一种非洲猪瘟病毒基因工程亚单位口服疫苗制造技术

本发明专利技术提供一种非洲猪瘟病毒基因工程亚单位口服疫苗，其中包含有用于重组表达非洲猪瘟病毒抗原蛋白的基因工程乳酸乳球菌，所述的抗原蛋白是氨基酸序列为SEQ ID NO:1的ASFV p30蛋白、氨基酸序列为SEQID NO:3的ASFV p54蛋白或氨基酸序列为SEQ ID NO:5的ASFV p72蛋白。所述的抗原蛋白连接有大肠埃希氏菌不耐热肠毒素B亚单位LTB基因蛋白。本发明专利技术的非洲猪瘟病毒基因工程亚单位口服疫苗可有效地刺激肠道局部免疫细胞产生分泌型IgA，刺激机体产生黏膜反应，通过血液循环，进而刺激机体产生细胞免疫和体液免疫。胞免疫和体液免疫。胞免疫和体液免疫。

【技术实现步骤摘要】
一种非洲猪瘟病毒基因工程亚单位口服疫苗


[0001]本专利技术属于疫苗制备
，具体涉及一种非洲猪瘟病毒基因工程亚单位口服疫苗。

技术介绍

[0002]非洲猪瘟(African swine fever，ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus，ASFV)引起的一种急性、热性、高度接触性、致死性动物传染病。ASFV是非洲猪瘟病毒科(Asfarviridae)非洲猪瘟病毒属(Asfivirus)的唯一成员，是目前已知的唯一具有DNA基因组的虫媒病毒。发病猪主要表现为体温升高、皮肤黏膜广泛性出血、妊娠母猪流产等。非洲猪瘟致死率高达100％，给养猪业带来了严重危害。
[0003]ASF与其他动物疫病不同，自1921年首次爆发至今已有100余年。当下，对非洲猪瘟的预防措施主要是强化监管力度、加强消毒灭源及做好生物安全防护措施，一旦暴发只能全群扑杀以期彻底根除，对养猪业而言损失极大。目前市场上仍然缺乏有效的疫苗，其中灭活疫苗不能抵御ASF强毒株的攻击，不能提供有效的免疫保护力，故而不能作为今后研究的重点方向；而减毒活疫苗仍存在生物安全方面存在隐患，疫苗接种后的安全性、有效性等有待进一步评估。
[0004]而基因工程疫苗，成本低、在安全性、鉴别诊断等方面优势明显，研究更多的ASFV保护性抗原或免疫佐剂，刺激机体产生免疫应答效力是当前研制ASFV亚单位疫苗的关键，因而ASFV亚单位疫苗研究潜力较大。目前对于非洲猪瘟的活载体疫苗的研究仍在探索中，而载体及保护性抗原的选择和设定以及佐剂的优化是研究的重点方向；
[0005]口服黏膜免疫不仅在黏膜组织产生免疫应答，还可以引起全身体液免疫应答，使用简便安全，是目前疫苗研发的重要方向。而消化道中复杂的微环境是影响口服黏膜免疫的关键因素，利用乳酸乳球菌表达系统研制的口服疫苗，具有易通过黏膜吸收、无副作用的特点，通过胃肠黏膜进行抗原递呈，可以经过不同的免疫通路产生良好的免疫效果。

