一种利用深色有隔内生真菌促进油茶苗生长的方法技术

本发明专利技术公开了一种利用深色有隔内生真菌促进油茶苗生长的方法，涉及油茶苗接种相关领域，利用深色有隔内生真菌与植物共生后能促进宿主植物生长和提高宿主植物抗逆性的功效来培育油茶小苗，为培育油茶优质苗木提供一种新的方法。步骤一：制备DSE菌液；在无菌操作台上将Acrocalymma vagum真菌的菌落接种到灭好菌的马铃薯葡萄糖液体培养基中，在转速为120r/min摇床中28℃振荡培养15d，使用灭菌纱布过滤收集菌丝团，无菌水冲洗数次后，将菌丝团打碎配制成浓度为1

【技术实现步骤摘要】
一种利用深色有隔内生真菌促进油茶苗生长的方法


[0001]本专利技术涉及油茶苗接种相关领域，具体为一种利用深色有隔内生真菌促进油茶苗生长的方法。

技术介绍

[0002]深色有隔内生真菌（dark septate endophyte, DSE）是近年来比较受关注的一类内生真菌，它是指一群定殖于植物根内的小型土壤真菌，这类真菌的一般特征是菌丝横隔明显、颜色较深，广泛存在于健康植物根皮层、表皮甚至维管束组织细胞内或细胞间隙，可在植物细胞内或细胞间隙形成微菌核，对根组织或细胞无负面影响。众多研究表明，DSE能够促进植物的生长，增加植物对非生物胁迫的耐受性，帮助植物抗旱、抗寒、耐受重金属污染等。Acrocalymma vagum 是DSE中一种，其促进植物生长和增加植物抗性功效已经在黄芪、烟草 、冬青、构树和红豆树中得到证实，表明Acrocalymma vagum是一种寄主范围广，促生效果明显，且能增加植物抗性的深色有隔内生真菌，具有较好的开发利用价值。
[0003]油茶是我国重要的木本油料树种，在我国已经有2300多年的栽培和利用历史。油茶具有很高的经济。其茶籽榨出来的山茶油含有80%以上不饱和脂肪酸，对人体非常有益，被称为“东方橄榄油”；其茶枯富含茶多酚、茶皂素和茶多糖，即可开发成各种洗涤用品又可开发成有机饲料和生物农药；而茶壳还是制作活性炭和生物栲胶的工业原料。油茶产业已经成为我国既强农又强工的产业之一。油茶苗前期生长缓慢，需要4
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5年才能产果，且不耐寒冷，在许多高寒地区无法种植，将DSE应用于油茶小苗培育，对促进油茶苗生长、提高油茶苗质量和抵抗不良环境等方面都具有非常重要的意义。因此市场急需研制一种利用深色有隔内生真菌促进油茶苗生长的方法来帮助人们解决现有的问题。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种利用深色有隔内生真菌促进油茶苗生长的方法，此方法主要利用深色有隔内生真菌与植物共生后能促进宿主植物生长和提高宿主植物抗逆性的功效来培育油茶小苗，为培育油茶优质苗木提供一种新的方法。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种利用深色有隔内生真菌促进油茶苗生长的方法，包括如下步骤：步骤一：制备DSE菌液；在无菌操作台上将Acrocalymma vagum真菌的菌落接种到灭好菌的马铃薯葡萄糖液体培养基中，在转速为120r/min摇床中28℃振荡培养15d，使用灭菌纱布过滤收集菌丝团，无菌水冲洗数次后，将菌丝团打碎配制成浓度为1
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105cfu/mL的菌液；步骤二：油茶小苗或油茶种子处理；步骤三：培养花盆和培养基质的消毒灭菌；步骤四：浸种；选择一个容器，清水冲洗，用75%酒精搽拭容器内部，将菌液倒入容器，放入根部灭好菌的油茶小苗或油茶种子苗，浸泡1个小时；
步骤五：盆栽培养；将灭好菌的培养基质装入花盆中，放入浸好菌液的油茶小苗或油茶种子，用灭菌培养基质覆盖小苗基部或油茶种子，立即用50ml菌液浇灌小苗或种子1次，无菌水浇灌，浇好水后将花盆放入温室中培养；步骤六：苗期管理和移栽；花盆放入温室后按常规苗木培养，及时补充水分，培养的第2周和第3周补浇50ml菌液各1次，后继续常规培养，3个月后上山移栽。
[0006]优选的，所述油茶小苗的处理方法如下：选用扦插1年左右的油茶小苗，先将小苗根部在自来水下冲洗掉泥土或基质，再将小苗根部浸入0.1%高锰酸钾溶液中浸泡10min，后用无菌水冲洗5次后放入菌液中浸泡。
[0007]优选的，所述油茶种子的处理处理方法如下：选择一个大容器，先将油茶种子用0.1%高锰酸钾溶液浸泡30min后用无菌水清洗数遍，纯河沙用0.1%高锰酸钾溶液喷湿，在大容器底部铺上河沙，高度为容器高度1/3，平铺一层油茶种子于河沙表面，后用一层5cm厚的河沙覆盖，如此反复操作直至装满容器，覆膜盖好大容器保存。
[0008]优选的，所述油茶种子三个月后收获使用，油茶种子为胚根萌发状态。
[0009]优选的，所述Acrocalymma vagum由野生红豆树根际分离获得，该真菌有促进植物生长、提高植物抗旱、抗寒、耐受重金属污染功效。
