FAM60A修饰的间充质干细胞及其制备方法和应用技术

本发明专利技术属于生物技术领域，涉及抑制间充质干细胞衰老的方法，提供了一种抑制间充质干细胞衰老的FAM60A修饰的间充质干细胞及其制备方法和应用。本发明专利技术通过对FAM60A基因转录后水平的干预修饰来抑制脂肪来源间充质干细胞衰老，本发明专利技术提供的制备肝病治疗的生物制剂，其主要细胞组分AMSC

【技术实现步骤摘要】
FAM60A修饰的间充质干细胞及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于生物
，涉及抑制间充质干细胞衰老的方法，具体涉及通过FAM60A修饰来抑制脂肪来源间充质干细胞衰老，进而提高其增殖能力和治疗潜能的方法，即提供了一种抑制间充质干细胞衰老的FAM60A修饰的间充质干细胞及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]间充质干细胞(Mesenchymal stem cell,MSC)已被证实具有强大的分化潜能、自我更新能力、免疫调节作用以及靶向治疗功能。MSC细胞移植已在多种退行性疾病和组织急慢性损伤治疗中显示出明确疗效。动物水平的研究显示，移植MSC能缓解小鼠急、慢性肝损伤模型的肝脏炎症、促进肝细胞再生。并且临床实验研究也显示，重肝患者输注MSC的耐受性良好，可显著改善肝脏功能、降低Child
‑
Pugh和MELD评分、减少腹水及总死亡率。因此，对于目前临床上尚无有效药物和治疗手段的重大疾病，如肝衰竭等，MSC移植有望作为一种极具前景的细胞治疗新策略，用以补充甚或替代因血浆及肝源短缺而受限的目前临床上肝衰竭治疗的两种主本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.FAM60A修饰的脂肪来源的间充质干细胞，其特征在于：其中，脂肪来源的间充质干细胞为成人脂肪来源的间充质干细胞hAMSC时，FAM60A干预RNA为双链RNA组合，片段序列如SEQ:NO.1—SEQ:NO.8所示，包含hFAM60A mRNA的3
’‑
UTR区400
‑
2100范围内的4个短片段的反向互补序列：SEQ:NO.1
‑
2：5
’‑
CAAAGAAGUAUAUGCAUAGGAA
‑3’3’‑
GUUUCUUCAUAUACGUAUCCUU
‑5’
SEQ:NO.3
‑
4：5
’‑
AGCUAUGCCAGCAUCUUGCCU
‑3’
3'
‑
UCGAUACGGUCGUAGAACGGA
‑5’
SEQ:NO.5
‑
6：5
’‑
GUACUGUAGCACUGUAAGCACUUUG
‑3’
3'
‑
CAUGACAUCGUGACAUUCGUGAAAC
‑5’
SEQ:NO.7
‑
8：5
’‑
AGUACAUCAUCUAUACUGUA
‑5’
3'
‑
UCAUGUAGUAGAUAUGACAU
‑3’
；脂肪来源的间充质干细胞为小鼠脂肪来源的间充质干细胞mAMSC时，用于mAMSC
‑
FAM60A构建的FAM60A干预RNA组合包含目的片段序列如SEQ:NO.1和SEQ:NO.9—SEQ:NO.14所示，其特征为包含mFAM60A mRNA的3
’‑
UTR区的200
‑
1800范围内的4个短片段的反向互补序列：SEQ:NO.9
‑
10：5
’‑
UAACCAAUGUGCAGACUACUGU
‑3’
3'
‑
AUUGGUUACACGUCUGAUGACA
‑5’
SEQ:NO.11
‑
12：5
’‑
GUACUGUACGUGACACAGCACUUUA
‑3’
3'
‑
CAUGACAUGCACUGUGUCGUGAAAU
‑5’
SEQ:NO.13
‑
14：5
’‑
AGUACAUCAUCUAUACUGUA
‑3’
3'
‑
UCAUGUAGUAGAUAUGACAU
‑5’
。2.权利要求1所述的FAM60A修饰的间充质干细胞的修饰方法，其特征在于：采用干预脂肪来源的间充质干细胞中FAM60A蛋白水平的表观遗传学修饰方法。3.根据权利要求2所述的修饰方法，其特征在于：包括如下步骤：1)第2代AMSC细胞接种于六孔板中，细胞融合度达30％
‑
50％时进行转染；2)配制转染试剂：取7.5μl Lipofectamine RNAiMAX稀释到142.5μl Opti
‑
MEM
TM
培养基中，轻轻混匀；3)配制FAM60A干预RNA：在1.5ml EP管中加入144μl Opti
‑
MEM
TM
培养基和
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20℃预冷的6μl FAM60A干预RNA 20μM；4)将稀释好的FAM60A干预RNA与稀释好的转染试剂轻柔混合，在室温下孵育10分钟；取250μl孵育好的复合物，滴加到1750μl完全培养基中，同时混匀；
5)转染6h后换完全培养基，再继续培养42h，然后常规传代；6)每2或3代重复上述步骤一次，获得AMSC
‑
FAM60A。4.根据权利要求2所述的修饰方法，所述脂肪来源的间充质干细胞为成人脂肪来源的间充质干细胞hAMSC，具体包括如下步骤：(1)脂肪来源的间充质干细胞的制备：分离hAMSC，添加L
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谷氨酰胺作为完全培养基进行培养扩增；脂肪来源的间充质干细胞增殖接近75％融合时，进行消化、传代；(2)FAM60A干预的hAMSC的构建：1)转染前一天将第2代hAMSC细胞接种到六孔板中，使第二天用于转染的细胞融合度达30％
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50％；2)配置含血清的完全培养基，注意不要加入抗生素；3)取7.5μl Lipofectamine RNAiMAX试剂稀释到142.5μl Opti
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MEM
TM
培养基中，在1.5ml EP管中轻轻混匀；4)取出
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20℃预冷的浓度为20μM的FAM60A干预RNA储存液；在1.5ml EP管中加入144μl Opti
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MEM
TM
培养基和6μl FAM60A干预RNA；FAM60A干预RNA为双链RNA组合，片段序列如SEQ:NO.1—SEQ:NO.8所示...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘艳宁，楼国华，岑叶蕾，齐津津，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：