一种荧光定量PCR检测双壳贝类源性成分的方法技术

本发明专利技术公开了一种荧光定量PCR检测双壳贝类源性成分的方法，首先称取样品，对样品进行DNA提取，并通过引物进行PCR扩增，再将扩增后的产物进行琼脂糖凝胶电泳得到电泳条带，将目的条带切割回收送测序公司测序，测序结果输入NCBI网站进行BLAST比对，得到物种信息和相关目的基因序列，将每个双壳贝类的目的基因序列下载，利用DNAMAN软件进行比对得到已获得贝类品种的相同基因序列，针对上述目的序列设计引物和Taqman探针，送公司合成引物和探针，利用市售贝类样品进行引物探针验证，双壳贝类可检出。本发明专利技术对样品进行DNA提取，利用特异性引物探针进行实时荧光定量PCR扩增，根据扩增曲线和CT值判定样品中是否含有双壳贝类成分，能够有效对食品中的贝类成分进行种类检测。有效对食品中的贝类成分进行种类检测。

【技术实现步骤摘要】
一种荧光定量PCR检测双壳贝类源性成分的方法


[0001]本专利技术涉及食品种类检测
,更具体的说是涉及一种荧光定量PCR检测双壳贝类源性成分的方法。

技术介绍

[0002]近年来，随着水产品消费市场持续扩大，水产制品的食品安全问题层出不穷，水产品错误标识误导消费者，加工食品掺杂掺假现象屡有发生。利用实时荧光PCR技术国家已制定了针对部分水产品源性成分的检测标准，如SN/T 3589
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2013《出口食品中常见鱼类及其制品的鉴伪方法实时荧光PCR法》、SN/T 1961.10
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2013《出口食品过敏原成分检测第10部分：实时荧光PCR方法检测虾蟹成分》等，这些标准只能鉴别水产制品中是否含有鱼、虾、蟹的成分，对于贝类成分尚无有效的检测手段。
[0003]本研究旨在利用Taqman探针荧光定量PCR方法鉴定双壳帘蛤科贝类成分，也可以为商业双壳贝类的物种识别和真实性测试提供强有力的评估方法，解决源性成分掺杂掺假和标签错误标识问题。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术提供了本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种荧光定量PCR检测双壳贝类源性成分的方法，其特征在于，检测步骤如下：1)称选样品；2)对样品进行DNA提取：称取0.3g已制备好的样品于2mL离心管中，加入1000μL CTAB缓冲液和40μL蛋白酶K，振荡混匀，65℃30min，期间每隔10min振荡混匀；12000g离心10min，转移1mL上清液于2mL离心管中；加500μL酚、三氯甲烷和异戊醇的混合液，体积比为25：24:1，强烈振荡，12000g离心15min；吸取上清液到新的2mL离心管中，加入等体积的异丙醇，振荡均匀，12000g离心10min；去除上清液，用预热至65℃的TE缓冲液溶解DNA；加入5μLRNA酶溶液，37℃30min。加入200μL三氯甲烷
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异戊醇(24:1)，强烈振荡，12000g离心15min；吸取上清液至一新离心管中，加入等体积异丙醇，振荡均匀，12000g离心10min；弃去上清液，70％乙醇洗涤一次，12000g离心1min。弃上清液，晾干；加入50μLTE缓冲液，溶解DNA沉淀；3)利用通用引物对DNA提取液进行PCR扩增，得到扩增产物；4)将扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳得到电泳条带，并选择目的条带；5)将目的条带切割回收送测序公司测序；6)测序结果输入NCBI网站进行BLAST比对，得到物种信息和相关目的基因序列，将每个双壳贝类的目的基因序列下载；7)利用DNAMAN软件进行比对得到已获得贝类品种的相同基因序列，此序列为检测双壳贝类的目的序列；8)针对上述目的序列设计引物和Taqman探针，送公司合成引物和探针；9)利用市售贝类样品进行引物探针验证，双壳贝类可检出双壳贝类特异序列。2.根据权利要求1所述的一种荧光定量PCR检测双壳贝类源性成分的方法，其特征在于，所述步骤9)中的双壳贝类特异序列CTGAGACAACTCTATGCGGTGGATCACTCGGCTCGTGCGTCGATGAAGAGCGCAGCCAGCTGCGTGAATTAATGTGAATTGCAGGACACACTGAACATCGACACCTTGAACGCACATTGCGGCTCTGGCTCACTGCCAGAGCCACGCCTGTCCGAGGGTCGGCGAACAAGTCATCG。3.根据...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘珊珊，赵冬梅，付欢，朱娜，孙雅君，王志成，刘浩，
申请(专利权)人：秦皇岛市食品药品检验中心，
类型：发明
国别省市：