生产胶原蛋白7组合物的系统和方法技术方案

本公开提供了生产包含重组胶原蛋白7和/或其功能变体的胶原蛋白7组合物的生产系统和宿主细胞。对宿主细胞进行基因工程化以稳定表达rCol7及其功能变体。胶原蛋白7组合物可用于在有需要的受试者中恢复胶原蛋白7水平，以及用于预防皮肤病况(例如，与营养不良性大疱性表皮松解症(DEB)相关的皮肤伤口)的发生、防止其进展、减轻和延迟其发生。减轻和延迟其发生。减轻和延迟其发生。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】生产胶原蛋白7组合物的系统和方法
[0001]相关公开的引用
[0002]本申请要求2019年3月27日提交的美国临时申请序列号62/824,671的优先权，该申请的内容通过引用全部并入本文。
专利

[0003]本公开涉及生产包含重组人胶原蛋白7和/或其功能变体的胶原蛋白7组合物的生产系统、工程化的宿主细胞和方法。
[0004]序列表的引用
[0005]本申请与电子格式的序列表一起提交。序列表以题为SEQLST_21181008PCT.txt的文件提供，该文件创建于2020年3月27日，大小为215,387字节。电子格式的序列表信息通过引用全部并入本文。
[0006]专利技术背景
[0007]胶原蛋白7(VII型胶原蛋白)是皮肤的重要组成部分，见于表皮基底膜区(BMZ)中，BMZ是位于皮肤的表皮层和下部真皮层之间的两层的膜。由胶原蛋白7组成的锚定纤维将表皮基底膜与乳突状真皮相连，使皮肤的表皮和真皮层保持在一起，提供结构和稳定性。
[0008]胶原蛋白7是一种由三个相同的α链多肽组成的同源三聚体。胶原蛋白7的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种生产胶原蛋白7组合物的生产系统，其包括经修饰以表达人重组胶原蛋白7(rCol7)和/或其功能变体的宿主细胞，其中所述宿主细胞经修饰以表达：(a)人胶原蛋白7α链多肽和/或其功能变体，(b)脯氨酰4
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羟化酶的α多肽或其功能变体，和(c)脯氨酰4
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羟化酶的β多肽或其功能变体，并且其中所述胶原蛋白7组合物包含人rCol7、人胶原蛋白7的功能变体或其组合。2.如权利要求1所述的生产系统，其中所述宿主细胞经修饰以包含：(a)至少一种编码重组人胶原蛋白7α链多肽或其功能变体的第一外源多核苷酸；(b)编码脯氨酰4
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羟化酶的α多肽或其功能变体的外源多核苷酸；以及(c)编码脯氨酰4
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羟化酶的β多肽或其功能变体的外源多核苷酸。3.如权利要求2所述的生产系统，其中所述宿主细胞进一步经修饰以包含：(d)编码重组人胶原蛋白7α链多肽或其功能变体的第二外源多核苷酸，其中所述第二外源多核苷酸包含：(i)与编码重组人胶原蛋白7α链多肽或其功能变体的第一外源多核苷酸的核酸序列相同的核酸序列；或(ii)与编码重组人胶原蛋白7α链多肽或其功能变体的第一外源多核苷酸的核酸序列不同的核酸序列。4.如权利要求3所述的生产系统，其中所述第一外源多核苷酸和所述第二外源多核苷酸包含不同的选择标记。5.如权利要求3所述的生产系统，其中所述宿主细胞经修饰以包含：(a)编码重组人胶原蛋白7α链多肽或其功能变体的第一外源多核苷酸，其包含SEQ ID NO.：25的核酸序列，(b)编码脯氨酰4
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羟化酶的α多肽或其功能变体的外源多核苷酸，其包含SEQ ID NO.：28的核酸序列，(c)编码脯氨酰4
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羟化酶的β多肽或其功能变体的外源多核苷酸，其包含SEQ ID NO.：30的核酸序列，和(d)编码重组人胶原蛋白7α链多肽或其功能变体的第二外源多核苷酸，其包含SEQ ID NO.：25的核酸序列。6.如权利要求3所述的生产系统，其中所述宿主细胞经修饰以包含：(a)编码重组人胶原蛋白7α链多肽或其功能变体的第一外源多核苷酸，其包含SEQ ID NO.：26的核酸序列，(b)编码脯氨酰4
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羟化酶的α多肽或其功能变体的外源多核苷酸，其包含SEQ ID NO.：29的核酸序列，(c)编码脯氨酰4
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羟化酶的β多肽或其功能变体的外源多核苷酸，其包含SEQ ID NO.：31的核酸序列，和(d)编码重组人胶原蛋白7α链多肽或其功能变体的第二外源多核苷酸，其包含SEQ ID NO.：27的核酸序列。7.如权利要求1所述的生产系统，其中所述经修饰的宿主细胞经修饰以包含：
(a)用于表达重组人胶原蛋白7α链多肽或其功能变体的第一载体；(b)用于表达脯氨酰4
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羟化酶的α多肽或其功能变体的载体；和(c)用于表达脯氨酰4
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羟化酶的β多肽或其功能变体的载体。8.如权利要求7所述的生产系统，其中所述宿主细胞进一步经修饰以包含：(d)用于表达重组人胶原蛋白7α链多肽或其功能变体的第二载体。9.如权利要求8所述的生产系统，其中所述宿主细胞经修饰以包含：(a)用于表达重组人胶原蛋白7α链多肽或其功能变体的第一载体，其包含SEQ ID NO.：26的核酸序列，(b)用于表达脯氨酰4
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羟化酶的α多肽或其功能变体的载体，其包含SEQ ID NO.：29的核酸序列，(c)用于表达脯氨酰4
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羟化酶的β多肽或其功能变体的载体，其包含SEQ ID NO.：31的核酸序列，和(d)用于表达重组人胶原蛋白7α链多肽或其功能变体的第二载体，其包含SEQ ID NO.：27的核酸序列。10.如权利要求1所述的生产系统，其中所述脯氨酰4
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羟化酶的α多肽是α
