中药制剂中雷公藤甲素含量的测定方法技术

本发明专利技术涉及中药分析技术领域，特别涉及中药制剂中雷公藤甲素含量的测定方法。所述测定方法包括以下步骤：取雷公藤甲素标准品，配制标准溶液；将待测中药制剂样品浸于70℃～90℃的水中，然后加入乙酸乙酯，超声提取，收集有机相，向所述有机相中加入碱液萃取，去除水相，制备待测溶液；对所述标准溶液和所述待测溶液进行高效液相色谱联用质谱检测；所述质谱条件包括：扫描模式为单离子监测扫描；所述待测中药制剂样品的制备原料包括昆明山海棠、淫羊藿、菟丝子和枸杞子。本发明专利技术所述方法前处理方法简单，能够排除中药制剂中大极性成分及小极性成分(例如黄酮类成分)的干扰，而且测定结果稳定，符合毒/效成分精准控制的原则。符合毒/效成分精准控制的原则。

【技术实现步骤摘要】
中药制剂中雷公藤甲素含量的测定方法


[0001]本专利技术涉及中药分析
，特别涉及中药制剂中雷公藤甲素含量的测 定方法。

技术介绍

[0002]类风湿关节炎(Rheumatoid Arthritis,RA)是一种慢性进行性的自身免疫性 疾病，也是国际公认的重大疑难疾病。RA给病人带来的痛苦和经济消耗比癌症 更甚。现代医学治疗RA已经逐渐演变为：使用“症状缓解类药物”和生物制剂 以减轻炎性反应控制疾病进程。然而价格昂贵、生物制剂难以普及、副作用严 重影响患者依从性等因素限制了西药类的治疗手段。同时RA临床治疗的难点 是疾病造成的骨质损伤致残。许多“症状改善药”如NSAIDs、激素等，或仅改 善症状而对骨质损伤无明显作用，或其本身还可导致骨丢失造成骨损伤。
[0003]中医理论指导下的辨证论治，因人而异的个体化治疗方案在RA的逐渐应用 广泛，对比单独的西药治疗方式，中药具有独特的整体用药思维，在保证疗效 的条件下，副反应发生率相对更低。RA在中医中属于“尪痹”，治需祛风散寒、 通络。
[0004]昆仙胶囊(国药准字Z20060267)是由昆明山海棠、淫羊藿、菟丝子和枸杞 子四味中药制备而成的治疗类风湿性关节炎中药制剂，具有补肾通络、祛风除 湿的功效，主治类风湿关节炎属风湿痹阻兼肾虚证。组方中的君药昆明山海棠 为卫矛科植物昆明山海棠Tripterygium hypoglaucum(Levl.)Hutch的干燥根，是 雷公藤属植物，具有祛风除湿、续筋接骨、祛瘀通络的作用，民间常用于治疗 类风湿性关节炎。其水煎液毒性较雷公藤弱，但仍具有一定的生殖毒性，将其 与淫羊藿、枸杞子、菟丝子配伍使用后，发现其生殖毒性显著降低，且淫羊藿 具有祛风湿、强精补肾的作用，枸杞子、菟丝子具有补肾养血、强筋健骨的作 用，与昆明山海棠配伍起到减毒增效的效果。不仅能够显著减轻类风湿患者的 症状，而且不存在同类药的严重肝、肾毒副作用。昆仙胶囊上市后受到了广泛 的信赖和好评，具有良好的临床疗效和市场前景。
[0005]目前公认二萜内酯及生物碱是雷公藤属植物治疗痹病的主要有效成分，也 是主要毒性成分，二萜内酯在昆明山海棠中最主要是雷公藤甲素。雷公藤甲素 具有抗炎、免疫抑制、抗肿瘤等活性成分，是雷公藤类制剂中主要药效成分， 但同时对心、肝、肾、脾、胸腺、骨髓、生殖系统有一定程度的毒性，雷公藤 甲素的治疗浓度和毒性浓度的剂量极为接近。目前昆仙胶囊的药品标准收录于 《国家食品药品监督管理局国家药品标准》中，为了控制昆仙胶囊中毒/效成分 的有效安全平衡点，规定了雷公藤甲素的上下限，含量限度为17.5～32.5μg/粒， 如此狭窄“含量窗口”需要更加精确稳定的雷公藤甲素的测定方法进行重点监 测。同时复杂不稳定的雷公藤甲素的含量测定方法也成为了制约昆仙胶囊的产 能及稳定性的瓶颈，因此，亟需建立一种可靠稳定的雷公藤甲素含量的测定方 法。
[0006]目前，在《国家食品药品监督管理局国家药品标准》中，有昆仙胶囊雷公 藤甲素的含量测定方法及含量限度。但是原局颁标准方法在雷公藤甲素含量的 测定的样品前处理
中，采用硅胶
‑
氧化铝柱进行分离纯化，伴有工序繁琐、溶剂 消耗大的问题。具体地：
①
溶剂消耗量大，不利于环境和实验人员的安全。每 测定一个样品需消耗1,2
‑
二氯乙烷溶液140mL，目前1,2
‑
二氯乙烷被列入2B类 致癌物清单中，所引起的职业中毒事件时有发生，在批量生产中对样品进行大 量样品测定会对实验人员的安全构成一定的威胁；
②
处理工序复杂、时间长， 处理一次样品花费近两天的时间；
③
雷公藤甲素在昆仙胶囊中为微量成分(10 ppm)，复杂的操作流程对实验人员的熟练度要求极高，操作容易失误造成含量 测定不准确，含量测定的RSD值在4～7％之间，波动较大。
[0007]此外，还有介绍对昆仙胶囊中雷公藤甲素采用薄层色谱和高效液相色谱法 定性定量分析的方法。然而，这种方法同样存在溶剂使用量大、溶剂有害易污 染、测定结果不稳定等问题。具体为：
①
溶剂消耗量大，每测定一个样品，需 消耗甲醇300mL，石油醚约120mL，不适用于实际大批量生产中批次样品的大 量检测活动；
②
操作流程复杂，需将甲醇提取液在经过二氯甲烷萃取后，再经 过硅胶柱洗脱进行分离纯化，操作流程的复杂容易造成成分损失，因此用该方 法测定的昆仙胶囊含量为5.928～13.255μg/粒，为原局颁标准方法的测定含量的 23
‑
53％，测定的含量偏低。
③
使用溶剂有毒，二氯甲烷属于2A类致癌物并被 列入有毒有害水污染物名录，长期使用会对实验人员的健康存在一定损害，也 会有环境污染的隐患。
④
采用高效液相色谱
‑
紫外检测器进行测定，色谱图中成 分较多，且目标峰峰高较低，附近有其他成分色谱峰，在积分时容易存在干扰， 如图1所示。
[0008]此外，还有介绍昆明山海棠中雷公藤甲素的测定方法。该方法存在溶剂消 耗大、操作复杂、测定时间长等问题。具体为：
①
溶剂用量大，每测定一个样 品，需要消耗100mL甲醇，丙酮100mL；
②
操作过程复杂，该方法使用100mL 甲醇超声提取后，蒸干，残渣使用甲醇：丙酮＝2:1的溶剂进行溶解，上样至氧 化铝层析柱中，使用100mL丙酮洗脱，蒸干，残渣使用5mL甲醇溶解，在液 相色谱中进行测定，该方法操作复杂，耗时至少1天。
③
测定存在干扰，该方 法使用220nm波长进行测定，色谱图中有较多色谱峰，目标峰左右两边有其他 成分，如图2所示，容易有干扰。该方法主要用于测定昆明山海棠药材中的雷 公藤甲素含量，并非应用于复方制剂。
[0009]此外，还有介绍从生物样品中测定雷公藤甲素等毒性物质的方法。然而该 方法从生物样品中分离毒性物质，生物样品中主要为蛋白质，前处理应用固相 小柱去除生物样品中的蛋白等杂质，使用大型质谱进行检测，检测成本高。其 检测方法主要应用于鉴定生物样品、体外样品及可疑物的痕量检测，仅用于定 性判断，无法用于中药复方制剂的含量测定。