技术实现思路

[0006]本专利技术的主要目的在于提供一种非洲猪瘟病毒基因工程亚单位口服疫苗，即一种安全无毒，并能刺激机体产生黏膜免疫应答的非洲猪瘟病毒基因工程亚单位口服疫苗。
[0007]本专利技术首先提供一种能够用于制备非洲猪瘟病毒基因工程亚单位疫苗的抗原蛋白，所述的抗原蛋白是氨基酸序列为SEQ ID NO:1的ASFV p30蛋白、氨基酸序列为SEQ ID NO:3的ASFV p54蛋白或氨基酸序列为SEQ ID NO:5的ASFV p72蛋白；
[0008]其中编码氨基酸序列为SEQ ID NO:1的ASFV p30蛋白的基因，其序列为SEQ ID NO:2；
[0009]编码氨基酸序列为SEQ ID NO:3的ASFV p54蛋白的基因，其序列为SEQ ID NO:4；
[0010]编码氨基酸序列为SEQ ID NO:5的ASFV p72蛋白的基因，其序列为SEQ ID NO:6；
[0011]更进一步的，所述的抗原蛋白连接有大肠埃希氏菌不耐热肠毒素B亚单位LTB基因
蛋白；
[0012]其中连接有LTB的ASFV p30蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID NO:7；编码基因的序列为SEQ ID NO:8；
[0013]其中连接有LTB的ASFV p54蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID NO:9；编码基因的序列为SEQ ID NO:10；
[0014]其中连接有LTB的ASFV p72蛋白，其氨基酸序列为SEQ ID NO:11；编码基因的序列为SEQ ID NO:12；
[0015]本专利技术还提供一种基因工程乳酸乳球菌，所述的基因工程乳酸乳球菌中携带有用于编码上述抗原蛋白的重组表达载体；
[0016]作为实施例一种具体记载，所述表达载体为pMG36e表达载体。
[0017]本专利技术还提供一种非洲猪瘟病毒基因工程亚单位口服疫苗，其中抗原包含有上述的基因工程乳酸乳球菌。
[0018]本专利技术非洲猪瘟病毒基因工程亚单位口服疫苗可以口服，可有效地刺激肠道局部免疫细胞产生分泌型IgA，刺激机体产生黏膜反应，通过血液循环，进而刺激机体产生细胞免疫和体液免疫。为克服免疫原在到达小肠粘膜之前被降解或灭活的可能，必须使用活的载体系统来传递完整无损的抗原成分。以细菌病毒为活载体系统可达到这一目的，乳酸乳球菌已作为多种病原的活载体系统进行外源蛋白的递呈并取得良好效果，但在非洲猪瘟的疫苗研制中上未见报道。
附图说明
[0019]图1：PCR鉴定结果：泳道2MG1363/pMG36e
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p30
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His；泳道3MG1363/pMG36e
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p54
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His；泳道4MG1363/pMG36e
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p72
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His；泳道5MG1363/pMG36e
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p54
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LTB
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His；泳道6MG1363/pMG36e
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p72
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LTB
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His；泳道7MG1363/pMG36e
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p30
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LTB
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His。
[0020]图2：SDS
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PAGE及Western blot鉴定结果图：泳道2MG1363/pMG36e
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p30
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His；泳道3MG1363/pMG36e
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p54
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His
[0021]图3：SDS
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PAGE及Western blot鉴定结果图：泳道2MG1363/pMG36e
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p30
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LTB
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His。
[0022]图4：SDS
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PAGE及Western blot鉴定结果图：泳道2MG1363/pMG36e
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p54
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LTB
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His
[0023]图5：SDS
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PAGE及Western blot鉴定结果图：泳道2MG1363/pMG36e
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p72
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His；泳道3MG1363/pMG36e
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p72
‑
LTB
‑
His。
具体实施方式
[0024]本专利技术中使用的p30蛋白或称为p32蛋白，由ASFV ORF CP204L基因编码，大小为30KD的蛋白。p30蛋白的蛋白质功能为涉及病毒侵入。p30蛋白具有优良的抗原性，能诱导机体产生强烈的体液免疫反应，从而刺激动物机体产生中和抗体。由于细胞内早期大量表达，可以用它作为抗原检测ASFV抗体。
[0025]p54蛋白(由ASFV E183L基因编码，大小约为25KD的蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于制备非洲猪瘟病毒基因工程亚单位疫苗的抗原蛋白，其所述在于，所述的抗原蛋白是氨基酸序列为SEQ ID NO:1的ASFV p30蛋白、氨基酸序列为SEQ ID NO:3的ASFV p54蛋白或氨基酸序列为SEQ ID NO:5的ASFV p72蛋白。2.一种基因，其特征在于，所述的基因编码权利要求1所述的抗原蛋白。3.如权利要求2所述的基因，其特征在于，所述的基因，其中编码氨基酸序列为SEQ ID NO:1的ASFV p30蛋白，其序列为SEQ ID NO:2；编码氨基酸序列为SEQ ID NO:3的ASFV p54蛋白的基因的序列为SEQ ID NO:4；编码氨基酸序列为SEQ ID NO:5的ASFV p72蛋白的基因的序列为SEQ ID NO:6。4.如权利要求1所述的抗原蛋白，其特征在于，所述的抗原蛋白连接有大肠埃希氏菌不耐热肠毒素B亚单位LTB基因蛋白。5.如权利要求4所述的抗原蛋白，其特征在于，所述的抗原蛋白为...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡秀磊，赵赛赛，张洪亮，单虎，秦志华，张皓杰，
申请(专利权)人：青岛农业大学，
类型：发明
国别省市：