用于测定氧化三甲胺的试剂盒及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供用于测定氧化三甲胺的试剂盒及其制备方法和应用，本发明专利技术提供的试剂盒能够有效解决溶液工艺制备的试剂盒稳定性不佳的现状，且能实现内标物的可冻干和长期稳定性。所述试剂盒包括系列氧化三甲胺校准品和氘代氧化三甲胺内标品；所述系列氧化三甲胺校准品为具有浓度梯度的系列氧化三甲胺校准品工作液的冻干物，所述系列氧化三甲胺校准品工作液为已知浓度的氧化三甲胺标准品溶液用基质溶液稀释而成的具有浓度梯度的氧化三甲胺校准品工作液；所述氘代氧化三甲胺内标品为已知浓度的氘代氧化三甲胺标准品溶液用基质溶液稀释而成的具有预定浓度的氘代氧化三甲胺内标品工作液的冻干物；基质溶液中的基质为血清白蛋白。蛋白。蛋白。

【技术实现步骤摘要】
用于测定氧化三甲胺的试剂盒及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及内源性生物标志物的检测
，特别涉及一种测定氧化三甲胺的试剂盒及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]作为一种内源性生物标志物，氧化三甲胺（TMAO）也同其他的生物标志物（biomarker）一样，需要首先解决基质的干扰，才能确保定量的准确性。因此在选择合适的基质时，研发人员往往会采取2种主要方式：1）扣除零浓度空白血基质，即选择混合血作为基质，将不同浓度的校准品、质控品分别与零浓度混合血基质相减，去掉混合血基质中本身存在的TMAO干扰，然后再进行曲线拟合以及开展样本的含量测定。这个做法虽然保证了基质的“原汁原味”，但忽略了样本间的TMAO含量存在显著差异，且混合基质也存在批间的不一致性的事实，加上混合人血基质的获得来源和伦理受到诸多限制，因此难以应用到如开发体外诊断试剂盒（IVD）的产业化上。该做法主要是用于实验室研发以及临床试验阶段，参考文献2即采用的该模式用于建立1种TMAO定量方法开发。
[0003]2）采用非血源的替代基质，通过选择血液中的高蛋白组分，如人血清白蛋白（HSA）、牛血清白蛋白（BSA）等作为替代基质，保证校准品、质控品的基质中不存在除TMAO标准品之外的其他内源性TMAO。同时，借助同位素标记的TMAO作为内标，可抵消替代基质与人源血基质之间的背景响应差异，从而真正意义上杜绝内源性TMAO的干扰，也可实现不同待测样本间的不同含量的TMAO被全部检出。此外，替代基质的来源易得，成分简单，质量易控，因此该做法常常用于生物标志物的IVD产品开发。参考文献1选择HSA作为替代基质，开发了TMAO的定量试剂盒，初始检验性能合格。综合来看，在产品开发中，替代基质的做法往往更容易保证TMAO的定量准确度。
[0004]由于替代基质基本属于蛋白类，容易受到温度、湿度等物理条件影响而发生降解、聚合、霉变等情况，因此品种、来源和纯度这些因素是在考察基质的稳定性时需重点考虑的。HSA和BSA作为最常使用的替代基质，在TMAO产品化中需要首先考察它们的稳定性，如采用37℃加速试验、冻融试验、复溶试验等极端条件来检验基质的稳定性对TMAO测定的精密度和准确度的影响。只有通过稳定性测试的基质，才能进一步用于TMAO产品的工艺开发中。即使获得稳定性好的基质时，面对不同工艺的处理，对待测物的影响也是截然不同的。
[0005]参考文献：[1] 李晓辉，李莹，余鹏，等. 一种氧化三甲胺定量检测试剂盒及方法[P]，CN201710502265.5。
[0006][2] 刘燕，谭栩颖，许斌，等. 血清中氧化三甲胺的高效液相色谱串联质谱法测定研究[J].华南预防医学，2015,41(3):207
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212。

