制造寡能和单能前体的方法技术

本公开文本尤其涉及用于从扩增的CD34+细胞源在培养物中制备限定谱系的寡能和单能祖细胞的方法和系统、用于制造其的培养基、和用于治疗多种疾病的治疗性化合物和包含其的组合物，所述疾病包括但限于血液系统障碍、免疫疾病、癌症和传染病。癌症和传染病。癌症和传染病。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】制造寡能和单能前体的方法
[0001]本申请根据35U.S.C
§
119(e)要求2019年5月1提交的美国临时申请号62/841,713的优先权权益，将所述临时申请的内容出于所有目的通过引用以其整体并入本文。


[0002]本专利技术尤其涉及用于在培养物中制备限定谱系的寡能和单能祖细胞的方法和系统、用于制造其的培养基、和用于治疗多种疾病的治疗性化合物和包含其的组合物，所述疾病包括但限于血液系统障碍、免疫疾病、癌症和传染病。

技术介绍

[0003]患有各种疾病(诸如再生障碍性贫血、自身免疫性疾病和影响骨髓的病毒感染)的患者以及接受细胞毒性化疗或电离放射疗法的患者会经历降低水平的造血干细胞、寡能和单能祖细胞、和终末分化细胞。造血系统的耗尽使这些患者高度易受感染，并且因此是造血重建的主要候选因素。
[0004]造血重建可以包括施用造血干细胞(一种原始多能细胞类型，其具有自我更新和重新填充所有血细胞谱系的能力)；然而，即使进行造血重建，由于造血系统无法充分补充与每种障碍相关的终末分化的髓系细胞，患者也会出现诸如嗜中性粒细胞减少症和血小板减少症的病症。
[0005]为了解决诸如嗜中性粒细胞减少症的疾病，已经尝试了向有需要的患者提供治疗剂量的终末分化的嗜中性粒细胞的技术，但这种技术未能提供持久效果。最值得注意地，临床有效性受到这些细胞寿命期限短和这些细胞在经受冷冻/解冻储存循环时的低存活率的阻碍。类似地，由于细胞的保存期限短、储存存活差、和血小板抗体的发育，直接向患有血小板减少症的个体提供血小板的尝试也不是持久的护理选择。
[0006]较少探索的治疗选择是向有需要的患者递送希望谱系的寡能和单能祖细胞。然而，由于缺少提供足够量的这些细胞的方法，因此这种选择受到难以获得治疗相关数量细胞的严重限制。
[0007]因此，本领域需要能够可靠地提供临床相关量的限定谱系的寡能和单能祖细胞的方法。本公开文本解决了这种需要并且还提供了相关的优点。

技术实现思路

[0008]本文尤其提供了用于在培养物中制备限定谱系的寡能和单能祖细胞的方法和组合物。
[0009]在一些方面，本文提供了用于在培养物中制备寡能和单能粒细胞祖细胞群体的方法，所述方法包括使扩增的CD34+细胞源与一组粒细胞谱系调节剂在培养物中接触，从而制造寡能和单能祖细胞群体，其中所述扩增的CD34+细胞源源自原始的CD34+细胞源，与所述原始的CD34+细胞源相比，CD34+细胞的数量已经过至少200倍增加。
[0010]在一些方面，本文提供了用于在培养物中制备寡能和单能祖细胞群体的方法，所述方法包括使扩增的CD34+细胞源与一组谱系调节剂在培养物中接触，从而制造寡能和单能祖细胞群体，其中所述扩增的CD34+细胞源源自原始的CD34+细胞源，与所述原始的CD34+细胞源相比，CD34+细胞的数量已经过至少20倍增加。
[0011]在一些实施方案中，所述原始的CD34+细胞源选自骨髓、脐带血、动员外周血、和非动员外周血。在一些实施方案中，所述原始的CD34+细胞源是动员外周血。在一些实施方案中，所述原始的CD34+细胞源是脐带血。在一些实施方案中，所述原始的CD34+细胞源是骨髓。在一些实施方案中，所述原始的CD34+细胞源是非动员外周血。
[0012]在一些实施方案中，所述扩增的CD34+细胞源源自原始的CD34+细胞源，与所述原始的CD34+细胞源相比，CD34+细胞的数量已经过至少约100倍增加、500倍增加、1,000倍增加、5,000倍增加、10,000倍增加、25,000倍增加、50,000倍增加、100,000倍增加、150,000倍增加、200,000倍增加、225,000倍增加、或250,000倍增加。