[0010]优选的，所述步骤三中，培养基质组分及其比例为黄壤土：蛭石：珍珠岩=3：1：1。
[0011]优选的，所述步骤三中，培养花盆用75%酒精搽拭消毒；培养基质的灭菌方法选用121℃、0.1MPa条件下高温高压灭菌2h与12kGy辐照灭菌其中一种，保证深色有隔内生真菌接种环境在无菌基质中进行。
[0012]优选的，所述步骤五中，灭菌培养基质的放置高度为花盆内高度的2/3。
[0013]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：1、该专利技术中，由于植物根际微生物数量和种类较多，各微生物间存在空间竞争关系，深色有隔内生真菌只有与植物形成共生关系后，才能发挥功效；所以让植物先浸染深色有隔内生真菌后在将其种植到野外，对深色有隔内生真菌抢占土壤其他微生物的生态位与侵染位点有积极作用，可保证深色有隔内生真菌有较高侵染率，与植物形成良好共生关系。
[0014]2、该专利技术中，根据最后试验结果，Acrocalymma vagum接种油茶侵染率在66.67
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76.67间，种子接种接种浸染率略高于小苗接种侵染率；接种Acrocalymma vagum的油茶苗不管是在正常浇水还是在水分胁迫下油茶苗的株高，植株干重始终高于未接种Acrocalymma vagum油茶苗，接种Acrocalymma vagum促进了油茶小苗的生长。此外，接种Acrocalymma vagum的油茶苗的脯氨酸和可溶性糖含量不管是正常浇水还是水分胁迫条件下均高于未接种Acrocalymma vagum处理，而丙二醛含量始终低于未接种Acrocalymma vagum处理，表明接种Acrocalymma vagum促进了油茶苗提高了对干旱的抵抗能力。
[0015]3、该专利技术中，根据最后试验结果，接种了Acrocalymma vagum油茶小苗不管是在株高和植物干重方面均比未接种Acrocalymma vagum油茶小苗数值高，表明在田间种植情况下，接种Acrocalymma vagum油茶苗仍能发挥DSE促进其生长的功效。此外，接种了Acrocalymma vagum油茶小苗的田间耐寒性指数、室内耐寒性指数及平均耐寒性指数的值均比未接种Acrocalymma vagum油茶小苗数值低，其耐寒性比未接种Acrocalymma vagum油茶小苗强。表明在田间种植情况下，接种Acrocalymma vagum油茶苗除了发挥其生长的功效外，还提高了油茶苗的耐寒性，增加了油茶苗对不良环境的抗逆能力。
附图说明
[0016]图1为本专利技术的油茶小苗根部侵染Acrocalymma vagum图；图2为本专利技术的Acrocalymma vagum碱基序列图。
具体实施方式
[0017]本实施例在以本专利技术技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本专利技术本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种利用深色有隔内生真菌促进油茶苗生长的方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一：制备DSE菌液；在无菌操作台上将Acrocalymma vagum真菌的菌落接种到灭好菌的马铃薯葡萄糖液体培养基中，在转速为120r/min摇床中28℃振荡培养15d，使用灭菌纱布过滤收集菌丝团，无菌水冲洗数次后，将菌丝团打碎配制成浓度为1
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105cfu/mL的菌液；步骤二：油茶小苗或油茶种子处理；步骤三：培养花盆和培养基质的消毒灭菌；步骤四：浸种；选择一个容器，清水冲洗，用75%酒精搽拭容器内部，将菌液倒入容器，放入根部灭好菌的油茶小苗或油茶种子苗，浸泡1个小时；步骤五：盆栽培养；将灭好菌的培养基质装入花盆中，放入浸好菌液的油茶小苗或油茶种子，用灭菌培养基质覆盖小苗基部或油茶种子，立即用50ml菌液浇灌小苗或种子1次，无菌水浇灌，浇好水后将花盆放入温室中培养；步骤六：苗期管理和移栽；花盆放入温室后按常规苗木培养，及时补充水分，培养的第2周和第3周补浇50ml菌液各1次，后继续常规培养，3个月后上山移栽。2.根据权利要求1所述的一种利用深色有隔内生真菌促进油茶苗生长的方法，其特征在于，所述油茶小苗的处理方法如下：选用扦插1年左右的油茶小苗，先将小苗根部在自来水下冲洗掉泥土或基质，再将小苗根部浸入0.1%高锰酸钾溶液中浸泡10min，后用无菌水冲洗5次后放入菌液中...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘燕，
申请(专利权)人：贵州省生物研究所，
类型：发明
国别省市：