一种TMAO阴性样本及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种TMAO阴性样本及其制备方法与应用，所述制备方法包括以下步骤：取生物样本，向所述生物样本中加入雷氏盐反应后除去沉淀即得到所述TMAO阴性样本。所述制备方法还包括加入雷氏盐前测定生物样本中TMAO的含量，再根据测得的TMAO含量按雷氏盐与TMAO的摩尔比不低于1:1的比例加入雷氏盐。TMAO与雷氏盐在0～4℃下反应5～10min。所述制备方法还包括在加入雷氏盐前，对生物样本中是否存在传染病的致病因子，若不存在，则直接混合。与现有技术相比，采用本发明专利技术方案可实现快速且批量制备TMAO阴性样本，且制备过程操作简便。

A TMAO negative sample and its preparation method and Application

The invention discloses a TMAO negative sample and its preparation method and application. The preparation method comprises the following steps: taking biological sample, adding Reynolds salt reaction to the biological sample, removing precipitation, and obtaining the TMAO negative sample. The preparation method also includes the determination of TMAO content in biological samples before adding Reynolds salt, and the addition of Reynolds salt according to the molar ratio of Reynolds salt to TMAO not less than 1:1 according to the measured TMAO content. TMAO reacts with Reynolds salt at 0-4 C for 5-10 min. The preparation method also includes direct mixing of pathogenic factors of infectious diseases in biological samples before adding Reynolds salt. Compared with the prior art, the scheme of the invention can realize rapid and batch preparation of TMAO negative samples, and the preparation process is simple and convenient.

