【技术实现步骤摘要】
用于检测肿瘤微小核酸标志物的表面增强拉曼散射检测试剂盒及其制备方法与应用
[0001]本专利技术属于功能纳米材料和生物检测领域，具体涉及一种用于肿瘤微小核酸标志物检测的表面增强拉曼散射(SERS)检测试剂盒及其制备方法与应用。
技术介绍
[0002]近年来，我国肿瘤的发病率呈逐年上升和年轻化趋势，是仅次于心脑血管疾病的第二段致使疾病。肿瘤通常起病隐匿，早发现、早诊断、早治疗是提高存活率的重要措施。因此，迫切需要在检测技术和方法学上取得突破。以胃癌为例，胃癌是全世界范围内发病率最高的癌症之一，严重威胁着公众的生命健康。据报道，胃癌是全球第四大最常见的癌症，也是全球癌症相关死亡的第三大常见原因。目前，内镜活检仍是胃癌临床诊断的金标准。然而，作为一种侵入性方法，它给患者造成了很大的痛苦，其诊断的准确性依赖于内科医生的技能和经验。肿瘤分子诊断是指以核酸或蛋白为核心的分子生物学诊断技术，是进行肿瘤早期诊断的重要方法。通过检测与肿瘤发生相关的生物大分子，进行肿瘤发生的预测、诊断。肿瘤标志物是指由恶性肿瘤产生或由肿瘤刺激宿主细胞产生，可反...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.用于非疾病诊断目的的肿瘤微小核酸标志物检测的表面增强拉曼散射检测试剂盒，其特征在于，所述SERS检测试剂盒包含SERS检测芯片、第一试剂和第二试剂；所述SERS检测芯片为表面修饰有发夹型DNA单链H1的银纳米棒阵列基片；所述第一试剂为发夹型DNA单链H2，所述第二试剂为配合基片使用的SERS探针；所述SERS探针为表面修饰探针单链P和拉曼分子5,5'
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二硫代双(2
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硝基苯甲酸)(DTNB)的金纳米颗粒。2.根据权利要求1所述的用于非疾病诊断目的的肿瘤微小核酸标志物检测的表面增强拉曼散射检测试剂盒，其特征在于：以检测胃癌微小核酸标志物miRNA
‑
378为例，所述发夹型DNA单链H1碱基序列如SEQ ID NO：2所示：H1：5
’‑
SH
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(CH2)6‑
TTT TTT TTT TTT TTT TTT TTT TTT TTT TCC TTC TGA CTC CAA GTC CAG TCA GAA GGA ACT AGC ACT GGA CTT GGA GT
‑3’
所述发夹型DNA单链H2的碱基序列如SEQ ID NO：3所示：H2：5
’‑
GTC CAG TGC TAG TTC CTT CTG ACT GGA CTT GGA CAC AGA AGG AAC TAG CCG ACT CAA GAG CAC
‑3’
所述探针单链P的碱基序列如SEQ ID NO：4所示：P：5
’‑
SH
‑
(CH2)6‑
TTT TTT TTT GTG CTC TTG AGT CG
‑3’
。3.根据权利要求2所述的用于非疾病诊断目的的肿瘤微小核酸标志物检测的表面增强拉曼散射检测试剂盒，其特征在于：调整H1、H2和P的碱基序列为H1
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199a、H2
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199a和P
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199a，所得试剂盒用于检测胃癌微小核酸标志物miRNA
‑
199a
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3p；调整H1、H2和P的碱基序列为H1
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100、H2
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100和P
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100，所得试剂盒用于检测胃癌微小核酸标志物miRNA
‑
100。4.根据权利要求1所述的用于非疾病诊断目的的肿瘤微小核酸标志物检测的表面增强拉曼散射检测试剂盒，其特征在于，所述银纳米棒阵列采用真空电子束蒸发镀膜技术制备；所述金纳米颗粒粒径为15～100nm。5.权利要求1所述的用于非疾病诊断目的的肿瘤微小核酸标志物检测的表面增强拉曼散射检测试剂盒，其特征在于，所述发夹型DNA单链H1的浓度为0.5～2μM，所述第一试剂的浓度为5～20μM。6.权利要求2任一项所述的用于非疾病诊断目的的肿瘤微小核酸标志物检测的表面增强拉曼散射检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(一)SERS检测芯片制备：(1)制备银纳米棒阵列并用超纯水多次冲洗；(2)将发夹型DNA单链H1退火处理后取发夹型DNA单链H1与TCEP溶液以摩尔比1：100到1：1000混合置于25℃恒温混匀仪中反应，所述的退火处理是加热95℃放置5～10分钟后于冰水...
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