白酒氨基甲酸乙酯快检试纸制备方法技术

本发明专利技术涉及快速检测装置技术领域，尤其是氨基甲酸乙酯快检试纸；本发明专利技术所要解决的技术问题是提供一种能够快速检测白酒中氨基甲酸乙酯的白酒氨基甲酸乙酯快检试纸制备方法。白酒氨基甲酸乙酯快检试纸制备方法，包括以下步骤：A.使用Capture

【技术实现步骤摘要】
白酒氨基甲酸乙酯快检试纸制备方法


[0001]本专利技术涉及快速检测装置
，尤其是氨基甲酸乙酯快检试纸。

技术介绍

[0002]氨基甲酸乙酯(Ethyl Carbamate EC)，广泛存在于酒精类饮料、面包等发酵食品中，是发酵过程中的伴随产物，在白酒中含量较高。人体从酒精饮品中摄入的氨基甲酸乙酯含量是从其它发酵食品中摄入量的5倍以上。2007年，国际癌症机构(International Agency for Research on Cancer，IARC)将氨基甲酸乙酯归类为2A级致癌物。我国作为一个传统酒精饮品消费大国，氨基甲酸乙酯危害问题逐渐引起人们的关注。
[0003]目前国内外对氨基甲酸乙酯的测定主要依赖于GC
‑
MS(GB 5009.223
‑
2014)、HPLC
‑
MS(SN/T 0285
‑
2012)等大型仪器，尽管使用这些仪器可以灵敏地测定较低浓度的氨基甲酸乙酯，但是存在样品预处理复杂、仪器昂贵、对测试人员要求高、后期维护成本高等缺点。因此，建立灵敏和便捷的氨基甲酸乙酯检测新方法尤为重要。
[0004]核酸适配体是一类由25
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80个RNA或DNA碱基组成的单链寡核苷酸片段，其在空间折叠成特定构象后可与靶标分子发生特异性结合。适配体在识别靶标方面与抗体类似，但其具有更高的特异性和亲和力，理论上能用SELEX技术筛选到任何靶分子的适配体，且可以在体外通过PCR技术人工大量合成，具有变性与复性可逆、可修饰、易于长期保存等优势。由于游离的适配体序列可以吸附在纳米金表面并通过与纳米金暴露的氮原子之间的配位作用与纳米金结合，故其在试纸条上应用广泛。
[0005]现无用于检测白酒中氨基甲酸乙酯的快速检测试纸。