[0013]在一些实施方案中，所述扩增的CD34+细胞源源自原始的CD34+细胞源，与所述原始的CD34+细胞源相比，CD34+细胞的数量已经过至少500倍增加，并且所述原始的CD34+细胞源是脐带血。
[0014]在一些实施方案中，所述扩增的CD34+细胞源源自原始的CD34+细胞源，与所述原始的CD34+细胞源相比，CD34+细胞的数量已经过至少20倍增加，并且所述原始的CD34+细胞源是骨髓或动员的血。
[0015]在一些实施方案中，所述扩增的CD34+细胞源通过以下方式制备：使在培养物中的所述原始的CD34+细胞源与有效量的式II
‑
1、I
‑
2、Ia、Ia
’
、Ia1、Ia1
’
、Ia2、Ia2
’
、Ib、Ib1、Ib2、Ic、Ic1、Ic2、II、IIa、IIa
’
、IIa1、IIb、IIb1、IIc、IIc1、III、IIIa、IIIa
’
或IIIa1或表1的化合物(其中每一种都在下面进一步描述)或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物接触，从而使来自在培养物中的所述原始的CD34+细胞源的CD34+细胞的数量增加。
[0016]在一些方面，所述一组谱系调节剂是一组红系谱系调节剂，从而制造寡能和单能红细胞祖细胞群体。
[0017]在一些实施方案中，所述寡能和单能红细胞祖细胞群体包含CD71+的细胞表面表型。在一些实施方案中，所述寡能和单能红细胞祖细胞群体进一步包含CD45
‑
的细胞表面表型。在一些实施方案中，所述寡能和单能红细胞祖细胞群体包含CD235a+的细胞表面表型。在一些实施方案中，所述寡能和单能红细胞祖细胞群体包含CD45
‑
、CD71
‑
和CD235a+的细胞表面表型。
[0018]在一些实施方案中，所述一组红系谱系调节剂包括SCF、IL
‑
3和EPO。在一些实施方案中，所述一组红系谱系调节剂包括SCF、IL
‑
3、肝素、胰岛素、全转铁蛋白和/或EPO。
[0019]在一些实施方案中，在培养7天后，所述寡能和单能红细胞祖细胞群体占总细胞的至少25％至40％。
[0020]在一些方面，所述一组谱系调节剂是一组巨核细胞谱系调节剂，从而制造寡能和单能巨核细胞祖细胞群体。
[0021]在一些实施方案中，所述寡能和单能巨核细胞祖细胞群体包含CD41+的细胞表面表型。在一些实施方案中，所述寡能和单能巨核细胞祖细胞群体包含CD41+/CD42b+的细胞表面表型。
[0022]在一些实施方案中，所述一组巨核细胞谱系调节剂包括SCF、IL
‑
6、IL
‑
9、和/或TPO。
[0023]在一些实施方案中，在培养7天后，所述寡能和单能巨核细胞祖细胞群体占总细胞的至少20％。
[0024]在一些方面，所述一组谱系调节剂是一组粒细胞谱系调节剂，从而制造寡能和单能粒细胞祖细胞群体。
[0025]在一些实施方案中，所述寡能和单能粒细胞祖细胞群体包含CD15+的细本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于在培养物中制备寡能和单能粒细胞祖细胞群体的方法，所述方法包括使扩增的CD34+细胞源与一组粒细胞谱系调节剂在培养物中接触，从而制造寡能和单能粒细胞祖细胞群体，其中所述扩增的CD34+细胞源源自原始的CD34+细胞源，与所述原始的CD34+细胞源相比，CD34+细胞的数量已经过至少200倍增加。2.一种用于在培养物中制备寡能和单能祖细胞群体的方法，所述方法包括使扩增的CD34+细胞源与一组谱系调节剂在培养物中接触，从而制造寡能和单能祖细胞群体，其中所述扩增的CD34+细胞源源自原始的CD34+细胞源，与所述原始的CD34+细胞源相比，CD34+细胞的数量已经过至少20倍增加。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述原始的CD34+细胞源选自骨髓、脐带血、动员外周血、和非动员外周血。4.