一种末端脱氧核苷酸转移酶的突变体及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种末端脱氧核苷酸转移酶的突变体，其特征在于：包含如SEQ ID NO:2中列出的氨基酸序列或功能等同序列，以及至少在对应于残基P215的位置处的一个氨基酸取代或功能等同残基，其中该位置参照SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列编号；所述突变体能够在没有模板的情况下合成核酸片段；所述突变体能够将修饰的核苷酸掺入到核酸片段中。核苷酸掺入到核酸片段中。核苷酸掺入到核酸片段中。

【技术实现步骤摘要】
一种末端脱氧核苷酸转移酶的突变体及其应用


[0001]本专利技术涉及一种末端脱氧核苷酸转移酶的突变体及其应用，属于基因工程、酶工程领域，具体涉及一种末端脱氧核苷酸转移酶、其编码基因及其表达和应用。

技术介绍

[0002]末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)是遗传工程中的重要工具酶之一，是一种特殊的DNA聚合酶，可以在没有模板存在的条件下催化脱氧核苷酸结合到DNA分子的3'羟基端。此外，带有突出、凹陷或平滑末端的单双链DNA分子均可作为TdT的底物。
[0003]末端转移酶在分子生物学中应用广泛，例如，该酶可用于cDNA末端的快速扩增(RACE)中添加核苷酸，并可以用来作为在后续PCR的引物的模板；在检测细胞凋亡常用的TUNEL检测中，该酶也可以用于添加标记放射性同位素的核苷酸；在基因测序中，可使用该酶在3
’
末端加双脱氧核苷酸封端，以此降低测序反应的杂信号的产生。
[0004]小牛胸腺TdT是一种常用的类型，目前野生型末端转移酶以非天然脱氧核糖核苷酸如ddNTP为底物时封端效率较低，反应时间过长，且在37℃持续工作时本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种末端脱氧核苷酸转移酶的突变体，其特征在于：包含如SEQ ID NO:2中列出的氨基酸序列或功能等同序列，以及至少在对应于残基P215的位置处的一个氨基酸取代或功能等同残基，其中该位置参照SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列编号；所述突变体能够在没有模板的情况下合成核酸片段；所述突变体能够将修饰的核苷酸掺入到核酸片段中。2.根据权利要求1所述的末端脱氧核苷酸转移酶的突变体，其中所述取代选自P215D、P215E、P215V。3.根据权利要求1或2所述的末端脱氧核苷酸转移酶的突变体，其中所述突变体还在对应于选自F267和G372的残基的位置处包含至少一个氨基酸取代或功能等同残基。4.根据权利要求3所述的末端脱氧核苷酸转移酶的突变体，其中所述突变体在对应于选自P215、F267和G372的残基的位置处包含至少两个氨基酸取代，优选地包含三个氨基酸取代。5.根据权利要求4所述的末端脱氧核苷酸转移酶的突变体，其中所述取代选自P215D/E/V、F267A/G/S、G372I/Q/T。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的末端脱氧核苷酸转移酶的突变体，其中所述突变体在SEQ ID NO:2或功能等同序列的N末端和/或C...

【专利技术属性】
技术研发人员：任黎明，段海峰，乔朔，
申请(专利权)人：赛纳生物科技北京有限公司，
类型：发明
国别省市：