环状RNAhsa_circ_0000745的新应用制造技术

本发明专利技术涉及环状RNA hsa_circ_0000745的新应用以及抑制hsa_circ_0000745的siRNA。本发明专利技术首次证实了降低hsa_circ_0000745的表达可以抑制前列腺癌细胞的增殖、转移和克隆形成，从而起到抗前列腺癌的作用，因此，hsa_circ_0000745可作为治疗前列腺癌和筛选用于治疗前列腺癌药物的新的分子靶标。进一步地，本发明专利技术还通过优化获得了一种能有效抑制hsa_circ_0000745表达的siRNA。circ_0000745表达的siRNA。circ_0000745表达的siRNA。

【技术实现步骤摘要】
环状RNA hsa_circ_0000745的新应用


[0001]本专利技术涉及生物技术
，特别是涉及环状RNAhsa_circ_0000745的新应用。

技术介绍

[0002]前列腺癌是指发生在前列腺的上皮性恶性肿瘤，是男性泌尿生殖系统常见的恶性肿瘤。早期前列腺癌多数无症状，随着肿瘤的生长，可表现为下尿路梗阻症状，包括尿频、尿急、尿流缓慢、排尿困难、尿潴留或尿失禁等。当发生骨转移时，可以引起骨痛、脊髓压迫及病理性骨折。前列腺癌患者还会出现扩散、尿失禁活勃起功能障碍等并发症。前列腺癌的病因尚未完全清楚，目前认为与遗传、环境、食物和年龄等有关，有家族性前列腺癌病史的，发病率相对偏高，发病的年龄也会偏年轻。目前，前列腺癌在全球的发病率都在持续上升，2018年全球有近130万新发病例和35.9万死亡病例。早期前列腺癌患者可以通过根治性手术或者根治性放疗等方式，达到良好的治疗效果；晚期一般选择雄激素去除治疗，以期延长患者生存期，改善生活质量。
[0003]环状RNA(circular RNA,circRNA)是一类新发现的内源性非编码RNA(non
‑
coding RNA,ncRNA)，circRNA形成特殊的共价闭合环状结构，既没有5
’‑3’
极性，亦无多聚腺苷酸尾巴。circRNA参与几乎所有的细胞生理过程，circRNA的异常表达与肿瘤的发生与发展有密切关系。由于circRNAs广泛表达在组织细胞及血液中，并具有高度稳定性、高度特异性的特点。因此，circRNA可作为恶性肿瘤诊断与治疗的潜在生物标志物及分子靶标。现有研究发现hsa_circ_0000745参与了某些肿瘤的发生发展，例如，hsa_circ_0000745在乳腺癌中的表达显著上调，可作为乳腺癌的诊断标志物；hsa_circ_0000745可促进宫颈癌细胞的增殖和转移；hsa_circ_0000745在胃癌组织中的表达显著下调，可作为胃癌的诊断标志物。但是目前，hsa_circ_0000745在前列腺癌中的作用尚未有研究报道。

