一种易栓症基因突变的多重PCR检测方法和试剂盒技术

本发明专利技术涉及一种易栓症基因突变的多重PCR检测方法和检测盒，方法包括以下步骤：获取待检测基因第一轮扩增产物；使用接头引物对获得的扩增产物进行第二轮扩增，对获得的文库进行测序；对获得的测序结果进行分析，实现全编码区的突变检测。本发明专利技术对待检测样品的起始量要求低，可对血浆和血清中的极低DNA样品进行分析；可实现全编码区基因突变检测，能发现新的基因突变；检测灵敏度高，检测时间短，结合高通量测序技术，可短时间内实现全编码区突变检测。测。测。

【技术实现步骤摘要】
一种易栓症基因突变的多重PCR检测方法和试剂盒


[0001]本专利技术属于基因突变检测领域，具体涉及一种易栓症基因突变的多重PCR检测方法和试剂盒。

技术介绍

[0002]血栓是全球前三位致死性心血管疾病
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心脏病、脑卒中和静脉血栓栓塞症的共同发病机制。前两者的严重程度已经被广泛了解，但是静脉血栓认知仍然很低。在美国，每年有10～30万人死于静脉血栓，相关住院人数超过50万。在欧洲，每年有50万人死于静脉血栓，超过艾滋病、乳腺癌和前列腺癌、高速公路交通事故死亡人数之和。一般来说易栓症是指由于遗传性或获得性原因导致机体容易发生血栓的一种病理生理过程，其不同于高凝状态和血检前状态，是指患者存在易发生血栓的缺陷,血管壁损伤、血流滞缓、血液高凝是易栓症形成的三大要素，这种缺陷可以是遗传的，也可继发于某种疾病呈获得性。临床上以以静脉血栓栓塞症(venous thromboembolism，VTE)为多见，如下肢深静脉血栓(deep venous thrombosis，DVT)、肺栓，也有少数为动脉血栓栓塞。如蛋白C、蛋白S编码基因缺陷本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种易栓症基因突变的多重PCR检测方法，其特征是，所述方法包括以下步骤：步骤一、获取待检测基因第一轮扩增产物；步骤二、使用接头引物对步骤一获得的扩增产物进行第二轮扩增，其中，所述接头引物的上游引物SEQ ID NO.3的碱基序列为：“AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACGAGCTCAAACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT”；下游引物SEQ ID NO.4的碱基序列为：“CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATCGATGCGAGTGACTGGAGTTCCTTGGCACCCGAGAATTCCA”；步骤三、对步骤二获得的文库进行测序；步骤四、对步骤三获得的测序结果进行分析，实现全编码区的突变检测。2.如权利要求1所述的易栓症基因突变的多重PCR检测方法，其特征是：步骤一包括使用609对引物对所述待检测基因进行扩增，所述609对引物为具有SEQ ID No 5
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SEQ ID No 1327所示序列或其同源序列。3.如权利要求2所述的易栓症基因突变的多重PCR检测方法，其特征是：所述609对引物包括第一套引物对与第二套引物对；所述第一套引物对为具有SEQ ID N0.5
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SEQ ID NO.719所示序列或其同源序列；所述第二套引物对为具有SEQ ID N0.720
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SEQ ID NO.1327所示序列或其同源序列。4.如权利要求3所述的易栓症基因突变的多重PCR检测方法，其特征是：序列SEQ ID N0.5
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SEQ ID NO.1327相邻序列号的引物两两配对形成609对引物。5.如权利要求3所述的易栓症基因突变的多重PCR检测方法，其特征是：每个上游引物的5'端添加序列SEQ ID N0.1：“ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT”；每个下游引物的5'端添加序列SEQ ID N0.2：“GTGACTGGAGTTCCTTGGCACCCGAGAATTCCA”。6.如权利要求1所述的易栓症基因突变的多重PCR检测方法，其特征是：所述步骤二包括对所述步骤一获得的产...

【专利技术属性】
技术研发人员：张钧，李浩男，
申请(专利权)人：基诺莱重庆生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：