一种基于高分辨激光共聚焦拉曼研究小分子与靶蛋白相互作用的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于高分辨激光共聚焦拉曼研究小分子与靶蛋白相互作用的方法，通过将小分子与光亲和性玻片在紫外光照射下，发生光交联反应使小分子以化学键键合到光亲和性玻片上，从而构建起小分子阵列，之后小分子阵列与靶蛋白共孵育，使小分子能与相应靶蛋白特异性结合，最后通过高分辨激光共聚焦拉曼光谱仪检测小分子阵列上的靶蛋白的拉曼位移，从而筛选出能与靶蛋白特异性结合的小分子；本发明专利技术是一种新颖的药物活性筛选的方法，将激光共聚焦拉曼光谱仪的无损、无接触、快速检测的特点与微阵列微量、高通量的特点巧妙结合，具有广阔的应用价值。阔的应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种基于高分辨激光共聚焦拉曼研究小分子与靶蛋白相互作用的方法


[0001]本专利技术涉及药物筛选
，具体涉及一种基于高分辨激光共聚焦拉曼研究小分子与靶蛋白相互作用的方法。

技术介绍

[0002]中药在中国被用于治疗许多疾病有着十分悠久的历史，如今在美国、澳大利亚、欧洲等许多国家中药也被广泛使用。许多中药在临床上被证明是有效的，然而其药效物质基础和作用机制却并不明确。中药不同于化学合成药物或天然药物有着明确的化学组成和化学结构，其由一个庞大的化合物群组合而成。因此研究中药的有效活性成分、体内作用靶点和分子机制给科学家们带来了不小的挑战。
[0003]为此，我们努力探索以期能找到一种普遍适用于中药小分子高通量活性筛选的方法。目前，微阵列在高通量筛选上有着广泛的应用。通过文献调研，以及相关的实验研究，我们发现一种光亲和性玻片非常适合用来构建中药复杂的体系中化学成分的阵列。这种光亲和性微阵列是通过光亲和性分子三氟甲基苯基双吖丙啶(Trifluoromethyl aryldiazirines，TAD)与合适的连接臂组合并通过化学键的方式固定本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于激光共聚焦拉曼研究小分子与靶蛋白相互作用的方法，其特征在于，所述方法为：(1)光交联反应制备小分子微阵列避光条件下，将小分子标准品配制成DMSO溶液，用移液枪取样在光亲和性玻片上点样，点样完成后将玻片转移至真空烘箱烘干，接着将烘干的玻片置于紫外灯下照射，使光交联反应充分完成，在玻片上制得小分子微阵列，之后玻片经洗涤，氮气吹干，备用；(2)小分子微阵列与靶蛋白共孵育用PBS缓冲液配制靶蛋白溶液，用移液枪吸取靶蛋白溶液在步骤(1)制备好的小分子微阵列上点样，点样后将玻片转移至湿盒中，湿盒放置在恒温培养箱中，静置孵育，孵育完成后取出玻片，经洗涤，氮气吹干，备用；(3)激光共聚焦拉曼检测靶蛋白拉曼位移将步骤(2)准备好的玻片置于载物台上，利用显微镜找到相应物质的斑点进行拉曼光谱采集，得到的拉曼谱图中发现靶蛋白特征拉曼位移，即证明相应位置的小分子与靶蛋白具有结合活性。2.如权利要求1所述基于激光共聚焦拉曼研究小分子与靶蛋白相互作用的方法，其特征在于，步骤(1)中，小分子标准品为戈米辛J、阿卡波糖或三七皂苷Ft1。3.如权利要求1所述基于激光共聚焦拉曼研究小分子与靶蛋白相互作用的方法，其特征在于，步骤(1)中，小分子标准品的DMSO溶液浓度为10mM，点样量为1μL/点，一块光亲...

【专利技术属性】
技术研发人员：张慧，颜继忠，谢建辉，陈若雨，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：