【技术实现步骤摘要】
一种TMAO阴性样本及其制备方法与应用
本专利技术涉及生物检测
，具体涉及一种TMAO阴性样本及其制备方法与应用。
技术介绍
氧化三甲胺(Trimetlylamineoxide，TMAO)是食物中胆碱、甜菜碱和肉碱等成分经肠道菌群代谢的产物，研究表明，TMAO具有活化血小板，促进血栓形成，阻碍胆固醇逆向转运，促进泡沫细胞生成等功能，从而损伤血管内壁，促进动脉粥样斑块形成。大量文献研究表明，TMAO与心血管疾病的发生、发展密切相关，是心血管疾病的独立风险因素。人长期处于高水平TMAO状态，患心血管疾病的风险高于常人。检测人体TMAO水平，有助于实现心血管疾病早期筛查、预后评估等。在检测实验或检测产品中，阴性对照的设置是必不可少的。人体生物样本如血液、尿液等，是一个复杂的系统，含有多种物质，相较于现有技术中作为空白参照的水、磷酸缓冲盐溶液(phosphatebuffersaline，PBS)溶液、人血清白蛋白溶液等，不含TMAO的阴性样本才能更真实的体现人体内环境，消除样本中其他物质对检测结果的影响，是阴性对照的最佳选择。不仅如此，由于水、PBS溶液、人血清白蛋白溶液等替代样本由于无法扣除生物样本中的多种干扰因素，导致测定结果会存在多种系统误差，无法实现精确定量。然而，由于TMAO是人体的内源性物质，即便某些人体样本中TMAO含量很低，也很难做到根本消除，且TMAO含量很低的人体样本难以大量获取和制备。现有技术中，尚未有关于如何快速且批量制备TMAO阴性样本的报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是：一种能够实现快速且批量制备TMAO阴性样本的方法、制得的生物阴性样本及应用。为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：一种TMAO阴性样本的制备方法，包括以下步骤：取生物样本，向所述生物样本中加入雷氏盐反应后除去沉淀即得到所述TMAO阴性样本。进一步地，所述雷氏盐以雷氏盐溶液的形式加入。进一步地，所述制备方法还包括加入雷氏盐前测定生物样本中TMAO的含量，再根据测得的TMAO含量按雷氏盐与TMAO的摩尔比不低于1:1的比例加入雷氏盐。优选地，所述TMAO与雷氏盐在0～4℃下反应5～10min。进一步地，所述制备方法还包括在加入雷氏盐前，对生物样本中是否存在传染病的致病因子，若不存在，则直接混合。进一步地，所述生物样本包括血浆、血清、尿液、淋巴液、口腔唾液、脑脊液、腹水和/或透析液。进一步地，所述除去沉淀操作是通过过滤或离心操作实现。本专利技术还包括上述方法制得的生物阴性样本。本专利技术还包括上述阴性样本中在TMAO检测试剂制备中的应用。优选地，所述应用包括将所述阴性样本用作阴性质控品或用于制备TMAO标准品和/或TMAO样本稀释液。本专利技术的有益效果在于：本专利技术方案利用雷氏盐与TMAO反应生成沉淀，通过简单的离心或过滤等操作除去沉淀后取上清液步骤即可制备TMAO阴性样本，无需昂贵的仪器设备和复杂的操作过程，即可实现快速、简便的TMAO阴性样本制备；本专利技术方案可直接将多份生物样本混合后集中添加雷氏盐，消除TMAO，相比于逐一寻找低TMAO值样本，本专利技术方案更快捷、方便、经济，且能大批量制备。具体实施方式为详细说明本专利技术的
技术实现思路
、所实现目的及效果，以下结合实施方式予以说明。一种TMAO阴性样本的制备方法，包括以下步骤：取生物样本，向所述生物样本中加入雷氏盐反应后除去沉淀即得到所述TMAO阴性样本。从上述描述可知，本专利技术的有益效果在于：本专利技术方案利用雷氏盐与TMAO反应生成沉淀后去除TMAO，通过简单的离心或过滤等操作除去沉淀后取上清液步骤即可制备TMAO阴性样本，无需昂贵的仪器设备和复杂的操作过程，即可实现快速、简便的TMAO阴性样本制备；本专利技术方案可直接将多份生物样本混合后集中添加雷氏盐，消除TMAO，相比于逐一寻找低TMAO值样本，本专利技术方案更快捷、经济、方便，且能大批量制备。进一步地，所述雷氏盐以雷氏盐溶液的形式加入。从上述描述可知，本专利技术的有益效果在于：若对于样本量较少时，由于需要加入的雷氏盐量较少，则可通过溶液的形式加入。进一步地，所述制备方法还包括加入雷氏盐前测定生物样本中TMAO的含量，再根据测得的TMAO含量按雷氏盐与TMAO的摩尔比不低于1:1的比例加入雷氏盐。从上述描述可知，本专利技术的有益效果在于：处理前通过预先定量测定TMAO数值，确保反应完全；同时，为避免雷氏盐浪费，最大限度节省成本，可恰好加入与样本中TMAO含量相等的雷氏盐，既可使得样本中的TMAO完全反应完，又可使得处理后的样本中不残余雷氏盐。优选地，所述TMAO与雷氏盐在0～4℃下反应5～10min。进一步地，所述制备方法还包括在加入雷氏盐前，对生物样本中是否存在传染病的致病因子，若不存在，则直接混合。从上述描述可知，本专利技术的有益效果在于：加入雷氏盐前先进行致病因子(如乙型肝炎病毒(hepatitisBvirus，HBV)、丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus，HCV)、人类免疫缺陷病毒(HumanImmunodeficiency，HIV)、梅毒病毒等)筛查，若没有，则直接混合；若有，则直接舍弃。进一步地，所述生物样本包括血浆、血清、尿液、淋巴液、口腔唾液、脑脊液、腹水和/或透析液。从上述描述可知，本专利技术的有益效果在于：采用本专利技术方法，可广泛应用于种类生物样本。进一步地，所述除去沉淀操作是通过过滤或离心操作实现。从上述描述可知，本专利技术的有益效果在于：既可通过过滤也可通过离心操作除去沉淀；通过离心或过滤操作除去沉淀既除低了成本又使得操作简便快捷。本专利技术还包括上述方法制得的生物阴性样本。本专利技术还包括上述阴性样本中在TMAO检测试剂制备中的应用。从上述描述可知，本专利技术的有益效果在于：本专利技术方案制得的阴性样本，直接用生物样本进行处理后制得，与实际待检测的样本成分更接近，将其应用于TMAO的检测试剂及试剂盒中，将有利于提升检测试剂盒的检测结果准确性。优选地，所述应用包括将所述阴性样本用作阴性质控品或用于制备TMAO标准品和/或TMAO样本稀释液。本专利技术的实施例为：一种TMAO阴性样本的制备，包括以下步骤：S1、临床收集18例健康人的全血样本(已做相关病原微生物检测，无相关感染)，每例样本取血5ml，分离出血清后，得血浆1～2ml，将各例样本的血浆混匀，得到生物样本混合物27ml；S2、对上述操作得到的生物样本混合物中的TMAO含量进行定量检测，重复10次取平均值(每次样本量为200μl)，测得混合物的TMAO浓度均值为141.67ng/ml；S3、计算剩余25ml混合物中TMAO的总含量为3541.75ng，约合47.1542nmol，按照1:1.2，需要添加雷氏盐47.1542nmol，即16.7μg由于μg级称量操作困难，采用雷氏盐溶液的形式添加(将雷氏盐溶液制备成20mg/L的溶液，添加1ml到混合物中)；S4、离心取上清，制得TMAO阴性样本25.5ml；S5、对制得的TMAO阴性样本取样再次通过上述步骤S2相同定量方法进行TMAO浓度检测，均值为0.028ng/ml(同样重复10次)，即制得了TMAO阴性样本23.5ml，按照每次检测设置1个阴性质控品，每个阴性质控品200μl来估算，本次的制备量可用于117次本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种TMAO阴性样本的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：取生物样本，向所述生物样本中加入雷氏盐反应后除去沉淀即得到所述TMAO阴性样本。

【技术特征摘要】
1.一种TMAO阴性样本的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：取生物样本，向所述生物样本中加入雷氏盐反应后除去沉淀即得到所述TMAO阴性样本。2.根据权利要求1所述的TMAO阴性样本的制备方法，其特征在于：所述雷氏盐以雷氏盐溶液的形式加入。3.根据权利要求1所述的TMAO阴性样本的制备方法，其特征在于：所述制备方法还包括加入雷氏盐前测定生物样本中TMAO的含量，再根据测得的TMAO含量按雷氏盐与TMAO的摩尔比不低于1:1的比例加入雷氏盐。4.根据权利要求1所述的TMAO阴性样本的制备方法，其特征在于：所述TMAO与雷氏盐在0～4℃下反应5～10min。5.根据权利要求1所述的TMAO阴性样本的制备方法，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵洪斌，郭飞，李晓晖，余鹏，郭凡财，欧阳冬生，
申请(专利权)人：长沙都正医学检验有限责任公司，长沙都正生物科技有限责任公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43