本发明专利技术涉及组织芯片制备的技术领域，其公开了一种组织芯片的制作方法包括以下步骤：将组织制成组织蜡块，然后对组织蜡块进行切片得到组织蜡片；把切片后的组织蜡片在水中展平，保证组织蜡片平整无皱折和气泡；将在水或者乙醇溶液中展平的组织蜡片贴在载玻片上；在组织蜡片上标识目标区域，采用蜡片打孔器切割的方式，将目标区域从组织蜡片中分离出来，得到目标区域蜡片；重复步骤S1‑S4，得到N个目标区域蜡片；用油性笔在粘附载玻片背面上标记A×B点阵的范围，A和B均为正整数；将N个目标区域蜡片放置在摊片机的恒温水中，将目标区域蜡片粘附于粘附载玻片的点阵中。本发明专利技术避开了操作简单易行、组织芯片的制作费用低廉，且易于推广。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及组织芯片制备的，尤其涉及一种组织芯片的制作方法。
技术介绍
1、组织芯片(tissuechips，tc)是将几十个以上的小组织有序地包埋在一个蜡块里而制成的组织切片，在科研和临床中加以应用。用同一套组织芯片即可迅速地对多种生物分子标记，如抗原、dna(deoxyribonucleic acid，脱氧核糖核酸)组织芯片制备和rna(ribonucleic acid，核糖核酸)组织芯片制备进行检测、分析，组织芯片具有检测标本量大、实验误差小、省时省力、节约组织和试剂等优点。但是昂贵的组织芯片仪限制了其在科研和临床中的广泛应用。
2、组织芯片与基因芯片、蛋白质芯片及细胞芯片一样，是一种高通量、高效率、多样本的新型研究工具。组织芯片技术与传统的病理学技术、组织化学技术、免疫组化技术、原位杂交技术、荧光核酸原位杂交技术以及原位pcr等技术相结合，能在dn组织芯片制备、mrn组织芯片制备和蛋白质等不同分子水平上研究病理组织。其应用将极大的促进现代医学、基因组学和蛋白质组学研究的深入发展。
3、传统组织芯片的局限性：①由于活检或穿刺组织小且珍贵，不宜进行蜡块打孔。②由于传统组织芯片需要在蜡块上打孔，破坏了原始蜡块的完整性，且不可再生。③档案蜡块组织的前期固定和处理不规范，处理方法不统一，获取样本蜡芯高度不一致，与蜡块孔深不匹配，影响后续石蜡切片的完整性。④组织芯移入受体蜡块孔内后，往受体蜡块孔模中注入石蜡使两者融合成一体，操作技术难度大，对技术人员要求高，稍有不慎，易导致组织芯的移位和脱落现象。
<
br/>技术实现思路
1、本专利技术的目的是为了克服以上现有技术存在的不足，提供了一种组织芯片的制作方法。
2、本专利技术的目的通过以下的技术方案实现：一种组织芯片的制作方法包括以下步骤：
3、s1、对组织蜡块进行切片，得到组织蜡片；
4、s2、把步骤s1的组织蜡片在水或乙醇溶液中展平，保证组织蜡片平整无皱折和气泡；
5、s3、将步骤s2的组织蜡片贴在载玻片上；
6、s4、在步骤s3的组织蜡片上标识目标区域，采用蜡片打孔器切割的方式，将目标区域的蜡片从组织蜡片中分离出来，得到目标区域蜡片；
7、s5、重复步骤s1-s4，得到n个目标区域蜡片，n为正整数；
8、s6、在粘附载玻片的背面上标记a×b点阵的范围，n＝a×b，a和b均为正整数；
9、s7、将n个目标区域蜡片放置在摊片机的恒温水中，将目标区域蜡片粘附于粘附载玻片的a×b点阵中，得到组织芯片。
10、更优的选择，步骤s1包括以下步骤：
11、s101、将组织制成组织蜡块，然后对组织蜡块进行冷冻静置；
12、s102、采用石蜡切片机将冷冻静置后的组织进行切片，得到组织蜡片，该组织蜡片保证完整、均匀、无皱褶和无刀痕。
13、更优的选择，步骤s101中的冷冻静置的温度范围包括-4～0℃。
14、更优的选择，步骤s2包括以下步骤：
15、s201、将组织蜡片转移到水或者乙醇溶液中，该水或者乙醇溶液的温度包括10～40℃；
16、s202、将组织蜡片的皱褶展开，并将组织蜡片上的气泡移除，直至组织蜡片无气泡并完全展开为止。
17、更优的选择，步骤s3包括以下步骤：
18、s301、将载玻片倾斜放入到水或者乙醇溶液中，并将载玻片慢慢靠近组织蜡片的一端，采用载玻片捞起组织蜡片，让组织蜡片贴在载玻片上；
19、s302、将贴有组织蜡片的载玻片从水或者乙醇溶液中倾斜拿起，并将该载玻片的一角接触水面，从而减少组织蜡片和载玻片的水分。
20、更优的选择，步骤s4包括以下步骤：
21、s401、结合he染色法，并根据客户实验要求确定组织蜡片的目标区域，在组织蜡片上标出目标区域；
22、s402、根据目标区域的大小，选择合适口径的蜡片打孔器；
23、s403、对比目标区域在组织蜡片的所在位置，将蜡片打孔器对准组织蜡片的目标区域，蜡片打孔器垂直于载玻片，将目标区域蜡片从组织蜡片上完全分离，得到目标区域蜡片；
24、s404、采用蜡片打孔器将目标区域蜡片转移到水或者乙醇溶液中，水或者乙醇溶液的温度范围包括10～40℃。
