一种基于PFOR酶活性导向的FMT供体筛选方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种基于PFOR酶活性导向的FMT供体筛选方法，以艰难梭菌体内的PFOR酶为靶点，通过测试FMT供体提供的粪菌液对PFOR酶的抑制率，筛选预测和/或评价FMT对于艰难梭菌感染的治疗效果。本发明专利技术以艰难梭菌内的PFOR酶为靶点，通过培养带有PFOR酶质粒的大肠杆菌，并诱导其在IPTG的作用下产生PFOR酶，通过体外实验检测FMT供者所提供的粪菌液对PFOR酶的抑制率，即可初步判断基于该供体的FMT对于艰难梭菌感染的治疗疗效，可用于筛选FMT的供体，或者评价所提供的粪便质量的优劣，既避免了直接培养艰难梭菌的复杂过程，通过酶反应，即可推断FMT供者所提供的粪菌液对于艰难梭菌的抑制作用，且PFOR酶为艰难梭菌获取能量的步骤，对于艰难梭菌的意义重大。于艰难梭菌的意义重大。于艰难梭菌的意义重大。

【技术实现步骤摘要】
一种基于PFOR酶活性导向的FMT供体筛选方法及其应用


[0001]本专利技术涉及医药检测
，具体是指一种基于PFOR酶活性导向的FMT供体筛选方法及其应用。

技术介绍

[0002]艰难梭菌(CD)是一种芽孢形成的厌氧革兰氏阳性细菌，存在于动物和人类的环境和肠道中。艰难梭菌感染(CDI)是长期或不规范使用广谱抗菌药物、免疫抑制剂以及放、化疗药物等，导致肠道菌群失调，艰难梭菌大量繁殖并分泌毒素，导致腹痛、腹泻等一系列临床症状。对于CDI的治疗方法探索已久，目前对于艰难梭菌的治疗方法较少，抗菌药物是其感染治疗的首要手段，两种抗生素(甲硝唑和万古霉素)和最近的第三种抗生素(非达西霉素)已常规用于CDI治疗。然而，对于顽固性艰难梭菌感染，目前没有很好的临床治疗方法，对于最佳药物方案治疗无效的CDI患者，只能采取结直肠切除术作为补救治疗措施，但这一手术方式具有较高的术后死亡率。
[0003]多项研究表明，FMT(粪菌移植)在复发性和难治性CDI病例中具有显著的疗效，这可能归因于FMT后正常微生物群的持续恢复。复发性或难治性CDI患者的治疗成本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于PFOR酶活性导向的FMT供体筛选方法，其特征在于，以艰难梭菌体内的PFOR酶为靶点，通过测试FMT供体提供的粪菌液对PFOR酶的抑制率，筛选预测和/或评价FMT对于艰难梭菌感染的治疗效果。2.根据权利要求1所述的一种基于PFOR酶活性导向的FMT供体筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）培养带有PFOR酶质粒的大肠杆菌；（2）诱导带有PFOR酶质粒的大肠杆菌产生PFOR酶；（3）提取大肠杆菌产生PFOR酶；（4）制备FMT供者所提供的粪菌液；（5）配制PFOR酶的反应体系，通过体外实验，检测FMT供者所提供的粪菌液在PFOR酶的反应体系中，对PFOR酶的抑制情况；（6）根据FMT供体提供的粪菌液对PFOR酶的抑制率，判断感染症状缓解的指标判断FMT供体对艰难梭菌的抑制作用。3.根据权利要求1或2所述的一种基于PFOR酶活性导向的FMT供体筛选方法，其特征在于，所述步骤（1）中，培养带有PFOR酶质粒的大肠杆菌的具体如下：（1.1）制备LB培养基，具体包括液体培养基和固定培养基：（1.1.1）液体培养基的配制：将5gLB肉汤粉末溶于500ml蒸馏水，置于高压蒸汽灭菌锅中，121℃高压灭菌15min，培养瓶内液体体积不超过瓶本身量程的1/3，待其冷却后加入氨苄青霉素，使其终浓度为100μg/mL，混匀即可；（1.2.1）固体培养基的配制：将3.5gLB琼脂粉末溶于100ml蒸馏水，置于高压蒸汽灭菌锅中，121℃高压灭菌15min，65℃左右将培养基从高温灭菌锅中取出，在固体培养基凝固之前加入终浓度为100μg/mL氨苄青霉素后混匀，然后将培养基倒入培养皿中，静置待其冷却凝固；（1.2）选取带有PFOR酶质粒的大肠杆菌进行平板接种：挑取单菌落，在已加入氨苄青霉素的固体培养基中进行平板划线，置于细菌培养箱中，37℃，培养12小时左右；（1.3）培养约12小时后，在已经生长细菌得到平板上挑取单菌落到含有50ML已加入氨苄青霉素的液体培养基的离心管中，放在震荡培养箱中，37℃，220rpm,约200min，震荡约200分钟后，加入异丙基
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硫代半乳糖苷进行诱导，（IPTG终浓度为0.5mMol/ml），置于震荡培养箱中，25℃，220rpm，20h。4.根据权利要求1或2所述的一种基于PFOR酶活性导向的FMT供体筛选方法，其特征在于，所述步骤（2）中，诱导带有PFOR酶质粒的大肠杆菌产生PFOR酶的具...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁思成，肖丽君，吕沐瀚，阳泰，钟晓琳，齐晓怡，邓明明，
申请(专利权)人：西南医科大学附属医院，
类型：发明
国别省市：