一种用CEF转瓶培养H9N2亚型禽流感病毒的方法技术

本发明专利技术公开了一种用CEF转瓶培养H9N2亚型禽流感病毒的方法，由以下步骤组成：步骤S1：以犊牛血清的乳汉液为营养液制备CEF，步骤S2：待CEF形成致密单层后，倒出营养液，用汉克氏液洗涤，步骤S3：取H9N2亚型禽流感种毒，步骤S4：用汉克氏液稀释后接入CEF细胞瓶，在温室中的转瓶机上转动吸附，步骤S5：用维持液对CEF细胞瓶定容，所述维持液为：无血清的胰蛋白酶乳汉液，步骤S6：置温室中的转瓶机上转动培养，步骤S7：待细胞产生病变后停止培养，步骤S8：经冻融后，收获细胞瓶内的维持液，即得H9N2亚型禽流感病毒液；本发明专利技术解决了鸡胚蛋白遗留物和外源病毒污染及处理废胚造成环境污染的问题，避免了病毒培养时使用血清带来的支原体、病毒和有毒物质的污染。质的污染。

【技术实现步骤摘要】
一种用CEF转瓶培养H9N2亚型禽流感病毒的方法


[0001]本专利技术属于兽用生物制品制备领域，尤其涉及一种用CEF转瓶培养H9N2 亚型禽流感病毒的方法。

技术介绍

[0002]禽流感(avian influenza，AI)是由禽流感病毒(avian influenza virus，AIV) 引起的一种疾病，表现出轻度的呼吸道症状、产蛋下降，死亡率较低；或表现出较为严重的全身性、出血性和败血性症状，死亡率可达100％。该病广泛分布于世界很多国家或地区，对世界养禽业已造成了巨大经济损失。被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的动物疫病，我国将其规定为一类动物疫病。同时，AIV 还可感染人和哺乳动物，在公共卫生学上具有重要意义。依据病毒表面的血凝素 (Hemagglutinin，HA)和神经氨酸酶(Neuraminidase，NA)蛋白抗原性的不同，禽流感病毒可分为16个HA亚型(H1～H16)和9个NA亚型(N1～N9)。HA 是构成流感病毒囊膜纤突的主要成分之一，在病毒吸附及穿膜过程中起关键作用，并能刺激机体产生中和抗体。HA在感染过程中本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用CEF转瓶培养H9N2亚型禽流感病毒的方法，其特征在于，由以下步骤组成：步骤S1：以含犊牛血清的乳汉液为营养液制备CEF，步骤S2：待CEF形成致密单层后，倒出营养液，用汉克氏液洗涤，步骤S3：取H9N2亚型禽流感种毒，步骤S4：用汉克氏液稀释后接入CEF细胞瓶，在温室中的转瓶机上转动吸附，步骤S5：用维持液对CEF细胞瓶定容，所述维持液为：无血清的胰蛋白酶乳汉液，步骤S6：置温室中的转瓶机上转动培养，步骤S7：待细胞产生病变后停止培养，步骤S8：经冻融后，收获细胞瓶内的维持液，即得H9N2亚型禽流感病毒液。2.根据权利要求1所述的一种用CEF转瓶培养H9N2亚型禽流感病毒的方法，其特征在于，步骤S1中，营养液为含5
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10％犊牛血清的0.5％乳汉液。3.根据权利要求1所述的一种用CEF转瓶培养H9N2亚型禽流感病毒的方法，其特征在于，步骤S1中，营养液为含7％犊牛血清的0.5％乳汉液。4.根据权利要求2所述的一种用CEF转瓶培养H9N2亚型禽流感病毒的方法，其特征在于，步骤S3中，取H9N2亚型禽流感种毒时，由以下步骤组成：先确定维持液的终量，以CEF细胞瓶容量的8％
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12％计算出维持液的终量，再按维持液终量的0.1％
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1％取H9N2亚型禽流感种毒。5.根据权利要求2所述的一种用CEF转瓶培养H9N2亚型禽流感病毒的方法，其特征在于，步骤S3中，取H9N2亚型禽流感种毒时，由以下步骤组成：先...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡江锋，胡春艳，张小娟，
申请(专利权)人：杨凌绿方生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：