一种检测探针、试剂盒及端粒酶活性的直接检测方法技术

本发明专利技术公开了一种检测探针、试剂盒及端粒酶活性的直接检测方法，本发明专利技术所述的检测探针包括金纳米颗粒及包覆在表面的双嵌段DNA1和DNA2。双嵌段DNA1能与端粒酶引物序列杂交互补，同时DNA1与DNA2具有互补序列杂交引发金纳米颗粒组装形成二聚体。端粒酶加入后，以引物为模板，延伸端粒，引发DNA2链的解链置换，从而发生纳米颗粒二聚体解离形成单体；由于纳米颗粒体积大小与阻塞电流信号呈正比，因此，加入端粒酶前后的检测探针在通过纳米孔时产生了差异更加明显的电信号，从而具有更高的信噪比，实现高灵敏的检测端粒酶活性。实现高灵敏的检测端粒酶活性。实现高灵敏的检测端粒酶活性。

【技术实现步骤摘要】
一种检测探针、试剂盒及端粒酶活性的直接检测方法


[0001]本专利技术属于端粒酶活性检测领域，特别涉及一种检测探针、试剂盒及端粒酶活性的直接检测方法。

技术介绍

[0002]端粒存在于染色体末端，是一个形似“帽子”的结构，它会随着正常细胞的有丝分裂过程逐渐变短，与细胞的衰老和凋亡息息相关。而端粒酶是一种可以维持染色体长度的逆转录酶，它会在染色体的末端持续的添加(TTAGGG)n碱基序列，使端粒在有丝分裂过程中维持长度。端粒酶普遍存在于人体的细胞中，但是在大多数的细胞中端粒酶是不具备活性的，除了造血细胞、生殖细胞以及干细胞。一旦体细胞中的端粒酶活性异常，通常与癌肿和肿瘤疾病的发生有关，因此端粒酶成为癌症等疾病的重要靶标分子。目前人们开发了多种对端粒酶活性进行检测的方法，希望解决癌症早期诊断和治疗方面存在的问题。如传统的端粒扩增法具有高的特异性，但也有扩增错误、耗时较长，样品量大等问题。最近新开发的荧光光谱，表面增强拉曼光谱，电化学分析等方法新颖，但仍存在探针易猝灭，信号响应差以及仪器昂贵等局限性。
[0003]本课题组致力于纳米孔对端粒酶本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测探针，用于端粒酶活性高灵敏度检测，其特征在于，所述检测探针包括：两个金纳米颗粒载体、分别修饰两个金纳米颗粒的双嵌段DNA1和双嵌段DNA2、作为端粒酶作用位点的端粒酶引物序列；所述双嵌段DNA1和双嵌段DNA2均包括锚定链和连接链，所述双嵌段DNA1和双嵌段DNA2的锚定链均为polyA序列，所述锚定链用于锚定所述金纳米颗粒，因此所述锚定链的长度由所述金纳米颗粒的直径决定，所述双嵌段DNA1的连接链前段与端粒酶引物序列部分互补或完全互补、后段与DNA2连接链部分互补或完全互补，从而形成稳定的二聚体结构；所述双嵌段DNA1的连接链前段指的是与双嵌段DNA1锚定链直接相连的序列。2.根据权利要求1所述的检测探针，其特征在于，所述金纳米颗粒尺寸为5
‑
20nm。3.根据权利要求1所述的检测探针，其特征在于，所述端粒酶引物序列长度为15
‑
20nt、所述双嵌段DNA1的连接链序列长度为20
‑
30nt，所述双嵌段DNA2的连接链序列长度为5
‑
8nt。4.根据权利要求3所述的检测探针，其特征在于，所述端粒酶引物序列如SEQ ID NO.3所示。5.根据权利要求4所述的检测探针，其特征在于，所述双嵌段DNA1序列如SEQ ID NO：1所示且所述双嵌段DNA2序列如SEQ ID NO：2所示。6.权利要求1所述检测探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤(1)：以金纳米颗粒为载体，采用不同序列的双嵌段DNA即双嵌段DNA1和双嵌段DNA2分别修饰AuNPs，经修饰后获得AuNPs
‑
DNA1复合物和AuNPs
‑
DNA2复合物；步骤(2)：将端粒酶引物序列、dNTPs、AuNPs
‑
DNA1复合...

【专利技术属性】
技术研发人员：武灵芝，龚靖哲，王宇朋，翁丽星，胡岚，
申请(专利权)人：南京邮电大学，
类型：发明
国别省市：