鉴定油菜和萝卜杂交种真实性的引物组合及其应用制造技术

本发明专利技术公开了鉴定油菜和萝卜杂交种真实性的引物组合及其应用。属于农业分子生物学技术领域。本发明专利技术通过在大量的SSR引物中筛选出Primer17、Primer51、Primer125、Primer128和Primer140构成用于鉴定油菜和萝卜杂交种真实性的引物组合，利用亲本和杂交种的基因组DNA进行PCR扩增，通过凝胶电泳处理获得电泳图谱，通过观察杂交种是否同时具有其亲本的特征谱带即可判定待测杂交种的真实性，该方法方便、快捷，操作步骤简单，能够对大量的待测杂交种进行快速鉴定，测定结果准确。测定结果准确。测定结果准确。

【技术实现步骤摘要】
鉴定油菜和萝卜杂交种真实性的引物组合及其应用


[0001]本专利技术涉及农业分子生物学
，更具体的说是涉及鉴定油菜和萝卜杂交种真实性的引物组合及其应用。

技术介绍

[0002]远缘杂交是创造作物新品种的重要途经，也是改良物种的有力工具。利用远缘杂交技术，可打破种、属间的隔离，拓宽遗传基础并为育种计划创造新的种质，从而有效地进行种间、属间目标遗传物质的转移。远缘杂交在油菜育种上已得到广泛应用，并取得显著成效。目前，国内外在甘蓝型油菜与萝卜远缘杂交及杂种鉴定方面的研究虽有报道，却为数不多。甘蓝型油菜与萝卜的杂交属于芸墓属与萝卜属之间的远缘杂交。甘蓝型油菜(B.napus)是经过白菜与甘蓝种间杂交，加倍形成的异源双二倍体。萝卜(Raphanus sativus)是十字花科一种非常重要的疏菜。萝卜中存在着许多有利的性状，例如优良的抗逆和抗虫性。植物遗传育种中，远缘杂交可以将萝卜中的优良基因转移到甘蓝型油菜中，从而拓宽甘蓝型油菜的遗传基础，改良甘蓝型油菜。
[0003]随着分子生物学技术的发展，分子标记技术越来越多的应用于农作物种子的真实性与品种纯度鉴定。分子标记鉴定技术是以DNA分子多态性为基础的一种遗传标记，能稳定遗传，可以反映生物的个体和群体特征。分子标记可以直接反映DNA水平上的差异，具有高度的专一性和特异性，其中SSR(simple sequence repeats)标记技术具有数量丰富、多态性高、共显性遗传、扩增稳定、易于检测等方面的优点。SSR标记通常具有共显性的特点，F1杂交种具有双亲等位基因的互补带型。SSR标记已成为现阶段用于鉴定种子纯度的常用方法，但是目前在油菜和萝卜杂交种使用SSR分子标记技术鉴定其真实性的报道鲜有。
[0004]本专利技术通过人工杂交获得甘蓝型油菜与萝卜的远缘杂种，并对杂种进行了分子标记鉴定，旨在拓宽甘蓝型油菜的遗传基础，为相关性状的转移和创造新的生物材料提供理论依据。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了鉴定油菜和萝卜杂交种真实性的引物组合及其应用。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]本专利技术通过对甘蓝型油菜、萝卜及两者的杂交F1代种子进行萌发和实验培养，收集叶片提取基因组DNA。对亲本基因组DNA进行高通量测序，组装基因组信息并搜索全基因组中的SSR位点，并设计合成这些特异性位点相对应的引物，利用亲本和杂交种的基因组DNA进行PCR扩增，确定引物的特异性、有效性，挑选出最合适的5对引物用于杂交种的真实性鉴定。
[0008]鉴定油菜和萝卜杂交种真实性的引物组合，引物组合为Primer17、Primer51、Primer125、Primer128和Primer140引物中的至少一种：
[0009]Primer17
‑
F：5
’‑
CCAATCCGACGATACAGGTT
‑3’
；SEQ ID NO.1；
[0010]Primer17
‑
R：5
’‑
TTAGGGGGAGTTTCTTGCCT
‑3’
；SEQ ID NO.2；或
[0011]Primer51
‑
F：5
’‑
TCCAAAAGGTCTCGTCTCTCA
‑3’
；SEQ ID NO.3；
[0012]Primer51
‑
R：5
’‑
CACATTGGTTTGTTGGTTGC
‑3’
；SEQ ID NO.4；或
[0013]Primer125
‑
F：5
’‑
CTTGTTTCCACCCTTTTCCA
‑3’
；SEQ ID NO.5；