技术实现思路

[0004]基于此，本专利技术的目的在于，提供一种环状RNA hsa_circ_0000745的新应用，通过抑制hsa_circ_0000745的表达可以抑制前列腺癌细胞的增殖、转移和克隆形成，因此hsa_circ_0000745可作为前列腺癌治疗的新分子靶标。本专利技术还通过优化获得了一种能更好地抑制hsa_circ_0000745表达的siRNA。
[0005]具体技术方案为：
[0006]一种siRNA，所述siRNA包括如SEQ ID NO.1所示的正义链和如SEQ ID NO.2所示的反义链。
[0007]本专利技术还提供了一种shRNA，所述shRNA的序列如SEQ ID NO.3所示。
[0008]本专利技术还提供了一种包含所述siRNA或shRNA的重组表达载体。
[0009]本专利技术还提供了所述siRNA或shRNA或表达载体在制备抑制hsa_circ_0000745表达的试剂中的用途。
[0010]本专利技术还提供了抑制hsa_circ_0000745表达的试剂在制备治疗前列腺癌的药物
中的用途。
[0011]进一步地，所述试剂选自
ⅰ
、
ⅱ
或
ⅲ
，其中：
[0012]ⅰ
：一种siRNA，所述siRNA包括如SEQ ID NO.1所示的正义链和SEQ ID NO.2所示的反义链；
[0013]ⅱ
：一种shRNA，所述shRNA的序列如SEQ ID NO.3所示；
[0014]ⅲ
：一种重组表达载体，所述重组表达载体包含
ⅰ
或
ⅱ
。
[0015]本专利技术还提供了一种治疗前列腺癌的药物，所述药物包含所述siRNA或shRNA或重组表达载体，以及药物学上可接受的辅料。
[0016]本专利技术还提供了hsa_circ_0000745在筛选治疗前列腺癌的药物中的用途。
[0017]本专利技术还提供了一种体外筛选治疗前列腺癌的药物的方法，包括以下步骤：(1)用待选试剂处理表达或含有hsa_circ_0000745的体外体系；(2)检测hsa_circ_0000745的表达，若hsa_circ_0000745的表达受到抑制，则所述待选试剂可作为治疗前列腺癌的潜在药物。
[0018]进一步地，所述步骤(2)中检测hsa_circ_0000745的表达的引物包括如SEQ ID NO.7所示的上游引物和如SEQ ID NO.8所示的下游引物。
[0019]本专利技术首次证实了降低hsa_circ_0000745的表达可以抑制前列腺癌细胞的增殖、转移和克隆形成，从而起到抗前列腺癌的作用，因此，hsa_circ_0000745可作为治疗前列腺癌和筛选用于治疗前列腺癌药物的新的分子靶标。进一步地，本专利技术还通过优化获得了一种能有效抑制hsa_circ_0000745表达的siRNA，其对hsa_circ_0000745的抑制效果优于其他siRNA，可将hsa_circ_0000745的表达降低10倍左右。
附图说明
[0020]图1为含有本专利技术siRNA对应的shRNA的重组质粒pLVX
‑
shRNA2
‑
Puro的结构示意图；
[0021]图2为NC组和hsa_circ_0000745si组病毒包装48h的荧光结果图；
[0022]图3为cell组、NC组和hsa_circ_0000745si组稳定细胞株荧光结果图；
[0023]图4为cell组、NC组和hsa_circ_0000745si组稳定细胞株中hsa
‑
cir
‑
0000745的表达检测结果图；
[0024]图5为cell组、NC组和hsa_circ_0000745si组稳定细胞株的增殖能力检测结果图；
[0025]图6为cell组、NC组和hsa_circ_0000745si组稳定细胞株的迁移能力检测结果图；
[0026]图7为cell组、NC组和hsa_circ_0000745si组稳定细胞株的克隆形成能力检测结果图。
具体实施方式
[0027]本专利技术下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。
[0028]除非另有定义，本专利技术所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本专利技术。
[0029]本专利技术的术语“包括”和“具有”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤的过程、方法、装置、产品或设备没有限定于已列出的步骤或模块，而是可选地还包括没有列出的步本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种siRNA，其特征在于，所述siRNA包括如SEQ ID NO.1所示的正义链和如SEQ ID NO.2所示的反义链。2.一种shRNA，其特征在于，所述shRNA的序列如SEQ ID NO.3所示。3.包含权利要求1所述siRNA或权利要求2所述shRNA的重组表达载体。4.如权利要求1所述的siRNA或权利要求2所述shRNA或权利要求3所述的重组表达载体在制备抑制hsa_circ_0000745表达的试剂中的用途。5.抑制hsa_circ_0000745表达的试剂在制备治疗前列腺癌的药物中的用途。6.如权利要求5所述的用途，其特征在于，所述试剂选自
ⅰ
、
ⅱ
或
ⅲ
，其中：
ⅰ
：一种siRNA，所述siRNA包括如SEQ ID NO.1所示的正义链和SEQ ID NO.2所示的反义链；
ⅱ
：一种shRNA，所述shRNA的序列如SEQ ID N...

【专利技术属性】
技术研发人员：申健，何金花，韩泽平，罗文峰，谢芳梅，郭仲辉，
申请(专利权)人：广州市番禺区中心医院，
类型：发明
国别省市：