一种利用ApoJ抑制ApoB100热聚集的方法及定量检测ApoJ活性的方法技术

本发明专利技术提供了一种利用ApoJ抑制ApoB100热聚集的方法及定量检测ApoJ活性的方法。ApoJ蛋白的活性无法直接测得，但利用ApoJ蛋白具有分子伴侣功能的蛋白特性，将其加入到ApoB100蛋白中可以减少高温导致的ApoB100蛋白的错误折叠和聚集，进而保护ApoB100蛋白。ApoB100蛋白的聚集程度可以通过测定吸光值得到，从而可以得知ApoJ蛋白的活性。将ApoJ蛋白加入后，保护定量ApoB100蛋白减少变性发生率为50％时，ApoJ蛋白的加入量定义为一个活性单位，可定量检测不同批次条件下ApoJ的活性，反映出不同批次、不同反应条件下ApoJ蛋白的差异。不同反应条件下ApoJ蛋白的差异。不同反应条件下ApoJ蛋白的差异。

【技术实现步骤摘要】
一种利用ApoJ抑制ApoB100热聚集的方法及定量检测ApoJ活性的方法


[0001]本专利技术涉及对ApoJ的保护及检测
，特别涉及一种利用ApoJ抑制ApoB100热聚集的方法及定量检测ApoJ活性的方法。

技术介绍

[0002]载脂蛋白J(ApoJ，又称clusterin)是1990年从人血浆HDL中新分离出的一种多功能的糖蛋白，广泛存在于人体多种组织及体液中。ApoJ蛋白是一种相对分子质量为75～80KDa的异质二聚体蛋白质，能够与人血浆高密度脂蛋白(HDL)和极高密度脂蛋白(VHDL)相结合。ApoJ蛋白的功能复杂，参与包括人体功能的调节、抑制凋亡和炎症、参与脂质的运输等多种体内生理过程，目前已经发现ApoJ蛋白在多种疾病过程中都有高度表达，如神经退行性病变、动脉粥样硬化、心肌梗死、肿瘤等。
[0003]分子伴侣是一类与其他蛋白不稳定构象相结合并使之稳定的蛋白，它们通过控制结合和释放来帮助被结合多肽在体内的折叠、组装、转运或降解等。1997年有报道称，ApoJ蛋白启动子中的一个14bp的元件，其序列在脊椎动物中是严格保守的，被转录因子HSF1特异性识别，并能在瞬时表达分析中介导热休克诱导的转录。这说明ApoJ蛋白是一种热休克蛋白(热休克蛋白，当有机体暴露于高温时候，就会由热激发合成此种蛋白，来保护有机体自身)。ApoJ蛋白和小热休克蛋白(sHsps)是一类功能相似的分子伴侣蛋白，尽管它们之间缺乏明显的序列相似性。这两个分子伴侣蛋白都能有效地阻止目标蛋白在应激条件下的形成聚集和沉淀，如升高温度、还原和氧化。研究表明，ApoJ蛋白可以抑制与淀粉代谢相关途径的蛋白变性聚集，这些淀粉代谢相关途径的蛋白包括谷胱甘肽转移酶(GST)、肌酸磷酸激酶(CPK)、过氧化氢酶(CAT)等蛋白。例如在生理浓度下，ApoJ蛋白能有效保护谷胱甘肽s
‑
转移酶和过氧化氢酶不受热沉淀的影响，并能有效保护α
‑
乳蛋白和牛血清白蛋白不受二硫苏糖醇还原沉淀的影响。除此之外，ApoJ蛋白还能够抑制未稀释的人血清中应激诱导的蛋白质沉淀。ApoJ蛋白通过不依赖ATP的机制发挥分子伴侣作用，不可逆地与应激蛋白结合形成可溶的高分子量复合物，保持受体蛋白空间稳定，减少由于环境因素导致受体蛋白错误折叠。在这样做的过程中，它们作用于缓慢的、不折叠的蛋白质途径。这两种蛋白的构象动态和聚集状态可能对其伴侣功能起着至关重要的作用。亚基交换可能在调节伴侣作用中起重要作用；蛋白质的游离形式可能是体现伴侣活性的主要形态，而非聚集状态。
[0004]载脂蛋白(Apolipoprotein，Apo)是血浆脂蛋白中的蛋白质，其基本功能是运载脂类。载脂蛋白B(ApoB)由于氨基酸组成的差异，可分为以下亚类：载脂蛋白B48(ApoB48)和载脂蛋白B100(ApoB100)。ApoB48是乳糜微粒(CM)的载脂蛋白之一；ApoB100是极低密度脂蛋白(VLDL)和低密度脂蛋白(LDL)的载脂蛋白之一。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术旨在提出一种利用ApoJ抑制ApoB100热聚集的方法及定量检测
ApoJ活性的方法。所述ApoJ可以是天然的载脂蛋白也可以是重组的载脂蛋白。ApoJ是一种具有分子伴侣功能的蛋白，可以减少高温导致ApoB100蛋白的错误折叠，最终起到保护ApoB100蛋白作用。针对目前没有测定ApoJ蛋白活性方法的问题，利用ApoJ蛋白具有类似热激蛋白的分子伴侣功能，能够抑制蛋白在加热后形成聚集和沉淀的作用，通过检测在加热处理过程中ApoB100的活性变化情况，来定义和定量ApoJ蛋白的活性。
[0006]为达到上述目的，本专利技术的技术方案是这样实现的：
