一种用于筛选两季开花鸢尾品种的鸢尾SSR分子标记组及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于筛选两季开花鸢尾品种的鸢尾SSR分子标记组及其应用，涉及分子标记技术领域。一种用于筛选两季开花鸢尾品种的鸢尾SSR分子标记组包括以下8个，其核苷酸序列依次如SEQ ID NO.17

【技术实现步骤摘要】
一种用于筛选两季开花鸢尾品种的鸢尾SSR分子标记组及其应用


[0001]本专利技术涉及分子标记
，具体涉及一种用于筛选两季开花鸢尾品种的鸢尾SSR分子标记组及其应用。

技术介绍

[0002]花朵是花卉最主要的观赏部位之一。多季开花可以大幅延长花卉观赏期，因此多季开花是花卉育种的关键目标之一，具有重要的应用价值。两季开花是指在植物的年生长周期内，开两次花。在北方地区常见为春秋两季开花，在其他地区往往为春夏两季开花。两季开花的花卉，能够丰富夏或秋季园林中观赏花卉的种类，显著延长花卉的观赏期。
[0003]目前国外已经培育了许多能够两季开花的鸢尾，以有髯鸢尾为主。有髯鸢尾(Bearded iris)是鸢尾科(Iridaceae)鸢尾属(Iris)多年生宿根草本植物中非常重要的类群，花型奇特，花色丰富，花期一般为4～5月，是重要的庭园、地被用植物。我国大多数两季开花鸢尾引种于国外，由于引种不规范以及两季开花遗传规律不明，在非花期时节，难以直接分辨出是否为两季开花鸢尾；此外，通过杂交育种等手段创制的鸢尾新品种通常需要三年以上时间才可开花，无法在早期对两季花鸢尾杂交子代的开花性状进行判断，这些给两季开花鸢尾的园林应用和新品种培育带来了很大的困难。
[0004]SSR(Simple Sequence Repeats)又称微卫星(Microsatellite)DNA，是一种广泛分布于真核生物基因组中的串联简单重复序列，每个重复单元的长度在1～6bp之间。SSR分子标记具有重复性好、结果可靠、多态性丰富、共显性、所需DNA少等优点。通过分子标记辅助选择(molecular marker
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aided selection，MAS)的方法可以实现两季开花鸢尾的早期鉴定。传统的SSR分子标记常配合聚丙烯酰胺凝胶电泳进行多态性分析，该电泳具有有毒性、电泳时间较长和不同等位变异难以准确识别等问题。利用通过在正向引物5
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端添加荧光标记及毛细管电泳的方法(Dendauw,J.,et al.Development of sequenced tagged microsatellite site(stms)markers in azalea:Utilisation des marqueurs microsatellites a sequences etiquetees chez les azalees.2001,546(546):193
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197.Dendauw,J.,et al.Identification of 33Chinese Rhododendron species using matK sequences and AFLP data.Acta Horticulturae,2002,169
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177.)，能够更大量、快速、精确的区分相差微小的条带，有效提高实验效率和准确性。
[0005]关联分析(Association analysis)是以自然群体为研究对象，利用连锁不平衡(linkage disequilibrium，LD)，结合基因的多态性，能够找出与表型性状相关联的位点(李那，赵毅强.全基因组关联分析及其扩展方法的研究进展.农业生物技术学报，2019，27(01):150
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158.)。通过将获得的高多态性分子标记位点与开花性状进行关联分析，可有效获得鉴定鸢尾两季花性状的优良SSR分子标记，这对于两季花鸢尾杂交子代早期鉴定和相关研究具有重要意义。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的在于提供一组与鸢尾品种两季开花性状相关的SSR分子标记组及其应用。本专利技术还提供一组鸢尾转录组SSR特异性标记引物组，目的在于利用所述引物组辅助鉴定鸢尾两季开花品种。
[0007]本专利技术提供了一种用于筛选两季开花鸢尾品种的鸢尾SSR分子标记组，所述SSR分子标记组包括以下8个，核苷酸序列具体如下：(1)P2S19：序列如SEQ ID NO.17所示；(2)P2S45：序列如SEQ ID NO.18所示；(3)P2S48：序列如SEQ ID NO.19所示；(4)P3S12：序列如SEQ ID NO.20所示；(5)P3S17：序列如SEQ ID NO.21所示；(6)P3S28：序列如SEQ ID NO.22所示；(7)P3S30：序列如SEQ ID NO.23所示；(8)P3S41：序列如SEQ ID NO.24所示。