技术实现思路

[0007]有鉴于此，本专利技术提供一种用于测定氧化三甲胺的改进型试剂盒，该试剂盒能够有效解决溶液工艺制备的试剂盒稳定性不佳的现状，且能实现内标物的可冻干和长期稳定性。
[0008]本专利技术为达到其目的，提供如下技术方案：本专利技术一方面提供一种用于测定氧化三甲胺的试剂盒，所述试剂盒包括系列氧化三甲胺校准品和氘代氧化三甲胺内标品；所述系列氧化三甲胺校准品为具有浓度梯度的系列氧化三甲胺校准品工作液的冻干物，所述系列氧化三甲胺校准品工作液为已知浓度的氧化三甲胺标准品溶液用基质溶液稀释而成的具有浓度梯度的氧化三甲胺校准品工作液；所述氘代氧化三甲胺内标品为已知浓度的氘代氧化三甲胺标准品溶液用基质溶液稀释而成的具有预定浓度的氘代氧化三甲胺内标品工作液的冻干物；所述基质溶液中的所述基质选自血清白蛋白，优选牛血清白蛋白或人血清白蛋白；优选的，所述试剂盒还包括系列氧化三甲胺质控品，所述系列氧化三甲胺质控品为具有多个浓度水平的系列氧化三甲胺质控品工作液的冻干物，所述系列氧化三甲胺质控品工作液为已知浓度的氧化三甲胺标准品溶液用所述基质溶液稀释而成的具有不同浓度水平的氧化三甲胺质控品工作液。一些实施方式中，所述基质溶液为基质浓度1%~8%的基质水溶液，单位为g/mL，即每100mL基质水溶液中基质含量为1~8g。
[0009]一些实施方式中，所述系列氧化三甲胺校准品工作液的浓度范围为5~1000 ng/mL。
[0010]一些实施方式中，所述氘代氧化三甲胺内标品工作液的浓度为200~2000 ng/mL。
[0011]一些实施方式中，所述系列氧化三甲胺质控品工作液包括高浓度水平、中浓度水平和低浓度水平的氧化三甲胺质控品工作液；优选的，所述高浓度水平的浓度值在500~1000 ng/mL范围内，所述中浓度水平的浓度值在100~200 ng/mL范围内，所述低浓度水平的浓度值在10~20 ng/mL范围内。
[0012]一些实施方式中，所述试剂盒还包括流动相所需的溶质，优选所述溶质包括乙酸铵。
[0013]本专利技术还提供上文所述的试剂盒的制备方法，包括如下步骤：将所述已知浓度的氧化三甲胺标准品溶液用所述基质溶液稀释得到具有浓度梯度的所述系列氧化三甲胺校准品工作液；将所述已知浓度的氘代氧化三甲胺标准品溶液用所述基质溶液稀释得到所述预定浓度的氘代氧化三甲胺内标品工作液；将所述已知浓度的氧化三甲胺标准品溶液用所述基质溶液稀释得到具有多个浓度水平的所述系列氧化三甲胺质控品工作液；将所述系列氧化三甲胺校准品工作液、所述氘代氧化三甲胺内标品工作液和所述系列氧化三甲胺质控品工作液分别冻干，得到所述系列氧化三甲胺校准品、所述氘代氧化三甲胺内标品和所述系列氧化三甲胺质控品；优选的，所述冻干包括在冻干机中按照如下温度程序进行处理的步骤：1）区段一，
在
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35.0℃处理30~180min；2）区段二，在
‑
25.0℃处理200~800min；3）区段三，在
‑
15.0℃处理100~500min；4）区段四，在
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4.0℃处理500~1000min。
[0014]一些实施方式中，所述氧化三甲胺标准品溶液和/或所述氘代氧化三甲胺标准品溶液用有机溶剂或有机溶剂水溶液配制；其中，有机溶剂例如甲醇、乙腈等；优选所述系列氧化三甲胺校准品工作液、所述系列氧化三甲胺质控品工作液和所述氘代氧化三甲胺内标品工作液中，所述有机溶剂的体积百分含量小于0.1%，利于获得冻干物。在一些较佳实施例中，所述氧化三甲胺标准品溶液和所述氘代氧化三甲胺标准品溶液所用的溶剂相同，优选所用溶剂均为甲醇水溶液，例如所述甲醇水溶液中甲醇的体积百分比为50%。
