一种胆固醇通路的分离鉴定方法技术

本发明专利技术提供一种可以快速高效检测样本中胆固醇代谢通路中物质的方法，所述的方法是将样本处理后利用超高效液相色谱串联质谱的方法进行检测；对所样本中胆固醇代谢通路相关物质进行定性定量分析，每个色谱峰的峰面积(Peak Area)代表对应抗生素的相对含量，最终得到样本中抗生素的定性和定量分析结果，所述的方法可以一次性检测八大类共88胆固醇代谢通路相关物质。通路相关物质。通路相关物质。

【技术实现步骤摘要】
一种胆固醇通路的分离鉴定方法


[0001]本申请涉及样本中标志物的检测，具体涉及胆固醇代谢通路物质的检测，属于生物检测领域。

技术介绍

[0002]胆固醇是一种环戊烷多氢菲的衍生物，广泛存在于动物体内，是动物组织细胞内不可缺少的物质，同时也是类固醇激素、胆汁酸、维生素D3的前体。随着我国经济的快速发展，人们的生活水平有着显著提高，以肥胖、血脂异常等特征的代谢综合症的发病率显著提高。胆固醇通路涉及血糖代谢、血脂代谢、能量代谢等多种代谢过程，其作为信号分子在人体的代谢中发挥重要的调节作用，对胆固醇通路的分离鉴定，成为了肥胖、胰岛素抵抗、代谢综合征全新研究视角，对代谢组学发展具有重要研究价值，更全面、高效、快速的综合评估人体健康状况。
[0003]液相色谱法
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质谱联用(英语：Liquid chromatography
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mass spectrometry，简称液质联用，英文缩写LC
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MS或HPLC
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MS)是一种将高效液相色谱(High performance liq本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测样本中88种胆固醇通路物质的方法，所述的方法包括：1)样本处理；2)上机检测；3)数据处理；所述的检测是利用超高效液相色谱串联质谱(LC
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MS/MS)的方法进行检测；所述的数据处理是利用软件Analyst 1.6.3处理质谱数据；根据每种物质保留时间和离子对信息，对每种物质在样本中检测到的质谱峰进行校正，以确保定性定量的准确；对所样本中胆固醇通路行定性定量分析，每个色谱峰的峰面积(Peak Area)代表对应物质的相对含量，最终得到样本中物质的定性和定量分析结果。2.如权利要求1所述的方法，其中步骤1)样本处理的方法为：(1)样品为液体样品时：a.样本从
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80℃冰箱中取出，冰上解冻，解冻后，涡旋10s混匀；b.自该步骤开始，处理过程在冰上进行，取样本100μL加入到对应的已编号的离心管中，加入400μL纯甲醇提取液；c.振荡5min，冰上静置5min，重复操作一次，4℃下12000r/min离心10min；d.取上清液于对应离心管中4℃条件浓缩，浓缩后用100μL纯甲醇复溶，4℃下12000r/min离心1min，移取80μL上清液待用用于LC
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MS上机分析；(2)组织样本提取方法：a.样本从
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80℃冰箱中取出，冰上解冻，解冻后称取样本50mg于2mL EP管中，加入一颗小钢珠，30Hz匀浆4次，每次30s(若样本不易称取，可先取一部分于EP管中，匀浆后再称取50mg)；b.匀浆完后加入400μL纯甲醇提取液，振荡5min，冰上静置5min，重复操作一次，4℃下12000r/min离心10min；c.取上清液于对应进EP管中浓缩，浓缩后用100μL纯甲醇复溶；d.复溶后于4℃下12000r/min离心1min，移取80μL上清液用于LC
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MS上机分析；(3)细胞样本提取方法：a.样本从
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80℃冰箱中取出，冰上解冻，解冻后，加入400μL纯甲醇提取液，振荡5min，冰上静置5min，重复操作一次，4℃条件下12000r/min离心10min；b.取上清液于对应进EP管中浓缩，浓缩后用100μL纯甲醇复溶；c.复溶后于4℃下12000r/min离心1min，移取80μL上清液用于LC
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MS上机分析。3.如权利要求1或2所述的方法，其中...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜宇超，张永明，唐堂，
申请(专利权)人：武汉迈特维尔生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：