技术实现思路

[0006]本专利技术所要解决的技术问题是提供一种能够快速检测白酒中氨基甲酸乙酯的白酒氨基甲酸乙酯快检试纸制备方法。
[0007]本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：白酒氨基甲酸乙酯快检试纸制备方法，包括以下步骤：
[0008]A.使用Capture
‑
SELEX技术筛选出氨基甲酸乙酯核酸适配体；
[0009]B.将氨基甲酸乙酯核酸适配体溶液与纳米金混合并保温孵育，
[0010]C.在氨基甲酸乙酯核酸适配体溶液与纳米金混合物中添加BSA封闭液并保温反应，得到核酸适配体
‑
纳米金结合物；
[0011]D.将核酸适配体
‑
纳米金结合物离心纯化后重悬复溶、老化得到核酸适配体
‑
纳米金标记物；
[0012]E.将裁剪好的样品垫浸泡于样品垫封闭液中，浸泡后在烘箱中干燥，取出备用；
[0013]F.将裁剪好的结合垫浸泡于结合垫处理液中，浸泡后在烘箱中干燥，取出备用；
[0014]G.将制备好的核酸适配体
‑
纳米金标记物均匀喷于结合垫，然后将结合垫置于烘箱中干燥，取出备用；
[0015]H.将包被有阳离子聚合物聚二甲基二烯丙基氯化铵的检测线固定于硝酸纤维素膜上，将硝酸纤维素膜置于烘箱中干燥，取出备用；
[0016]I.将前述备用的样品吸收垫、结合垫、硝酸纤维素膜及吸水垫依次搭接固定于底板上。
[0017]进一步的是，对于步骤B，保温孵育温度为37℃，保温孵育时间为30min。
[0018]进一步的是，对于步骤C，保温反应温度为37℃，保温反应时间为30min。
[0019]进一步的是，对于步骤D，老化温度为4℃，老化时间为24h。
[0020]进一步的是，对于步骤E和F，浸泡时间为2h，烘箱温度为37℃，干燥时间为2h。
[0021]进一步的是，对于步骤G和H，烘箱温度为37℃，干燥时间为2h。
[0022]进一步的是，对于步骤E，按重量百分比计,样品垫封闭液为1％BSA、0.25％Triton x
‑
100、2.5％Tween
‑
20的0.01M、pH 7.4的PBS溶液。
[0023]进一步的是，对于步骤F，按重量百分比计，结合垫处理液为5％BSA、2％海藻糖、10％蔗糖、0.25％Tween
‑
20的0.01M、pH 7.4的PBS溶液。
[0024]进一步的是，还包括步骤J：还包括盖板，将盖板与底板连接形成容纳腔，吸收垫、结合垫、硝酸纤维素膜及吸水垫位于容纳腔中。
[0025]进一步的是，盖板上设有与样品吸收垫位置对应的加样孔，盖板上还设有与硝酸纤维素膜位置对应的显示窗。
[0026]本专利技术的有益效果是：将样品滴到样品垫上即可通过观察硝酸纤维素膜上是否出现红色条带来判定样品检测结果为阳性或阴性。
[0027]1、本方法制备得到的试纸，核酸适配体
‑
纳米金标记物没有受到损失，在常温下可储存60天，稳定性较好。
[0028]2、本方法制备得到的试纸对氨基甲酸乙酯检测具有特异性，能在众多竞争性靶标中特异性检测出氨基甲酸乙酯，对氨基甲酸乙酯检测的最低检测限为2.14μg
·
L
‑1,通过裸眼可辩的最低检测限为10μg
·
L
‑1，也就是当产品中的浓度高于10μg
·
L
‑1时，通过裸眼就能观察到该产品中是否含有氨基甲酸乙酯。
[0029]3、本方法制备得到的试纸检测时间短，1min即可出检测结果，检测最佳温度为10
‑
35℃，也就是不需要特殊温度，在常温下即能使用。
[0030]4、本方法制备得到的试纸操作简便，核酸适配体
‑
纳米金标记物可进行大批量制备，样品前处理方法易于操作，检测结果准确度较高，在实际应用中具有很大优势。
附图说明
[0031]图1是白酒氨基甲酸乙酯快检试纸的结构示意图；
[0032]图2是白酒氨基甲酸乙酯快检试纸的外观示意图；
[0033]图中零部件、部位及编号：底板1、样品吸收垫2、结合垫3、硝酸纤维素膜4、吸水垫5、盖板6、加样孔7。
具体实施方式
[0034]下面结合附图对本专利技术作进一步说明。
[0035]为了使本专利技术目的、技术方案和优点更加清楚，下面结合附图进一步说明本申请。
[0036]如图1，一种基于核酸适配体识别的检测氨基甲酸乙酯的快检试纸条，包括底板1、和盖板6，使用底板1将样品吸收垫2、结合垫3、硝酸纤维素膜4、吸水垫5依次固定，然后用塑料卡进行外包装。
[0037]所述材料尺寸为：底板1：0.4cm
×
6.0cm；样品吸收垫2：0.4cm
×
1.5cm；结合垫3：0.4cm
×
1.0cm；硝酸纤维素膜4：0.4cm
×
2.5cm；吸水垫5：0.4cm
×...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.白酒氨基甲酸乙酯快检试纸制备方法，其特征在于，包括以下步骤：A.使用Capture
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SELEX技术筛选出氨基甲酸乙酯核酸适配体；B.将氨基甲酸乙酯核酸适配体溶液与纳米金混合并保温孵育，C.在氨基甲酸乙酯核酸适配体溶液与纳米金混合物中添加BSA封闭液并保温反应，得到核酸适配体
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纳米金结合物；D.将核酸适配体
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纳米金结合物离心纯化后重悬复溶、老化得到核酸适配体
‑
纳米金标记物；E.将裁剪好的样品垫浸泡于样品垫封闭液中，浸泡后在烘箱中干燥，取出备用；F.将裁剪好的结合垫浸泡于结合垫处理液中，浸泡后在烘箱中干燥，取出备用；G.将制备好的核酸适配体
‑
纳米金标记物均匀喷于结合垫，然后将结合垫置于烘箱中干燥，取出备用；H.将包被有阳离子聚合物聚二甲基二烯丙基氯化铵的检测线固定于硝酸纤维素膜上，将硝酸纤维素膜置于烘箱中干燥，取出备用；I.将前述备用的样品吸收垫、结合垫、硝酸纤维素膜及吸水垫依次搭接固定于底板上。2.如权利要求1所述的白酒氨基甲酸乙酯快检试纸制备方法，其特征在于：对于步骤B，保温孵育温度为37℃，保温孵育时间为30min。3.如权利要求1所述的白酒氨基甲酸乙酯快检试纸制备方法，其特征在于：对于步骤C，保温反应温度为37℃，保温反应时间为30min。4.如权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴远根，夏恋，安明哲，周韩玲，
申请(专利权)人：宜宾五粮液股份有限公司，
类型：发明
国别省市：