一种基于高通量测序的RhD基因型检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于高通量测序的RhD基因型检测方法，其中：提取外周血游离DNA样本,利用2对保守性引物同时从外周血游离DNA中扩增出RhD基因和RHCE基因第9外显子及上下游基因盒,进行高通量测序,区分RhD基因全缺失型、RhD基因部分转换型、RhD突变型以及RhD野生型四种基因型。本发明专利技术可以一次性同时有效区分RhD基因全缺失型（RHD*01N.01）、RhD基因部分转换型（RHD*01N.03）、RhD1227A突变型（RHD*01EL.01）以及RhD野生型（RHD*01）四种基因型，为RhD基因型检测提供了一种全新的方法。为RhD基因型检测提供了一种全新的方法。

【技术实现步骤摘要】
一种基于高通量测序的RhD基因型检测方法


[0001]本专利技术涉及基因检测的
，尤其涉及一种基于高通量测序的RhD基因型检测方法。

技术介绍

[0002]高加索人群中96.6%的RH阴性血型是由RhD等位基因纯合缺失导致，仅3.4%的RH阴性血型者携带突变RhD基因，因此欧美国家目前采用的RhD基因产前筛查方法主要针对RhD基因缺失及个别高频突变别位点进行。然而，中国汉族RhD血型阴性人群等位基因频率与欧美人群存在差异，20～30%中国汉族RhD阴性者携带完整的RhD基因，主要由RhD1227A突变等位基因（RHD*01EL.01）导致RhD阴性表型，因此，目前高加索人群的RhD基因型检测方法并不适用于中国汉族人群。
[0003]目前，急需一种新的检测方法，可以在检测RhD基因缺失的同时，还能检测RhD基因突变，从而为中国汉族人群的血型检测提供理论支持。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是为了解决
技术介绍
中提及的问题，提供一种基于高通量测序的RhD基因型检测方法。
[0005]为实现上述技术目的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于高通量测序的RhD基因型检测方法，其特征是：提取外周血游离DNA样本,利用2对保守性引物同时从外周血游离DNA中扩增出RhD基因和RHCE基因第9外显子及上下游基因盒,进行高通量测序,区分RhD基因全缺失型（RHD*01N.01）、RhD基因部分转换型（RHD*01N.03）、RhD1227A突变型（RHD*01EL.01）以及RhD野生型（RHD*01）四种基因型，引物序列如下：Exon9F 5' TCACGTTAATAGGTGAAAAATCTTAC 3'，Exon9R 5' TGCATTTAAACAGGTTTGCTC 3'，BoxF 5' GTGGCTGGCTTTTGCTATTTC 3'，BoxR 5' ATACATGCTTAATTTGTCATTC 3'。2.根据权利要求1所述的一种基于高通量测序的RhD基因型检测方法，其特征是：引物序列基于NC_000001.11（GRCh38）为模板设计引物，扩增产物分别为113bp和103bp，扩增体系为25
µ
L，包括：1U/
µ
l KAPAHiFi DNA Polymerase，0.5
µ
l；DNA模板，0.5
µ
l；10
µ
M 正向和反向引物，各0.75
µ
l；10mM dNTP Mix，包含dATP、dCTP和dGTP，0.75
µ
l；5x KAPAHiFi Fidelity buffer，含MgCl2，5
µ
l；25mM KAPA MgCl
2 2
µ
l；1U/
µ
l Uracil
‑
DNA Glycosylase 1
µ
l；20mM dUTP 0.75
µ
l；灭菌去离子水 11.5
µ
l；PCR反应条件为：25℃，10min；95℃ 2min...

【专利技术属性】
技术研发人员：段红蕾，李洁，李志民，韩乃坚，姜子晗，
申请(专利权)人：南京鼓楼医院，
类型：发明
国别省市：