25、更优的选择，步骤s404为目标区域蜡片完全脱离于组织蜡片，目标区域蜡片将黏附于蜡片打孔器的刀口处，将蜡片打孔器移入10～40℃的水或乙醇溶液中，蜡片打孔器在水或乙醇溶液中上下振荡数秒，使目标区域蜡片脱离蜡片打孔器，目标区域蜡片漂浮于水或乙醇溶液中。
26、更优的选择，步骤s404为标区域蜡片未完全脱离于组织蜡片，将载玻片上的组织蜡片移入10～40℃的水或乙醇溶液中，组织蜡片将漂浮在水或乙醇溶液的液面上，用镊子将目标区域蜡片与组织蜡片分离，并用镊子将目标区域蜡片的剩余组织蜡片清除。
27、更优的选择，步骤s7包括以下步骤：
28、s701、粘附载玻片把目标区域蜡片转移到摊片机的恒温水中，直至目标区域蜡片完全展平；
29、s702、将粘附载玻片倾斜放入恒温水中，慢慢靠近目标区域蜡片的一端，然后用粘附载玻片慢慢捞起目标区域蜡片，使目标区域蜡片贴在a×b点阵上；
30、s703、将贴好目标区域蜡片的粘附载玻片倾斜拿着，并将粘附载玻片的一角与水面接触,避免目标区域蜡片在粘附载玻片上发生位移；
31、s704、重复步骤s701～s703，将n个目标区域蜡片按照步骤s6的a×b点阵的顺序依次裱于粘附载玻片上，待所有的目标区域蜡片完成裱片工作后，将粘附载玻片放置于烤片机上烤干，再放入电热鼓风干燥箱继续烘烤目标区域蜡片，烘烤时间范围包括1～4小时，得到组织芯片。
32、更优的选择，步骤s701的所述恒温水的温度范围包括40～60℃。
33、本专利技术相对现有技术具有以下优点及有益效果：
34、本专利技术通过一种组织芯片的制作方法，操作简单易行、对技术人员的技术技能要求低，组织芯片的制作费用低廉，且易于推广，既要保持蜡块的完整性，又要控制成本完成多个样本的检测需求，获得病变典型、有代表性的区域，将切割好的目标区域蜡片按照阵列方式依次裱于粘附载玻片上，达到几十个样本切片排布于同一张粘附载玻片上，可用于后续dna、rna和蛋白质的定位分析和检测。
本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种组织芯片的制作方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述一种组织芯片的制作方法，其特征在于：步骤S1包括以下步骤：
3.根据权利要求1所述一种组织芯片的制作方法，其特征在于：步骤S101中的冷冻静置的温度范围包括-4～0℃。
4.根据权利要求1所述一种组织芯片的制作方法，其特征在于：步骤S2包括以下步骤：
5.根据权利要求1所述一种组织芯片的制作方法，其特征在于：步骤S3包括以下步骤：
6.根据权利要求1所述一种组织芯片的制作方法，其特征在于：步骤S4包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述一种组织芯片的制作方法，其特征在于：步骤S404为目标区域蜡片完全脱离于组织蜡片，目标区域蜡片将黏附于蜡片打孔器的刀口处，将蜡片打孔器移入10～40℃的水或乙醇溶液中，蜡片打孔器在水或乙醇溶液中上下振荡数秒，使目标区域蜡片脱离蜡片打孔器，目标区域蜡片漂浮于水或乙醇溶液中。
8.根据权利要求6所述一种组织芯片的制作方法，其特征在于：步骤S404为标区域蜡片未完全脱离于组织蜡片，将载玻片上的组织蜡片移入10～40℃的水或乙醇溶液中，组织蜡片将漂浮在水或乙醇溶液的液面上，用镊子将目标区域蜡片与组织蜡片分离，并用镊子将目标区域蜡片的剩余组织蜡片清除。
9.根据权利要求1所述一种组织芯片的制作方法，其特征在于：步骤S7包括以下步骤：
10.根据权利要求9所述一种组织芯片的制作方法，其特征在于：步骤S701的所述恒温水的温度范围包括40～60℃。
...
【技术特征摘要】
1.一种组织芯片的制作方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述一种组织芯片的制作方法，其特征在于：步骤s1包括以下步骤：
3.根据权利要求1所述一种组织芯片的制作方法，其特征在于：步骤s101中的冷冻静置的温度范围包括-4～0℃。
4.根据权利要求1所述一种组织芯片的制作方法，其特征在于：步骤s2包括以下步骤：
5.根据权利要求1所述一种组织芯片的制作方法，其特征在于：步骤s3包括以下步骤：
6.根据权利要求1所述一种组织芯片的制作方法，其特征在于：步骤s4包括以下步骤：
7.根据权利要求6所述一种组织芯片的制作方法，其特征在于：步骤s404为目标区域蜡片完全脱离于组织蜡片，目标区域蜡片将...
【专利技术属性】
技术研发人员：张小鹰，李英，陈水莲，
申请(专利权)人：广州市番禺区中心医院，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。