根据权利要求2所述的方法，其中所述原始的CD34+细胞源是动员外周血。5.根据权利要求2所述的方法，其中所述原始的CD34+细胞源是脐带血。6.根据权利要求2所述的方法，其中所述原始的CD34+细胞源是骨髓。7.根据权利要求2所述的方法，其中所述原始的CD34+细胞源是非动员外周血。8.根据权利要求2至7中任一项所述的方法，其中所述扩增的CD34+细胞源源自原始的CD34+细胞源，与所述原始的CD34+细胞源相比，CD34+细胞的数量已经过至少100倍增加。9.根据权利要求2至7中任一项所述的方法，其中所述扩增的CD34+细胞源源自原始的CD34+细胞源，与所述原始的CD34+细胞源相比，CD34+细胞的数量已经过至少500倍增加。10.根据权利要求2至7中任一项所述的方法，其中所述扩增的CD34+细胞源源自原始的CD34+细胞源，与所述原始的CD34+细胞源相比，CD34+细胞的数量已经过至少1,000倍增加。11.根据权利要求2至7中任一项所述的方法，其中所述扩增的CD34+细胞源源自原始的CD34+细胞源，与所述原始的CD34+细胞源相比，CD34+细胞的数量已经过至少5,000倍增加。12.根据权利要求2至7中任一项所述的方法，其中所述扩增的CD34+细胞源源自原始的CD34+细胞源，与所述原始的CD34+细胞源相比，CD34+细胞的数量已经过至少10,000倍增加。13.根据权利要求2至7中任一项所述的方法，其中所述扩增的CD34+细胞源源自原始的CD34+细胞源，与所述原始的CD34+细胞源相比，CD34+细胞的数量已经过至少25,000倍增加。14.根据权利要求2至7中任一项所述的方法，其中所述扩增的CD34+细胞源源自原始的CD34+细胞源，与所述原始的CD34+细胞源相比，CD34+细胞的数量已经过至少50,000倍增加。15.根据权利要求2至7中任一项所述的方法，其中所述扩增的CD34+细胞源源自原始的CD34+细胞源，与所述原始的CD34+细胞源相比，CD34+细胞的数量已经过至少100,000倍增加。16.根据权利要求2至7中任一项所述的方法，其中所述扩增的CD34+细胞源源自原始的CD34+细胞源，与所述原始的CD34+细胞源相比，CD34+细胞的数量已经过至少150,000倍增加。17.根据权利要求2所述的方法，其中所述扩增的CD34+细胞源源自原始的CD34+细胞
源，与所述原始的CD34+细胞源相比，CD34+细胞的数量已经过至少500倍增加，并且所述原始的CD34+细胞源是脐带血。18.根据权利要求2所述的方法，其中所述扩增的CD34+细胞源源自原始的CD34+细胞源，与所述原始的CD34+细胞源相比，CD34+细胞的数量已经过至少20倍增加，并且所述原始的CD34+细胞源是骨髓或动员的血。19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中所述扩增的CD34+细胞源通过以下方式制备：使在培养物中的所述原始的CD34+细胞源与有效量的式I的化合物或其药学上可接受的盐、水合物或溶剂化物接触，从而使来自在培养物中的所述原始的CD34+细胞源的CD34+细胞的数量增加；其中A是稠合环状部分，所述稠合环状部分选自苯基、C3‑6环烷基、杂环烷基、和杂芳基；其中每个杂环烷基包含从3至6个环成员，具有1至3个氮原子环成员，并且每个杂芳基包含5至6个环成员，具有1至3个氮原子环成员；R1选自
‑
C(O)
‑
NR
b
‑
R
1a
、
‑
NR
b
‑
C(O)
‑
R
1a
、
‑
NR
b
‑
C(O)
‑
R
1b
、
‑
NR
b
‑
X1‑
C(O)
‑
R
1a
、
‑
C(O)
‑
X1‑
NR
b
‑
R
1a
、
‑
X1‑
C(O)
‑
NR
b
‑
R
1a
、
‑
X1‑
NR
b
‑
C(O)
‑
R
1a
、
‑
NR
b
‑
C(O)
‑
X1‑
C(O)
‑
R
1b
、
‑
C(O)
‑
NR
b
‑
X1‑
C(O)
‑
R
1b
、
‑
NR
b
‑
C(O)
‑
O
‑
R
1a
、
‑
O
‑
