一种重组人生长激素及单克隆抗体制备方法技术

本发明专利技术涉及生物工程技术领域，具体涉及一种重组人生长激素及单克隆抗体制备方法，包括对hGH重组菌株进行发酵培养后进行收集与裂解，得到裂解液上清；对裂解液上清进行hGH融合蛋白纯化，得到hGH融合蛋白；对hGH融合蛋白进行酶切及hGH纯化，得到重组hGH蛋白；使用重组hGH蛋白进行小鼠免疫，得到免疫小鼠，对免疫小鼠的脾脏细胞和骨髓瘤细胞进行融合，得到融合细胞；对融合细胞中的单克隆细胞株进行筛选，得到筛选细胞；使用筛选细胞对小鼠进行腹水实验，制备hGH单抗；使用辣根过氧化酶对hGH单抗进行标记，得到标记单抗；对HRP标记单抗与筛选细胞进行配对，得到hGH抗体组合，解决了现有的hGH蛋白的单克隆抗体的制备成本较高的问题。hGH蛋白的单克隆抗体的制备成本较高的问题。hGH蛋白的单克隆抗体的制备成本较高的问题。

【技术实现步骤摘要】
一种重组人生长激素及单克隆抗体制备方法


[0001]本专利技术涉及生物工程
，尤其涉及一种重组人生长激素及单克隆抗体制备方法。

技术介绍

[0002]人生长激素(hGH)是由191氨基酸残基组成的分子量为22000道尔顿的单链球状蛋白，由脑下垂体分泌出，经由下丘脑释放,它最主要的生理作用是通过促进身体各组织、器官以及骨骼中受体细胞的蛋白质合成和脂肪的分解,进而促进人的代谢和生长发育。hGH刺激骨骺端软骨细胞分化、增殖，刺激软骨基质细胞增长，引起线性生长加速及骨骼变宽。hGH调节生长激素不足或成人的脂肪、骨代谢、心肾功能，改善运动能力和生活质量。
[0003]目前，hGH蛋白的来源主要是早期从尸体的脑垂体中分离纯化得到，因该方法原料短缺，费事费力，故成本很高，从而增加了hGH蛋白的单克隆抗体的制备成本。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种重组人生长激素及单克隆抗体制备方法，旨在解决现有的hGH蛋白的单克隆抗体的制备成本较高的问题。
[0005]为实现上述目的，第一方面，本专利技术提供了一种本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组人生长激素单克隆抗体的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：获取hGH重组菌株，对所述hGH重组菌株进行发酵培养，得到发酵菌液；对所述发酵菌液进行收集与裂解，得到裂解液上清；对所述裂解液上清进行hGH融合蛋白纯化，得到hGH融合蛋白；对所述hGH融合蛋白进行酶切及hGH纯化，得到重组hGH蛋白；使用所述重组hGH蛋白进行小鼠免疫，得到免疫小鼠，对所述免疫小鼠的脾脏细胞和骨髓瘤细胞进行融合，得到融合细胞；对所述融合细胞中的单克隆细胞株进行筛选，得到筛选细胞；使用筛选细胞对小鼠进行腹水实验，制备hGH单抗；使用辣根过氧化酶对所述hGH单抗进行标记，得到标记单抗；将所述HRP标记单抗与所述筛选细胞进行配对，得到hGH抗体组合。2.如权利要求1所述的一种重组人生长激素单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述获取hGH重组菌株，对所述hGH重组菌株进行发酵培养，得到发酵菌液的具体方式为：获取hGH重组菌株，将所述hGH重组菌株溶解，得到溶解菌液；将所述溶解菌液中加入含有100ug/mL卡那霉素的5ml培养基中与卡那霉素混匀后培养12
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14小时，得到第一种子液；将所述第一种子液转接至含有100ug/mL卡那霉素的50ml培养基中进行培养2
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4h，当所述50ml培养基中的菌体浓度OD600上升至1.0时，得到第二种子液；将所述第二种子液转接至含有100ug/mL卡那霉素的1000ml培养基中进行培养1
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2h，当所述1000ml培养基中的菌体浓度OD600上升至0.8时，得到第三种子液；在所述第三种子液中滴加IPTG，直至所述第三种子液中的所述IPTG的浓度为0.5mM/L，得到第四种子液；将所述第四种子液培养12
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14h，得到发酵菌液。3.如权利要求1所述的一种重组人生长激素单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述对所述发酵菌液进行收集与裂解，得到裂解液上清的具体方式为：对所述发酵菌液进行离心，得到第一上清和第一菌体，将所述第一菌体收集；使用PBS缓冲液对所述第一菌体进行洗涤后离心，得到第二上清和第二菌体，将所述第二菌体收集；使用PBS缓冲液对所述第二菌体进行重悬后进行超声裂解，得到裂解液；对所述裂解液进行离心，得到裂解液上清和裂解液沉淀，收集所述裂解液上清。4.如权利要求1所述的一种重组人生长激素单克隆抗体的制备方法，其特征在于，所述对所述裂解液上清进行hGH融合蛋白纯化，得到hGH融合蛋白的具体方式为：采用镍离子亲和层析纯化的方法对所述裂解液上清进行纯化，得到洗...

【专利技术属性】
技术研发人员：韦朝宝，熊露群，李建平，邓珍琴，
申请(专利权)人：桂林英美特生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：