技术实现思路

[0010]基于此，本专利技术提供一种中药制剂中雷公藤甲素含量的测定方法，应用溶 剂安全，前处理方法简单，能够排除中药制剂中大极性成分及小极性成分(例 如黄酮类成分)的干扰，而且测定结果稳定，在原局颁标准方法的测定含量的 79％～105％之间，平均值为90％，符合毒/效成分精准控制的原则。
[0011]技术方案为：
[0012]一种中药制剂中雷公藤甲素含量的测定方法，包括以下步骤：
[0013]取雷公藤甲素标准品，配制标准溶液；
[0014]将待测中药制剂样品浸于70℃～90℃的水中，然后加入乙酸乙酯，超声提取， 收集有机相，向所述有机相中加入碱液萃取，去除水相，制备待测溶液；
[0015]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种中药制剂中雷公藤甲素含量的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：取雷公藤甲素标准品，配制标准溶液；将待测中药制剂样品浸于70℃～90℃的水中，然后加入乙酸乙酯，超声提取，收集有机相，向所述有机相中加入碱液萃取，去除水相，制备待测溶液；对所述标准溶液和所述待测溶液进行高效液相色谱联用质谱检测；所述质谱条件包括：扫描模式为单离子监测扫描；所述待测中药制剂样品的制备原料包括昆明山海棠、淫羊藿、菟丝子和枸杞子。2.根据权利要求1所述的中药制剂中雷公藤甲素含量的测定方法，其特征在于，所述质谱条件还包括：质谱检测器为单四极杆质谱检测器或三重四极杆质谱检测器，采用电喷雾离子源，正离子检测，检测离子为m/z361.16。3.根据权利要求2所述的中药制剂中雷公藤甲素含量的测定方法，其特征在于，所述质谱检测器为单四级杆质谱检测器，离子源温度为600℃
±
60℃，毛细管电压0.9kV
±
0.1kV，锥孔电压15V
±
1.5V。4.根据权利要求2所述的中药制剂中雷公藤甲素含量的测定方法，所述质谱检测器为三重四极杆质谱检测器，干燥器温度350℃
±
10℃，干燥器流量10.00L/min
±
2L/min，电喷雾电压900V
±
100V，Fragmentor为0V，毛细管电压0.9kV
±
0.1kV。5.根据权利要求1所述的中药制剂中雷公藤甲素含量的测定方法，其特征在于，所述待测中药制剂样品浸于70℃～90℃的水中的时间为3min～20min。6.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：商雪莹，雷胄熙，孙东，覃仁安，何风雷，刘敏，盛荟，马永燊，肖迪，陈小英，
申请(专利权)人：广州白云山陈李济药厂有限公司，
类型：发明
国别省市：