一种杂交构树的遗传转化系统建立的方法及应用技术方案

本发明专利技术公开了一种杂交构树的遗传转化系统建立的方法及应用，属于植物基因工程技术领域，将杂交构树1cm无菌的叶子浸泡到侵染液里，真空抽滤5

【技术实现步骤摘要】
一种杂交构树的遗传转化系统建立的方法及应用


[0001]本专利技术属于植物基因工程
，植物高效遗传转化
，尤其涉及构树遗传转化及相关转基因材料的获得。

技术介绍

[0002]杂交构树(Broussonetia papyrifera L.)为桑科构树属落叶乔木，又名鹿仔树等，是构树杂交出的优良种，广泛分布于我国大部分温带以及热点地区。杂交构树的对于干旱、盐碱等特殊恶劣环境有着极强的适应性性，并且能够快速生长，是我国理想的用于城市绿化以及退耕还林治理土地荒漠化的树种。除此之外，杂交构树还是是我国分成重要的经济林木之一，其树皮所含有的纤维品质优良，可广泛用于造纸及创制新型纺纱材料；其树叶可以治疗小鼠肥硕，主要通过能促进小鼠体内的油脂减少，从而改变内脏脂肪变性达到治疗的目的，并且其叶还可以代替苜蓿(牧草之王)草粉和豆粕，作为添加在猪牛羊等家畜的青贮饲料；从其叶提取出的汁液有效地杀死昆虫，人们可以避开化学合成的污染环境的杀虫剂，从构树叶中提纯开发出天然植物生物杀虫剂。基于以上的杂交构树优良性状，通过遗传转化方法对这些特性的深入研究，以及发利用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种杂交构树的遗传转化系统建立的方法，其特征在于所述方法的步骤如下：(1)采集杂交构树的叶子，叶子大小为4.5
‑
5.5cm，7％的次氯酸钠消毒10min，无菌水清晰至无菌、无消毒剂残留，吸干水分；(2)提前制备侵染液：热激发将质粒转到EHA105农杆菌中，筛选出阳性菌落，置于
‑
80℃冰箱备用；取出菌液与相应抗生素LB中摇菌，当OD
600
＝0.4
‑
0.5时加100μmol
·
L
–1乙酰丁香酮，2h后离心富集菌液，使用N6侵染液重悬为OD
600
＝0.2
‑
0.3，侵染液制备完成；所述N6侵染液是N6基础培养基中，含有终浓度为30g
·
L
‑1蔗糖，100μmol
·
L
–1乙酰丁香酮，pH值为6；(3)将叶子剪成1cm小块浸泡到制备好的侵染液中，同时真空抽滤5
‑
8min；将侵染液吸干，置于共培养基N6AS共培养两天；所述共培养基N6AS是N6基础培养基中，含有终浓度为30g
·
L
‑1蔗糖，7.8g
·
L
‑1琼脂，100μmol
·
L
–1乙酰丁香酮，pH值为6；(4)将没有出现霉菌和细菌的叶子转移到筛选培养基MS5培养基诱导愈伤1.5
‑
2个月；所述MS5培养基是MS基础培养基中，含有终浓度为30g
·
L
‑1蔗糖，7.8g
·
L
‑1琼脂，4mg
·
L
–
1 2,4
‑
D，0.15mg
·
L
–16
‑
BA，300mg
·
L
–1特美汀，1.5mg
·
L
–
1 bialaphos/3mg
·
L
–1潮霉素B，pH值为6；(5)将长出的愈伤转移到分化培养基WPMD诱导再生芽1.5
‑
2个月；所述的分化培养基WPMD是在WPM基础培养基中，含有终浓度为30g
·
L<...

【专利技术属性】
技术研发人员：付春祥，曹英萍，徐悦，王玉，
申请(专利权)人：中国科学院青岛生物能源与过程研究所，
类型：发明
国别省市：