[0007]本专利技术的一方面，提出一种利用ApoJ抑制ApoB100热聚集的方法，将ApoJ蛋白加入到ApoB100蛋白中，利用所述ApoJ蛋白减少高温导致的ApoB100蛋白的错误折叠，起到保护ApoB100蛋白的作用。
[0008]本专利技术的另一方面，还提出一种用于定量检测ApoJ活性的方法，利用ApoJ蛋白可以抑制ApoB100蛋白热聚集的方法，通过测得ApoB100蛋白的吸光度，从而可得知ApoJ蛋白的活性。
[0009]进一步的，通过测定ApoB100蛋白在加热前后吸光值的变化来检测ApoJ的活性。
[0010]进一步的，所述定量检测ApoJ活性的方法包括如下步骤：
[0011]S1.将ApoJ蛋白和ApoB100蛋白从冰箱中取出后，放置于4℃的环境中解冻，以备后续使用；
[0012]S2.配制不同组别的溶液，其中空白组为ApoB100蛋白的PB缓冲液，且无需加热，对照组为ApoB100蛋白的PB缓冲液，并加热处理；实验组：配制一系列浓度配比的ApoJ蛋白和ApoB100蛋白，并置于PB缓冲液中，混匀后加热处理；
[0013]S3.然后用紫外分光光度计检测空白组、对照组和实验组的吸光值，并分别记为A1、B1、C1；
[0014]一个ApoJ蛋白活性满足
[0015]进一步的，所述步骤S2中加热处理的温度为60～200℃。
[0016]进一步的，所述步骤S2中实验组ApoB100蛋白和ApoJ蛋白的质量比为1：0.1～1：0.7。
[0017]进一步的，所述步骤S3中，用紫外分光光度计检测空白组、对照组和实验组在360nm处的吸光值。
[0018]进一步的，(C1
‑
A1)/(B1
‑
A1)
×
100％代表ApoJ蛋白保护ApoB100蛋白减少变性的发生率。
[0019]相对于现有技术，本专利技术所述的一种利用ApoJ抑制ApoB100热聚集的方法及定量检测ApoJ活性的方法具有以下优势：
[0020](1)本专利技术利用ApoJ具有分子伴侣功能这一性质，可以在加热条件下保护ApoB100蛋白，减少高温导致的错误折叠；
[0021](2)由于ApoJ蛋白的活性无法直接测定，可以借助ApoB100蛋白在加热前后吸光值的变化来定义并测定ApoJ蛋白的活性。
[0022](3)通过定量检测ApoJ蛋白的活性，能够反映出不同批次、不同反应条件下ApoJ蛋白的质量差异，且方法简单、准确可靠。
附图说明
[0023]构成本专利技术的一部分的附图用来提供对本专利技术的进一步理解，本专利技术的示意性实施例及其说明用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的不当限定。在附图中：
[0024]图1为本专利技术实施例2的拟合曲线。
具体实施方式
[0025]下面结合具体实施方式，进一步阐述本专利技术。首先应说明的是，下述实验例中的数据是由专利技术人通过大量实验获得，限于篇幅，在说明书中只展示其中的一部分，且本领域普通技术人员可以在此数据下理解并实施本专利技术。这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。此外应理解，在阅读了本专利技术的内容之后，本领域技术人员可以对本专利技术作各种改动或修改，这些改本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用ApoJ抑制ApoB100热聚集的方法，其特征在于，将ApoJ蛋白加入到ApoB100蛋白中，利用所述ApoJ蛋白减少高温导致的ApoB100蛋白的错误折叠，起到保护ApoB100蛋白的作用。2.一种用于定量检测ApoJ活性的方法，其特征在于，根据权利要求1所述的利用ApoJ抑制ApoB100热聚集的方法。3.根据权利要求2所述的一种定量检测ApoJ活性的方法，其特征在于，通过测定ApoB100蛋白在加热前后吸光值的变化来检测ApoJ的活性。4.根据权利要求3所述的一种定量检测ApoJ活性的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.将ApoJ蛋白和ApoB100蛋白从冰箱中取出后，放置于4℃的环境中解冻，以备后续使用；S2.配制不同组别的溶液，其中空白组为ApoB100蛋白的PB缓冲液，且无需加热，对照组为ApoB100蛋白的PB缓冲液，并加热处理；实验组：配制一系列浓度配比的ApoJ蛋白和ApoB100蛋白，并...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈翔，杜佩云，蔡文凯，
申请(专利权)人：厦门德馨尚品医疗科技有限公司，
类型：发明
国别省市：