和厚朴酚在制备治疗猪血凝性脑脊髓炎病毒感染药物中的应用制造技术

本发明专利技术涉及一种和厚朴酚在制备治疗猪血凝性脑脊髓炎病毒感染药物中的应用，属于医药技术领域。本发明专利技术具体通过对体外猪血凝性脑脊髓炎病毒感染细胞模型和体内猪血凝性脑脊髓炎病毒感染小鼠模型试验进行研究，结果显示和厚朴酚在体内外均能直接在基因和蛋白水平上抑制猪血凝性脑脊髓炎病毒的复制，降低病毒滴度，证明和厚朴酚有显著的抗猪血凝性脑脊髓炎病毒的作用，可用于制备抗猪血凝性脑脊髓炎病毒感染新药的开发，并对药物靶标的确认有重要的意义。的意义。的意义。

【技术实现步骤摘要】
和厚朴酚在制备治疗猪血凝性脑脊髓炎病毒感染药物中的应用


[0001]本专利技术属于医药
，具体涉及一种和厚朴酚在制备治疗猪血凝性脑脊髓炎病毒感染药物中的应用。

技术介绍

[0002]和厚朴酚是存在于木兰科植物厚朴和凹叶厚朴的干燥干皮、根皮及枝皮中的一种联苯二酚类化合物。和厚朴酚是厚朴中主要药效成分之一，具有多种药理作用，其在抗肿瘤、保护心血管和保护神经系统等方面具有显著的作用效果。但截止目前国内外未见和厚朴酚治疗猪血凝性脑脊髓炎病毒(Porcine hemagglutinating encephalomyelitis virus，PHEV)感染的报道。
[0003]猪血凝性脑脊髓炎病是由猪血凝性脑脊髓炎病毒感染引起猪的一种急性、接触性传染病。3周龄以内哺乳仔猪感染猪血凝性脑脊髓炎病毒后呈现明显的神经症状，并引发非化脓性脑脊髓炎，死亡率可达100％。猪血凝性脑脊髓炎病毒在世界范围内广泛分布，猪群感染该病的报道呈逐年上升趋势，其对仔猪的致死性感染引起了人们的高度关注；然而目前针对该病尚无特效的治疗药物，因此迫切需要寻求新型的抗猪血凝性脑脊髓炎病毒感染药物。本专利技术首次发现和厚朴酚在体内外均具有抗猪血凝性脑脊髓炎病毒感染的作用。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供和厚朴酚在制备治疗猪血凝性脑脊髓炎病毒感染药物中的应用。
[0005]进一步的，所述治疗猪血凝性脑脊髓炎病毒感染药物的剂型为注射剂、胶囊剂、片剂或粉针剂。
[0006]与现有技术相比，本专利技术的有益效果为：<br/>[0007]本专利技术的和厚朴酚在制备治疗猪血凝性脑脊髓炎病毒感染药物的应用，通过对体外猪血凝性脑脊髓炎病毒感染细胞模型和体内猪血凝性脑脊髓炎病毒感染小鼠模型试验进行研究，结果显示和厚朴酚在体内外均能直接在基因和蛋白质表达水平上抑制猪血凝性脑脊髓炎病毒的复制，降低病毒滴度，证明和厚朴酚有显著的抗猪血凝性脑脊髓炎病毒的作用，可用于制备抗猪血凝性脑脊髓炎病毒感染新药的开发，并对药物靶标的确认有重要的意义。
附图说明
[0008]为了更清楚地说明本专利技术实施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。
[0009]图1为不同浓度的和厚朴酚溶液对细胞活力的影响。
[0010]图2为先在N2a细胞中加入和厚朴酚溶液12h后，再接种PHEV孵育12h的试验结果，其中，A为PHEV的蛋白质表达水平，B为PHEV的蛋白质表达水平分析，C为PHEV的mRNA表达水平。
[0011]图3为在N2a细胞中同时加入和厚朴酚溶液和PHEV，孵育24h的试验结果，其中，A为PHEV的蛋白质表达水平，B为PHEV的蛋白质表达水平的统计学分析，C为PHEV的mRNA表达水平的统计学分析。
[0012]图4为先在N2a细胞中先接种PHEV孵育12h后，再加入和厚朴酚溶液孵育12h的试验结果，其中，A为PHEV的蛋白质表达水平，B为PHEV的蛋白质表达水平的统计学分析，C为PHEV的mRNA表达水平的统计学分析。
[0013]图5为空白对照组、DMSO对照组、接毒组与和厚朴酚接毒组14天内小鼠体内日平均体重变化曲线。
[0014]图6中A为接毒组与和厚朴酚接毒组的PHEV的蛋白质表达水平，B为PHEV的蛋白质表达水平的统计学分析。
