【技术实现步骤摘要】
一种叶螨属常见种的快速鉴定方法
[0001]本专利技术涉及生物技术,特别涉及一种叶螨属常见种的快速鉴定方法。
技术介绍
[0002]叶螨是蜱螨亚纲(Acari)、真螨总目(Acariformes)、绒螨目(Trombidiformes)、前气门亚目(Prostigmata)、异气门总股(Eleutherengonides)、叶螨科(Tetranychidae)的植食性螨类。叶螨是一种危害果蔬和温室植物的世界范围的重要经济害虫。叶螨属(Tetranychus)是叶螨科中经济意义最大的一类叶螨。该属叶螨与农业生产的关系密切,爆发严重时常导致作物干枯落叶,生长停滞,严重影响产量和质量,在经济上造成一定的损失。虽然叶螨属叶螨经济意义重大,但是由于形态学特征有限,且这些特征在不同种之间具有高度的相似性,再者同一植株或者同一叶片上叶螨常常会混合发生,使得叶螨的快速准确鉴定存在较大的困难。
[0003]目前,对于常规形态学鉴定较难分辨的物种,通常是采取PCR扩增特定片段如COI、ITS等然后直接测序,通过与数据库中已知序列对比鉴定物种。然而,此方法存在如下缺陷:1.数据库中的已知序列来源广泛,提交序列时数据库无法鉴别序列所属叶螨鉴定的正确性,如已有分析数据表明,数据库GenBank中的叶螨分子序列大约30%存在鉴定错误;2.PCR扩增后的ITS片段,需要经过纯化、克隆、挑斑等步骤,成本较高,若待鉴定叶螨数量较大,则载体、测序等成本非常高;3.克隆测序整个过程通常需要三天以上,若待鉴定叶螨数量较大,则工作量巨大,所耗时间更长 ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种叶螨属常见种的快速鉴定方法,其特征在于:包括如下步骤:(1)提取待鉴定叶螨总DNA;(2)使用叶螨中扩增ITS的通用引物PCR扩增ITS序列;(3)将上述PCR产物作为酶切模板,分别使用Rsa I、Mbo II、HpyF3 I、HinfI 4种酶进行酶切反应,取酶切产物,进行琼脂糖凝胶电泳,在凝胶成像系统下观察并拍照记录结果;(4)将待鉴定图谱与标准酶切图谱比对,通过比较酶切条带的数量与位置从而确定待鉴定叶螨的物种。2.根据权利要求1所述的叶螨属常见种的快速鉴定方法,其特征在于:所述的叶螨属常见种包括二斑叶螨绿色型、二斑叶螨红色型、截形叶螨、神泽叶螨、卢氏叶螨、豆叶螨、马来西亚叶螨或皮氏叶螨。3.根据权利要求1所述的叶螨属常见种的快速鉴定方法,其特征在于:所述步骤(1)的提取方法包括:将预处理完的叶螨个体加入STE缓冲液,碾磨,确保碾磨至无可见的块状叶螨组织,加入蛋白酶K,蛋白酶充分接触研磨液后离心至管底,将离心管放入水浴锅孵育,再高温变性使蛋白酶K失...
【专利技术属性】
技术研发人员:葛成,
申请(专利权)人:江苏农林职业技术学院,
类型:发明
国别省市:
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