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1、α
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2或α
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3多肽。11.如权利要求10所述的生产系统，其中所述脯氨酰4
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羟化酶的α多肽是α
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1多肽。12.如权利要求1
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11中任一项所述的生产系统，其中所述宿主细胞是选自成纤维细胞、角质形成细胞、CHO细胞、HEK293细胞、C127细胞、VERO细胞、BHK细胞、HeLa细胞、COS细胞和MDCK细胞或其子代的哺乳动物细胞。13.如权利要求12所述的生产系统，其中所述经修饰的宿主细胞在无血清培养基中培养。14.一种生产胶原蛋白7组合物的生产系统，其包括经修饰以表达人重组胶原蛋白7(rCol7)和/或其功能变体的宿主细胞，其中所述宿主细胞经修饰以表达：(a)人胶原蛋白7α链多肽和/或其功能变体，(b)脯氨酰4
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羟化酶的α多肽或其功能变体，(c)脯氨酰4
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羟化酶的β多肽或其功能变体，和(d)热休克蛋白47或其功能变体，并且其中所述胶原蛋白7组合物包含人rCol7、人胶原蛋白7的功能变体或其组合。15.如权利要求14所述的生产系统，其中所述宿主细胞经修饰以包含：(a)至少一种编码重组人胶原蛋白7α链多肽或其功能变体的外源多核苷酸；(b)编码脯氨酰4
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羟化酶的α多肽或其功能变体的外源多核苷酸；(c)编码脯氨酰4
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羟化酶的β多肽或其功能变体的外源多核苷酸；和(d)编码热休克蛋白47或其功能变体的外源多核苷酸。16.如权利要求15所述的生产系统，其中所述宿主细胞经修饰以包含：(a)编码重组人胶原蛋白7α链多肽或其功能变体的外源多核苷酸，其包含SEQ ID NO.：25的核酸序列，(b)编码脯氨酰4
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羟化酶的α多肽或其功能变体的外源多核苷酸，其包含SEQ ID NO.：
28的核酸序列，(c)编码脯氨酰4
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羟化酶的β多肽或其功能变体的外源多核苷酸，其包含SEQ ID NO.：30的核酸序列，和(d)编码热休克蛋白47或其功能变体的外源多核苷酸，其包含SEQ ID NO.：32的核酸序列。17.如权利要求14所述的生产系统，其中所述经修饰的宿主细胞经修饰以包含：(a)用于表达所述重组人胶原蛋白7α链多肽或其功能变体的载体；(b)用于表达所述脯氨酰4
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羟化酶的α多肽或其功能变体的载体；(c)用于表达所述脯氨酰4
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羟化酶的β多肽或其功能变体的载体，和(d)用于表达所述热休克蛋白47或其功能变体的载体。18.如权利要求17所述的生产系统，其中所述宿主细胞经修饰以包含：(a)用于表达所述重组人胶原蛋白7α链多肽或其功能变体的载体，其包含SEQ ID NO.：26或SEQ ID NO.：27的核酸序列，(b)用于表达所述脯氨酰4
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羟化酶的α多肽或其功能变体的载体，其包含SEQ ID NO.：29的核酸序列，(c)用于表达所述脯氨酰4
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羟化酶的β多肽或其功能变体的载体，其包含SEQ ID NO.：31的核酸序列，和(d)用于表达所述热休克蛋白47或其功能变体的载体，其包含SEQ ID NO.：32的核酸序列。19.一种产生包含人rCol7和/或其功能变体的胶原蛋白7组合物的经修饰的宿主细胞，其中所述宿主细胞经转化以表达：(a)人胶原蛋白7α链多肽或其功能变体；(b)脯氨酰4
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羟化酶的α多肽或其功能变体，其中所述脯氨酰4
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羟化酶的α多肽是α
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1、α
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2或α
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3多肽；和(c)脯氨酰4
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羟化酶的β多肽或其功能变体。20.如权利要求19所述的经修饰的宿主细胞，其中所述脯氨酰4
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羟化酶的α多肽是α
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1多肽或其功能变体。21.如权利要求20所述的经修饰的宿主细胞，其中所述宿主细胞经修饰以包含：(a)至少一种编码重组人胶原蛋白7或其功能变体的第一外源多核苷酸；(b)编码脯氨酰4
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羟化酶α
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1多肽或其功能变体的外源多核苷酸；以及(c)编码脯氨...

【专利技术属性】
技术研发人员：M，
申请(专利权)人：菲尼克斯组织修复公司，
类型：发明
国别省市：