[0015]图7为接毒组与和厚朴酚接毒组的PHEV的mRNA表达水平的统计学分析。
具体实施方式
[0016]为了进一步理解本专利技术，下面对本专利技术优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为进一步说明本专利技术的特征和优点，而不是对本专利技术权利要求的限制。
[0017]本专利技术提供和厚朴酚在制备治疗猪血凝性脑脊髓炎病毒感染药物中的应用。
[0018]本专利技术的猪血凝性脑脊髓炎病毒感染是指由冠状病毒属引起的病毒性感染，其中病毒性感染是指猪血凝性脑脊髓炎病毒引起的感染。
[0019]本专利技术的和厚朴酚分子式是C
18
H
18
O2，相对分子质量是266.33，结构式如下：
[0020][0021]本专利技术的治疗猪血凝性脑脊髓炎病毒感染药物的剂型没有特殊限制，优选为注射剂、胶囊剂、片剂或粉针剂。
[0022]在本专利技术中所使用的术语，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义，除非另有说明。为了使本领域的技术人员更好地理解本专利技术的技术方案，下面将结合实施例对本专利技术作进一步的详细介绍。
[0023]在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂、装置、仪器、设备等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
[0024]以下结合实施例进一步说明本专利技术。
[0025]实施例1
[0026]和厚朴酚体外抗猪血凝性脑脊髓炎病毒作用试验
[0027]1.1和厚朴酚(Honokiol，HNK)的溶解和储存
[0028]称取25mg和厚朴酚溶于100μL二甲基亚砜(DMSO)溶液中作为储存液，放于4℃保
存。
[0029]1.2小鼠神经瘤母细胞(N2a细胞)的培养
[0030]N2a细胞使用含有6wt％的血清和1wt％的双抗(青霉素和链霉素)的DMEM进行培养。
[0031]1.3和厚朴酚对N2a细胞活力的影响
[0032]将N2a细胞培养在96孔板培养皿中，待其涨到70％～80％时，将和厚朴酚配置成不同浓度的溶液，浓度分别为10μM/L、15μM/L、20μM/L、25μM/L、30μM/L。使用不同浓度的溶液分别孵育N2a细胞24h，用CCK
‑
8法测定不同浓度的和厚朴酚溶液对细胞活力的影响，试验结果如图1所示。
[0033]从图1可以看出，和厚朴酚溶液在10μM/L～25μM/L时对N2a细胞活力无明显影响，而30μM/L时细胞活力明显降低，因此在后续体外实验中选用和厚朴酚溶液25μM/L检测和厚朴酚对PHEV感染的影响。
[0034]1.4和厚朴酚对PHEV感染的防治作用
[0035]和厚朴酚体外抗PHEV试验分别设立预防、直接杀死病毒、治疗模式。三种模式分别提取细胞中RNA和蛋白质进行RT
‑
qPCR和western blot试验，检测PHEV的mRNA表达水平和PHEV的蛋白质表达水平的变化。
[0036]1.4.1 RT
‑
qPCR试验的检测方法
[0037]将N2a细胞接种于六孔板，待细胞涨至70～80％时，依照不同模式的要求进行接毒或加药处理。待孵育完毕后，提取细胞内总RNA，检测细胞内PHEV的mRNA表达水平。
[0038]提取细胞内总RNA(RNA提取与反转录)的方法：待孵育完毕后，将六孔板从细胞培养箱拿出来后，用PBS洗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.和厚朴酚在制备治疗猪血凝性脑脊髓炎病毒感染药物中的应用。2.根据权利要求1所述的和厚朴酚在制备治疗猪血凝性脑脊髓炎病...

【专利技术属性】
技术研发人员：兰云刚，贺文琦，曹泽昭，陆慧君，王炳量，赵越，王改丽，宋斯伟，高丰，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：