一种高效高特异性检测HPA基因型的方法和试剂盒技术

一种高效高特异性检测HPA基因型的方法和试剂盒，包括以下步骤：步骤1、多组HPA引物组与检测模板退火；步骤2、在DNA聚合酶的作用实现模板退火延伸；步骤3、延伸产物结合荧光基团显色或荧光探针在DNA聚合酶外切酶活性下释放报告基团；步骤4、通过熔解曲线或不同荧光探针标记实现对不同的HPA基因型进行检测实现了对HPA1～6,15,21多个位点基因的检测；实现了高效特异性检测HPA基因型的多态性；采用双系统的报告系统，极大提高检测灵敏度和特异性；高效高特异性的富集技术，实现了低起始量样本检测。测。

【技术实现步骤摘要】
一种高效高特异性检测HPA基因型的方法和试剂盒


[0001]本专利技术涉及一种微生物领域，具体为一种高效高特异性检测HPA基因型的方法和试剂盒。

技术介绍

[0002]血小板(blood platelet，PLT)：哺乳动物血液中有形成分之一，是从骨髓成熟的巨核细胞胞质裂解脱落下来的具有生物活性的小块胞质。体积小，无细胞核，形状不规则，有质膜，没有细胞核，一般呈圆形。血小板具有特定的形态结构和生化组成，在正常血液中有较恒定的数量(如人的血小板数为1～3
×
105/mm3)，在止血、伤口愈合、炎症反应、血栓形成及器官移植排斥等生理和病理过程中有重要作用。
[0003]血小板膜含有多种蛋白质，这些蛋白质连接有大量的碳水化合物支链而成为糖蛋白。血小板糖蛋白不仅对维持血小板型态和完整性非常重要，同时构成血小板的各种受体，使血小板发挥止血及相关功能。血小板糖蛋白基因发生变异时，可改变血小板糖蛋白结构和表达水平，进而影响血小板的黏附、聚集和血栓形成。
[0004]血小板抗原根据其分布情况可分为两大类型：一是与其他细胞或组织本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种HPA基因分析高效高特异性进行检测方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1、多组HPA引物组与检测模板退火；步骤2、在DNA聚合酶的作用实现模板退火延伸；步骤3、延伸产物结合荧光基团显色或荧光探针在DNA聚合酶外切酶活性下释放报告基团；步骤4、通过熔解曲线或不同荧光探针标记实现对不同的HPA基因型进行检测。2.根据权利要求1所述的一种HPA基因分析高效高特异性进行检测方法，其特征在于，所述步骤4中的检测为：通过引物的筛选性和扩增产物的特异性两种方式耦合实现对不同模板的检测，检测方法包括HPA高效高特异性引物组、报告反应体系及高效反应液。3.根据权利要求2所述的一种HPA基因分析高效高特异性进行检测方法，其特征在于，所述扩增产物的特异性由两种方式，一种由特异性引物延伸扩增野生型模版，诱导特异性的探针报告基团水解形成成野生型的荧光信号，而突变型由所特异性的扩增，诱导产生突变型的荧光，实现两种不同模板的识别。另一种方式根据引物设计调整不同扩增产物大小，实现不同产物的Tm值不同，通过荧光信号在Tm条件下顺速也模板解离，荧光信号迅速衰减，因而通过不同Tm方式实现对不同模板的区分。4.根据权利要求3所述的一种HPA基因分析高效高特异性进行检测方法，其特征在于，所述HPA高效高特异性引物组由通用引物与错配碱基组成，所述通用引物为与HPA模板碱基互补配对的碱基组成，所述的错配碱基的错配方式为：强错配，中等错配，弱错配；碱基组合方式为：CC、GG，中等错配为：AC、GT,弱等错配为：AA、TT。5.根据权利要求4所述的一种HPA基因分析高效高特异性进行检测方法，其特征在于，所述通用引物由15～35个碱基组成；所述的通用引物的TM为55～80℃。6.根据权利要求5所述的一种HPA基因分析高效高特异性进行检测方法，其特征在于，所述的错配碱基位置为3
’
端倒数第1～8位；优先地倒数第1～3位；所述的错配碱基包括但不限于正向引物、反向引物、或者正反向引物，所述的引物3
‘
端根据检测模板分型的不同采用不同的碱基与其对应的分型匹配。7.根据权利要求6所...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆利，郑舒凯，吴惠容，肖蓁蓁，吴松，杨健，陈仕安，
申请(专利权)人：德必碁生物科技厦门有限公司，
类型：发明
国别省市：