[0014]Primer125
‑
R：5
’‑
TTTCAACCACCATTAACAACCA
‑3’
；SEQ ID NO.6；或
[0015]Primer128
‑
F：5
’‑
TTAGGGCTTTGGTCTTTGGA
‑3’
；SEQ ID NO.7；
[0016]Primer128
‑
R：5
’‑
CACATCATGGCTTTCTCCAC
‑3’
；SEQ ID NO.8；或
[0017]Primer140
‑
F：5
’‑
CGCAAATTTTTGCAATAGAGC
‑3’
；SEQ ID NO.9；
[0018]Primer140
‑
R：5
’‑
TTTTTAGATTTGGGATAATTCTTACT
‑3’
；SEQ ID NO.10。
[0019]鉴定油菜和萝卜杂交种真实性的试剂或试剂盒，试剂或试剂盒含有上述的引物组合。
[0020]上述的引物组合在鉴定油菜和萝卜杂交种真实性中的应用。
[0021]一种鉴定油菜和萝卜杂交种真实性的方法，包括如下步骤：
[0022](1)油菜、萝卜及待测品种基因组DNA的提取；
[0023](2)分别以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，用上述引物组合进行PCR扩增，得到扩增产物；
[0024](3)将扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳处理，得到电泳图谱；
[0025](4)对比待测品种以及其亲本的电泳图谱，若待测品种同时具有其亲本的特征谱带，则判定所述待测品种为真实；反之，为假。
[0026]进一步的，步骤(2)中PCR扩增的反应体系如下：
[0027][0028]进一步的，步骤(2)中PCR扩增的反应程序如下：
[0029][0030]进一步的，步骤(3)在进行聚丙烯酰胺凝胶电泳时，电压150V，时间35min，上样量5μl。
[0031]经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本专利技术取得的有益效果为：本专利技术方法中用于鉴定的SSR标记能够在甘蓝型油菜、萝卜中扩增出差异明显的特征带，扩增条带清晰、非特异性片段少、重复性好。利用该SSR标记检测出既含有甘蓝型油菜又含有萝卜特有等位基因的杂合等位基因，可以快速判断二者杂交种的真实性。本专利技术操作简便、重复性好、通用性好、不受环境因素的影响，可准确快速的鉴定杂交子代的真实性。
附图说明
[0032]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
[0033]图1附图为本专利技术实施例1中母本油菜YCY01萌芽时期图；
[0034]图2附图为本专利技术实施例1中父本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.鉴定油菜和萝卜杂交种真实性的引物组合，其特征在于，所述引物组合为Primer17、Primer51、Primer125、Primer128和Primer140引物中的至少一种：Primer17
‑
F：5
’‑
CCAATCCGACGATACAGGTT
‑3’
；SEQ ID NO.1；Primer17
‑
R：5
’‑
TTAGGGGGAGTTTCTTGCCT
‑3’
；SEQ ID NO.2；或Primer51
‑
F：5
’‑
TCCAAAAGGTCTCGTCTCTCA
‑3’
；SEQ ID NO.3；Primer51
‑
R：5
’‑
CACATTGGTTTGTTGGTTGC
‑3’
；SEQ ID NO.4；或Primer125
‑
F：5
’‑
CTTGTTTCCACCCTTTTCCA
‑3’
；SEQ ID NO.5；Primer125
‑
R：5
’‑
TTTCAACCACCATTAACAACCA
‑3’
；SEQ ID NO.6；或Primer12...

【专利技术属性】
技术研发人员：万林生，孙红芹，倪正斌，韩配配，陈志爱，孙明法，严国红，朱国永，王爱民，唐红生，刘凯，施伟，孙一标，张桂云，代金英，朱静雯，赵绍路，胡蕾，程新杰，张梦龙，岳红亮，
申请(专利权)人：江苏沿海地区农业科学研究所，
类型：发明
国别省市：