一种基于双链特异性核酸酶和链置换反应的点突变检测方法技术

本发明专利技术涉及分子生物学领域，具体为一种点突变检测方法。本发明专利技术提供的检测方法结合了双链特异性核酸酶(DSN)和链置换反应的单碱基识别能力，在不对称PCR的产物中加入检测体系，实现对扩增产物的鉴定。该检测体系包括两条10

【技术实现步骤摘要】
一种基于双链特异性核酸酶和链置换反应的点突变检测方法


[0001]本专利技术涉及一种点突变检测方法，特别涉及一种不对称PCR结合双链特异性核酸酶及链置换反应的点突变检测方法。

技术介绍

[0002]单核苷酸突变(SNV)是由单个核苷酸改变引起的DNA突变，是人类基因组最常见、最稳定的一种突变形式。SNV影响着人类对疾病的易感性以及对病原体、药品、疫苗等的反应，影响着细菌对抗生素的耐药性等。因此对SNV的准确检测在疾病的风险性评估、诊断、治疗、实现精准医疗等方面具有重要价值。
[0003]目前，国内外用于检测SNV的技术基于不同的原理主要可划分为三类：核酸杂交，包括比较基因组杂交、荧光原位杂交和寡核苷酸微阵列分析等；聚合酶链式反应(PCR)包括实时定量PCR、等位基因特异性PCR、以及数字PCR等；以及新一代核酸测序技术。上述方法在基因检测上各具优点。但从临床诊断的角度来看，由于临床标本中通常同时存在野生型和突变型核酸，特别是在疾病的早期，大量野生型核酸的存在，使得突变型核酸所占比例常常很低，为低丰度突变核酸(&;lt;1％)，受测本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种不对称PCR结合双链特异性核酸酶及链置换反应的点突变检测方法，其制备方法包括以下步骤：(1)全血基因组DNA模板的提取用全血基因组DNA提取试剂盒(天根)对全血进行基因组DNA的提取，将提取的DNA置于-20℃保存备用。(2)不对称PCR扩增用2
×
Taq Master Mix(Vazyme，南京)试剂盒进行扩增，反应总体系为50μL,具体为25μL的2
×
Taq Master Mix,1μL的模板DNA，前引物浓度为10μM，加入体积为2μL，后引物浓度为1μM，加入体积为1μL。反应循环参数为95℃ 3min；95℃ 15s，60℃ 15s，72℃60s，30个循环；72℃5min。(3)点突变的检测反应体系总体积为100μL，其中包括10μL PCR产物，10μL 10
×
DSN master buffer，10μL protector(1μM)，10μL invader(1μM)，0.2U DSN，最后ddH2O补充至100μL。反应条件为避光50℃孵育30min，最后用荧光分光光度计测量荧光信号。2.如权利要求1所述的不对称PCR结...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢国明，张力，王玉凤，
申请(专利权)人：重庆医科大学，
类型：发明
国别省市：