[0015]本专利技术还提供上文所述的试剂盒在氧化三甲胺的测定中的应用，在进行氧化三甲胺的测定之前，按照所述系列氧化三甲胺校准品工作液的相应浓度梯度用水复溶所述系列氧化三甲胺校准品，从而得到系列氧化三甲胺校准品使用液，得到的系列氧化三甲胺校准品使用液的浓度梯度与系列氧化三甲胺校准品工作液的浓度梯度一致；按照所述氘代氧化三甲胺内标品工作液的所述预定浓度用水复溶所述氘代氧化三甲胺内标品，得到氘代氧化三甲胺内标品使用液，得到本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于测定氧化三甲胺的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括系列氧化三甲胺校准品和氘代氧化三甲胺内标品；所述系列氧化三甲胺校准品为具有浓度梯度的系列氧化三甲胺校准品工作液的冻干物，所述系列氧化三甲胺校准品工作液为已知浓度的氧化三甲胺标准品溶液用基质溶液稀释而成的具有浓度梯度的氧化三甲胺校准品工作液；所述氘代氧化三甲胺内标品为已知浓度的氘代氧化三甲胺标准品溶液用基质溶液稀释而成的具有预定浓度的氘代氧化三甲胺内标品工作液的冻干物；所述基质溶液中的所述基质选自血清白蛋白，优选为牛血清白蛋白或人血清白蛋白；优选的，所述试剂盒还包括系列氧化三甲胺质控品，所述系列氧化三甲胺质控品为具有多个浓度水平的系列氧化三甲胺质控品工作液的冻干物，所述系列氧化三甲胺质控品工作液为已知浓度的氧化三甲胺标准品溶液用所述基质溶液稀释而成的具有不同浓度水平的氧化三甲胺质控品工作液。2.根据权利要求1所述的用于测定氧化三甲胺的试剂盒，其特征在于，所述基质溶液为基质浓度1%~8%的血清白蛋白水溶液。3.根据权利要求1所述的用于测定氧化三甲胺的试剂盒，其特征在于，所述系列氧化三甲胺校准品工作液的浓度范围为5~1000 ng/mL；和/或，所述氘代氧化三甲胺内标品工作液的浓度为200~2000 ng/mL；和/或，所述系列氧化三甲胺质控品工作液包括高、中、低浓度水平的氧化三甲胺质控品工作液；优选的，高浓度水平的浓度值在500~1000 ng/mL范围内，中浓度水平的浓度值在100~200 ng/mL范围内，低浓度水平的浓度值在10~20 ng/mL范围内。4.根据权利要求1
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3任一项所述的测定氧化三甲胺的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括流动相所需的溶质，优选所述溶质包括乙酸铵。5.权利要求1
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4任一项所述的试剂盒的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将所述已知浓度的氧化三甲胺标准品溶液用所述基质溶液稀释得到具有浓度梯度的所述系列氧化三甲胺校准品工作液；将所述已知浓度的氘代氧化三甲胺标准品溶液用所述基质溶液稀释得到所述预定浓度的氘代氧化三甲胺内标品工作液；将所述已知浓度的氧化三甲胺标准品溶液用所述基质溶液稀释得到所述具有多个浓度水平的系列氧化三甲胺质控品工作液；将所述系列氧化三甲胺校准品工作液、所述氘代氧化三甲胺内标品工作液和所述系列氧化三甲胺质控品工作液分别冻干，得到所述系列氧化三甲胺校准品、所述氘代氧化三甲胺内标品和所述系列氧化三甲胺质控品；优选的，所述冻干包括在冻干机...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯利平，王婷，朱永瑞，阳艳，李超鹏，李晓晖，欧阳冬生，
申请(专利权)人：长沙都正医学检验有限责任公司，
类型：发明
国别省市：