[0008]本专利技术还提供了一种用于筛选两季开花鸢尾品种的引物组，包括以下8对，其正向引物和反向引物的核苷酸序列具体如下：
[0009](1)P2S19：正向引物序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物序列如SEQ ID NO.2所示；(2)P2S45：正向引物序列如SEQ ID NO.3所示，反向引物序列如SEQ ID NO.4所示；(3)P2S48：正向引物序列如SEQ ID NO.5所示，反向引物序列如SEQ ID NO.6所示；(4)P3S12：正向引物序列如SEQ ID NO.7所示，反向引物序列如SEQ ID NO.8所示；(5)P3S17：正向引物序列如SEQ ID NO.9所示，反向引物序列如SEQ ID NO.10所示；(6)P3S28：正向引物序列如SEQ ID NO.11所示，反向引物序列如SEQ ID NO.12所示；(7)P3S30：正向引物序列如SEQ ID NO.13所示，反向引物序列如SEQ ID NO.14所示；(8)P3S41：正向引物序列如SEQ ID NO.15所示，反向引物序列如SEQ ID NO.16所示。
[0010]本专利技术还提供了一种用于筛选两季开花鸢尾品种的检测试剂或试剂盒，含有上述引物组。
[0011]本专利技术还提供了上述的引物组、或上述的检测试剂或试剂盒在筛选两季开花鸢尾品种中的应用。
[0012]本专利技术还提供了一种两季开花的鸢尾品种的筛选方法，包括以下步骤：
[0013](1)提取鸢尾基因组DNA；
[0014](2)以步骤(1)提取的基因组DNA为模板，利用权利要求2所述的引物组进行PCR扩增；
[0015](3)用毛细管电泳对步骤(2)的PCR产物进行检测；
[0016](4)分析步骤(3)检测结果，与作为标准样品的两季及单季开花的鸢尾检测结果一起构建鸢尾品种聚类树状图；
[0017](5)根据步骤(4)构建的鸢尾品种聚类树状图，与作为标准样品的两季开花的鸢尾聚为一类的，即为两季开花的鸢尾品种。
[0018]具体的，步骤(2)中所述PCR扩增体系为：20μL，其中上下游引物各1.0μL，上下游引物的浓度为10mM，5U/μL Taq polymerase 10μL，20ng/μL DNA模板1.0μL，ddH2O 7.0μL；所述PCR扩增程序为：94℃预变性3min；93℃变性30s；58℃退火30s，72℃延伸1min，32个循环；72℃延伸10min。
[0019]具体的，步本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于筛选两季开花鸢尾品种的鸢尾SSR分子标记组，其特征在于，所述SSR分子标记组包括以下8个，核苷酸序列具体如下：(1)P2S19：序列如SEQ ID NO.17所示；(2)P2S45：序列如SEQ ID NO.18所示；(3)P2S48：序列如SEQ ID NO.19所示；(4)P3S12：序列如SEQ ID NO.20所示；(5)P3S17：序列如SEQ ID NO.21所示；(6)P3S28：序列如SEQ ID NO.22所示；(7)P3S30：序列如SEQ ID NO.23所示；(8)P3S41：序列如SEQ ID NO.24所示。2.一种用于筛选两季开花鸢尾品种的引物组，其特征在于，包括以下8对，其正向引物和反向引物的核苷酸序列具体如下：(1)P2S19：正向引物序列如SEQ ID NO.1所示，反向引物序列如SEQ ID NO.2所示；(2)P2S45：正向引物序列如SEQ ID NO.3所示，反向引物序列如SEQ ID NO.4所示；(3)P2S48：正向引物序列如SEQ ID NO.5所示，反向引物序列如SEQ ID NO.6所示；(4)P3S12：正向引物序列如SEQ ID NO.7所示，反向引物序列如SEQ ID NO.8所示；(5)P3S17：正向引物序列如SEQ ID NO.9所示，反向引物序列如SEQ ID NO.10所示；(6)P3S28：正向引物序列如SEQ ID NO.11所示，反向引物序列如SEQ ID NO.12所示；(7)P3S30：正向引物序列如SEQ ID NO.13所示，反向引物序列如SEQ ID NO.14所示；(8)P3S41：正向引物序列如SEQ ID NO.15所示，反向引物序列如SEQ ID NO.16所示。3.一种用于筛选两季开花鸢尾品种的检测试剂或试剂盒，其特征在于，含有权利要求2所述引物组。4.如权利要求2所述的引物组、或权利要求3所述的检测试剂或试剂盒在筛选两季开花鸢尾品种中的应用。5.一种两季...

【专利技术属性】
技术研发人员：邵灵梅，李丹青，许曈，王小斌，张润龙，楼建华，夏宜平，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：