本发明专利技术属于水稻基因工程领域，公开了OsSLT1基因在控制水稻耐盐性中的应用，所述的OsSLT1基因的基因组DNA序列为SEQ ID NO.1所示。申请人通过全基因组关联分析定位到该候选基因，是否能提高水稻的抗逆性目前尚无相关报道。因此，从水稻中分离出OsSLT1基因，并鉴定它在提高水稻抗逆性方面所发挥的功能，对于培育抗逆水稻新品种将具有非常重要的意义。本发明专利技术首次提出编码SEQ ID NO.6所示蛋白的基因可控制水稻的耐盐性，通过苗期盐胁迫表型鉴定表明，缺失该基因片段时，水稻耐盐胁迫能力降低，证实了该基因的功能及应用途径。证实了该基因的功能及应用途径。
【技术实现步骤摘要】
lerance in Arabidopsis thaliana.Nat Biotechnol,21:81-85,2003；Yang等，Overexpression of SOS(Salt Overly Sensitive)genes increases salt tolerance in transgenic Arabidopsis.M ol Plant,2:22-31,2009)。另外，增加液泡中Na+/H+反向转运子(NHX)的数目有助于提高地上部分的耐盐性(Barragan等，Ion exchangers NHX1 and NHX2 mediate active potass ium uptake into vacuoles to regulate cell turgor and stomatal function in Arabidopsis.Plan t Cell,24:1127-1142,2012；Bassil等，The Arabidopsis intracellular Na+/H+antiporters N HX5 and NHX6 are endosome associated and necessary for plant growth and development.Plant Cell,23:224-239,2011)。
[0006]表达N端截短的来自烟草的NtSLT1，能抑制钙调神经磷酸酶(CaN)缺陷酵母突变体。并且截短的NtSLT1能增加野生型酵母的耐盐性。NtSLT1编码一个功能未知的蛋白，但酵母中的实验证实其为一个耐盐决定因子。NtSLT1在拟南芥中的同源蛋白，AtSLT1在N端含有自抑制结构域，也能抑制酵母CaN缺陷突变体的盐敏感表型(Matsumoto等，Tobaccoand Arabidiopsis SLT1 mediate salt tolerance of yeast,Plant Molecular Biology,45:489
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500,2001)。
技术实现思路
[0007]本专利技术的目的在于提供了OsSLT1基因在控制水稻耐盐性中的应用；所述的OsSLT1基因的CDS序列为SEQ NO：2所示，其编码的蛋白的氨基酸的序列为SEQ ID NO：6所示。为了达到上述目标，本专利技术采取以下技术措施：
[0008]OsSLT1基因在控制水稻耐盐性中的应用，所述的应用过程包括利用本专利技术的常规方案，通过控制OsSLT1基因的表达，以控制水稻的耐盐性，所述的OsSLT1基因的序列为SEQ ID NO.1所示，CDS序列为SEQ ID NO.2所示，编码的蛋白质序列为SEQ ID NO.6所示
[0009]以上所述的应用中，优选的是通过CRISPR/Cas9的方法，在OsSLT1基因内选取靶位点将该基因敲除，获得的水稻突变体为盐敏感型水稻；
[0010]以上所述的应用中，优选的所述的盐敏感型水稻包含SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示的核苷酸序列。
[0011]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：
[0012]本专利技术首次提出编码SEQ ID NO.6所示蛋白的基因可控制水稻的耐盐性，通过苗期盐胁迫表型鉴定表明，缺失该基因片段时，水稻耐盐胁迫能力降低，证实了该基因的功能及应用途径。
附图说明
[0013]图1为野生型水稻和水稻OsSLT1 CRISPR突变体osslt1-1苗期盐胁迫实验示意图；
[0014]每个圆盆的左边为对照野生型立新粳(C087)，右边为CRISPR突变体osslt1-1。
[0015]图2为野生型水稻和水稻OsSLT1 CRISPR突变体osslt1-17苗期盐胁迫实验示意图；
[0016]每个圆盆的左边为对照野生型立新粳(C087)，右边为CRISPR突变体osslt1-17。
具体实施方式
[0017]以下实施例定义了本专利技术，并描述了本专利技术在构建了OsSLT1的CRISPR突变体材料，鉴定了其基因型得到纯合突变体，并对其进行了苗期的盐胁迫表型鉴定。根据以下描述的全部或部分实施步骤，本领域技术人员可以确定本专利技术的基本特征，并且在不偏离本专利技术精神和范围的情况下，可以对本专利技术做出各种改变和修改，以使其适用不同的用途和条件。
[0018]本专利技术所述技术方案，如未特别说明，均为本领域的常规方案；所述试剂或材料，如未特别说明，均来源于商业渠道。
[0019]实施例1：
[0020]OsSLT1基因的获得及CRISPR目标载体OsSLT1-TKC的构建：
[0021]OsSLT1基因为SEQ ID NO.1所示。
[0022]OsSLT1-TKC的构建：
[0023]第一，设计和选择靶序列：设计U6启动的OsSLT1基因的sgRNA的靶序列为GGCCTCTCCATGGATCCCGCCGG。
[0024]第二，合成CRISPR的引物：
[0025]01g05790U6-F：GCCTCTCCATGGATCCCGCCgttttagagctagaaatagcaagtta
[0026]01g05790U6-R：GGCGGGATCCATGGAGAGGCaacctgagcctcagcgcagc
[0027]边界引物：与TKC质粒Pme I酶切位点两侧序列部分重叠的引物为：
[0028]OsU6P-F：gtcgtttcccgccttcagtttatgtacagcattacgtagg
[0029]OsU6T-R：CTGTCAAACACTGATAGTTTAAACgatggtgcttactgtttag
[0030]第三，PCR扩增sgRNA的转录元件。
[0031]第一轮PCR分两管进行，模板是TKC质粒((He等，Programmed self-elimination of the CRISPR/Cas9 construct greatly accelerates theisolation of edited and transgene-free rice plants.Mol Plant,11(9):1210-1213,2018))：
[0032]PCR1：OsU6P-F+01g05790U6-R
[0033]PCR2：OsU6T-R+01g05790U6-F
[0034]第二轮PCR，将PCR1和PCR2的产物挖胶回收后分别取0.5μL作为模板，使用Os U6P-F+OsU6T-R作为引物来扩增。
[0035]第四，将第二轮PCR产物挖胶回收后与已经被Pme I酶切完全的TKC载体相连。最后转化大肠杆菌获得阳性转化子后送测序，最终获得OsSLT1-TKC载体。
[0036]TKC两侧的测序引物为ZRP_390(GAACGGATAAACCTTTTCACGCCC)，ZRP_395-2(tggcgtaatagcgaagaggc)。
[0037]实施例2：
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【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.OsSLT1基因在控制水稻耐盐性中的应用；所述的OsSLT1基因的CDS编码的蛋白的氨基酸的序列为SEQ ID NO：6所示。2.根据权利要求1所述的应用，所述的OsSLT1基因的CDS序列为SEQ ID NO.1所示。3.根据权利要...
【专利技术属性】
技术研发人员：熊立仲，王胜昌，肖本泽，
申请(专利权)人：权利要求书一页说明书五页序列表七页附图一页，
类型：发明
国别省市：
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