义寡核苷酸由15
‑
30个核苷酸组成，所述反义寡核苷酸抑制SP1的表达。
[0010]进一步，所述反义寡核苷酸由18
‑
22个核苷酸组成。
[0011]进一步，所述反义寡核苷酸由20个核苷酸组成。
[0012]进一步，所述反义寡核苷酸的靶序列选自SEQ ID NO.1
‑
2任一项所示的序列。
[0013]进一步，所述反义寡核苷酸的序列如SEQ ID NO.1所示。
[0014]本专利技术第二方面提供了对本专利技术第一方面所述的反义寡核苷酸进行修饰的反义寡核苷酸。
[0015]进一步，所述修饰包括至少1个核苷间键修饰。
[0016]进一步，所述核苷间键修饰是硫代磷酸酯修饰。
[0017]进一步，所述修饰包括全链的核苷间键修饰。
[0018]进一步，所述修饰包括至少1个糖修饰。
[0019]进一步，所述糖修饰为2
′‑
甲氧乙基修饰。
[0020]进一步，所述修饰包括至少6个糖修饰。
[0021]进一步，所述修饰包括10个糖修饰。
[0022]进一步，所述糖修饰位于反义寡核苷酸序列两侧。
[0023]进一步，所述两侧的糖修饰的数量为5。
[0024]进一步，所述反义寡核苷酸包括至少一个的核苷间键修饰和至少一个的糖修饰。
[0025]进一步，所述反义寡核苷酸包括全链的核苷间键修饰和至少1个糖修饰。
[0026]进一步，所述反义寡核苷酸包括全链的核苷间键修饰和至少6个糖修饰。
[0027]进一步，所述反义寡核苷酸包括全链的核苷间键修饰和10个糖修饰。
[0028]进一步，所述反义寡核苷酸的序列如SEQ ID NO.13所示。
[0029]本专利技术第三方面提供了一种缀合物，包括本专利技术第一方面或本专利技术第二方面所述的反义寡核苷酸，以及至少一个共价连接到所述寡核苷酸的缀合物部分。
[0030]本专利技术第四方面提供了一种组合物，包括权本专利技术第一方面所述的反义寡核苷酸、本专利技术第二方面所述的反义寡核苷酸或本专利技术第三方面所述的缀合物，和药学上可接受的稀释剂、溶剂、载体、盐和/或佐剂。
[0031]本专利技术第五方面提供了一种体内或体外用于调节表达SP1的靶细胞中SP1表达的方法，所述方法包括以有效量向所述细胞施用本专利技术第一方面所述的反义寡核苷酸、本专利技术第二方面所述的反义寡核苷酸、本专利技术第三方面所述的缀合物或本专利技术第四方面所述的组合物。
[0032]本专利技术第六方面提供了设计高效反义寡核苷酸的方法，包括：
[0033]设计针对靶基因的反义寡核苷酸。
[0034]对反义寡核苷酸进行糖化修饰，所述糖化修饰的数量为10。
[0035]进一步，所述糖化修饰平均分布于反义寡核苷酸序列的两侧。
[0036]进一步，所述糖化修饰为2
′‑
甲氧乙基修饰。
[0037]进一步，所述方法还包括对反义寡核苷酸进行核苷间键修饰。
[0038]进一步，所述核苷间键修饰为全链核苷间键修饰。
[0039]进一步，所述核苷间键修饰为硫代磷酸酯修饰。
[0040]进一步，设计针对靶基因的反义寡核苷酸的方法如下：
[0041]1)分析靶基因各个转录本的mRNA结构信息，并记录其共有序列；
[0042]2)使用sfold RNA二级结构在线预测工具中，通过输入共有序列，设计合成反义寡核苷酸。
[0043]本专利技术第七方面提供了本专利技术第一方面或本专利技术第二方面所述的反义寡核苷酸
在制备治疗SP1阳性癌症的药物组合物中的应用。
[0044]进一步，SP1阳性癌症包括胃癌、胰腺癌、乳腺癌、甲状腺癌、宫颈癌、膀胱癌、肺癌、口腔癌、卵巢癌、结肠癌、肾癌、舌鳞癌、子宫内膜癌、胆管癌、前列腺癌。
[0045]进一步，SP1阳性癌症选自前列腺癌。
[0046]进一步，所述前列腺癌选自去势抵抗性前列腺癌。
[0047]进一步，所述反义寡核苷酸抑制SP1阳性癌症细胞增殖和迁移。
[0048]本专利技术第八方面提供了本专利技术第三方面所述的缀合物在制备治疗SP1阳性癌症的药物组合物中的应用。
[0049]进一步，SP1阳性癌症包括胃癌、胰腺癌、乳腺癌、甲状腺癌、宫颈癌、膀胱癌、肺癌、口腔癌、本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种反义寡核苷酸，其特征在于，所述反义寡核苷酸由15
‑
30个核苷酸组成，所述反义寡核苷酸抑制SP1的表达；优选的，所述反义寡核苷酸由18
‑
22个核苷酸组成；优选的，所述反义寡核苷酸由20个核苷酸组成；优选的，所述反义寡核苷酸选自SEQ ID NO.1
‑
2任一项所示的序列；优选的，所述反义寡核苷酸的序列如SEQ ID NO.1所示。2.对权利要求1所述的反义寡核苷酸进行修饰的反义寡核苷酸；优选的，所述修饰包括至少1个核苷间键修饰；优选的，所述核苷间键修饰是硫代磷酸酯修饰；优选的，所述修饰包括全链的核苷间键修饰；优选的，所述修饰包括至少1个糖修饰；优选的，所述糖修饰为2
′‑
甲氧乙基修饰；优选的，所述修饰包括至少6个糖修饰；优选的，所述修饰包括10个糖修饰；优选的，所述糖修饰位于反义寡核苷酸序列两侧；优选的，所述两侧的糖修饰的数量为5。3.根据权利要求2所述的反义寡核苷酸，其特征在于，所述反义寡核苷酸包括至少1个的核苷间键修饰和至少1个的糖修饰；优选的，所述反义寡核苷酸包括全链的核苷间键修饰和至少1个糖修饰；优选的，所述反义寡核苷酸包括全链的核苷间键修饰和至少6个糖修饰；优选的，所述反义寡核苷酸包括全链的核苷间键修饰和10个糖修饰；优选的，所述反义寡核苷酸包括全链的硫代磷酸酯修饰和2
′‑‑
甲氧乙基修饰；优选的，所述反义寡核苷酸的序列如SEQ ID NO.13所示。4.一种缀合物，其特征在于，包括权利要求1
‑
3任一项所述的反义寡核苷酸，以及至少一个共价连接到所述寡核苷酸的缀合物部分。5.一种组合物，其特征在于，包括权利要求1
‑
3任一项所述的反义寡核苷酸或权利要求4的缀合物和药学上可接受的稀释剂、溶剂、载体、盐和/或佐剂。6.一种体内或体外用于调节表达SP1的靶细胞中SP1表达的方法，所述方法包括以有效量向所述细胞施用权利要求1
‑
3中任一项所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：牛远杰，尚芝群，李阳，陈宣蓉，
申请(专利权)人：天津市泌尿外科研究所，
类型：发明
国别省市：