C(O)
‑
NR
b
‑
R
1a
、
‑
X1‑
NR
b
‑
C(O)
‑
O
‑
R
1a
、
‑
X1‑
O
‑
C(O)
‑
NR
b
‑
R
1a
、
‑
NR
b
‑
R
1a
、和
‑
C(O)
‑
R
1a
；R
1a
选自H、C1‑
10
烷基；C1‑
10
卤代烷基；R
1b
选自
‑
OR
a
、
‑
NR
a
R
b
，每个R2独立地选自卤素、
‑
CN、
‑
C1‑8烷基、
‑
C2‑8烯基、C2‑8炔基、C1‑8卤代烷基、
‑
C1‑8烷氧基、
‑
X1‑
C1‑8烷氧基、
‑
C(O)
‑
R
2a
、
‑
NR
b
‑
C(O)
‑
R
2a
、
‑
SR
a
、
‑
X1‑
SR
a
、
‑
OR
a
、
‑
X1‑
OR
a
、
‑
NR
a
R
b
、
‑
X1‑
NR
a
R
b
、
‑
S(O)2R
a
、
‑
S(O)2NR
a
R
b
、
‑
X1‑
S(O)2R
a
、和
‑
X1‑
S(O)2NR
a
R
b
每个R3独立地选自卤素、
‑
CN、
‑
C1‑8烷基、
‑
C2‑8烯基、C2‑8炔基、C1‑8卤代烷基、
‑
C1‑8烷氧基、
‑
X1‑
C1‑8烷氧基、
‑
C(O)
‑
R
3a
、
‑
SR
a
、
‑
X1‑
SR
a
、
‑
OR
a
、
‑
X1‑
OR
a
、
‑
NR
a
R
b
、
‑
X1‑
NR
a
R
b
、
‑
S(O)2R
a
、
‑
S(O)2NR
a
R
b
、
‑
X1‑
S(O)2R
a
、和
‑
X1‑
S(O)2NR
a
R
b
；每个R
2a
和R
3a
独立地选自H、C1‑
10
烷基、C1‑
10
卤代烷基、
‑
OR
a
、
‑
X1‑
OR
a
、
‑
NR
a
R
b
、和
‑
X1‑
NR
a
R
b
；R
4a
选自
‑
OR
a
和
‑
NR
a
R
b
；R
4b
是H；或R
4a
和R
4b
组合形成氧代基或肟部分；每个R
a
和R
b
独立地选自H和C1‑4烷基；每个X1是C1‑4亚烷基；下标n是从0至3的整数；并且下标m是从0至2的整数。20.根据权利要求19所述的方法，其中A是稠合环状部分，所述稠合环状部分选自C3‑6环烷基、杂环烷基、和苯基，
其中每个杂环烷基包含从3至6个环成员，具有1至3个氮原子环成员。21.根据权利要求19或权利要求20所述的方法，其中A是稠合环状部分，所述稠合环状部分选自C3‑6环烷基和苯基。22.根据权利要求19或权利要求20所述的方法，其中A是稠合苯基。23.根据权利要求19至22中任一项所述的方法，其中R
4a
是
‑
OR
a
；R
4b
是H；或R
4a
和R
4b
组合形成氧代基部分。24.根据权利要求19至22中任一项所述的方法，其中R
4a
是
‑
OR
a
；并且R
4b
是H。25.根据权利要求19至22中任一项所述的方法，其中R
4a
是
‑
NR
a
R
b
；并且R
4b
是H。26.根据权利要求19至25中任一项所述的方法，其中R1选自
‑
C(O)
‑
NR
b
‑
R
1a
、
‑
NR
b
‑
C(O)
‑
R
1a
、
‑
NR
b
‑
X1‑
C(O)
‑
R
1a
、
‑
C(O)
‑
X1‑
NR
b
‑
R
1a
、
‑
X1‑
C(O)
‑
NR
b
‑
R
1a
、
‑
X1‑
NR
b
‑
C(O)
‑
R
1a
、
‑
NR
b
‑
C(O)
‑
X1‑
C(O)
‑
R
1b
、
‑
C(O)
‑
NR
b
‑
X1‑
C(O)
‑
R
1b
、
‑
NR
b
‑
C(O)
‑
O
‑
R
1a
、
‑
O
‑
C(O)
‑
NR
b
‑
R
1a
、
‑
NR
b
‑
R
1a
、和
‑
C(O)
‑
R
1a
。27.根据权利要求19至25中任一项所述的方法，其中R1选自
‑
C(O)
‑
NH
‑
R
1a
、
‑
NH
‑
C(O)
‑
R
1a
、
‑
NH
‑
C(O)
‑
O
‑
R
1a
、
‑
O
‑
C(O)
‑
NH
‑
R
1a
、
‑
NH
‑
R
1a
、和
‑
C(O)
‑
R
1a
。28.根据权利要求19至25中任一项所述的方法，其中R1选自
‑
NH
‑
C(O)
‑
R
1a
、
‑
NH
‑
C(O)
‑
R
1b
、
‑
NH
‑
C(O)
‑
O
‑
R
1a
、和
‑
NR
b
‑
R
1a
。29.根据权利要求19至25中任一项所述的方法，其中R1选自
‑
NH
‑
C(O)
‑
R
1a
、
‑
NH
‑
C(O)
‑
R
1b
、和
‑
NH
‑
C(O)
‑
O
‑
R
1a
。30.根据权利要求19至25中任一项所述的方法，其中R1是
‑
NH
‑
C(O)
‑
R
1a
。31.根据权利要求19至30中任一项所述的方法，其中每个R2独立地选自卤素、
‑
C1‑8烷基、C1‑8卤代烷基、
‑
C1‑8烷氧基、
‑
X1‑
C1‑8烷氧基、
‑
C(O)
‑
R
2a
、
‑
NR
b
‑
C(O)
‑
R
2a
‑
SR
a
、
‑
X1‑
SR
a
、
‑
OR
a
、
‑
X1‑
OR
a
、
‑
NR
a
R
b
、
‑
X1‑
NR
a
R
b
、
‑
O
‑
C(O)
‑
R
a
。32.根据权利要求19至31中任一项所述的方法，其中每个R3独立地选自卤素、
‑
C1‑8烷基、
‑
C1‑8卤代烷基、
‑
C1‑8烷氧基、
‑
X1‑
C1‑8烷氧基、
‑
C(O)
‑
R
3a
、
‑
SR
a
、
‑
X1‑
SR
a
、
‑
OR
a
、
‑
X1‑
OR
a
、
‑
NR
a
R
b
、
‑
X1‑
NR
a
R
b
、
‑
S(O)2R
a
、
‑
S(O)2NR
a
R
b
、
‑
X1‑
S(O)2R
a
、和
‑
X1‑
S(O)2NR
a
R
b
。33.根据权利要求19至32中任一项所述的方法，其中每个R2和R3独立地选自卤素、
‑
C1‑8烷基、C1‑8卤代烷基、
‑
C1‑8烷氧基、
‑
X1‑
C1‑8烷氧基、
‑
OR
a
、
‑
X1‑
OR
a
、
‑
NR
a
R
b
、
‑
X1‑
NR
a
R
b
、
‑
S(O)2R
a
、
‑
S(O)2NR
a
R
b
、
‑
X1‑
S(O)2R
a
、和
‑
X1‑
S(O)2NR
a
R
b
。34.根据权利要求19至32中任一项所述的方法，其中每个R2和R3独立地选自卤素、
‑
C1‑8烷基、C1‑8卤代烷基、
‑
C1‑8烷氧基、
‑
X1‑
C1‑8烷氧基、
‑
OR
a
、
‑
NR
b
‑
C(O)
‑
R
2a
‑
X1‑
OR
a
、
‑
NR
a
R
b
、和
‑
X1‑
NR
a
R
b
。35.根据权利要求19至32中任一项所述的方法，其中每个R2和R3独立地选自卤素、
‑
C1‑8烷基、C1‑8卤代烷基、
‑
OR
a
、
‑
X1‑
OR
a
、
‑
NR
a
R
b
、和
‑
X1‑
NR
a
R
b
。36.根据权利要求19至32中任一项所述的方法，其中每个R2和R3独立地选自
‑
OR
a
、
‑
X1‑
OR
a
、
‑
NR
a
R
b
或
‑
X1‑
NR
a
R
b
。37.根据权利要求19至36中任一项所述的方法，其中R
1a
是C1‑6烷基或C1‑6卤代烷基。38.根据权利要求19至36中任一项所述的方法，其中R
1a
是C1‑6烷基。39.根据权利要求19至36中任一项所述的方法，其中R
1a
是C2‑6烷基或C1‑6卤代烷基。40.根据权利要求19至36中任一项所述的方法，其中R
1a
是C2‑6烷基。41.根据权利要求19至36中任一项所述的方法，其中R
1b
是
‑
OR
a
。42.根据权利要求19至36中任一项所述的方法，其中R
1b
是
‑
OH。43.根据权利要求19至42中任一项所述的方法，其中每个R
a
和R
b
独立地选自H和C1‑2烷基。44.根据权利要求19至43中任一项所述的方法，其中每个X1是C...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：投资健康有限责任公司，
类型：发明
国别省市：