一种基于免疫磁分离和点击化学反应的金黄色葡萄球菌的检测试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于免疫磁分离和点击化学反应的金黄色葡萄球菌的检测试剂盒，包括免疫磁纳米探针、显色液A、显色液B、10

【技术实现步骤摘要】
一种基于免疫磁分离和点击化学反应的金黄色葡萄球菌的检测试剂盒及其检测方法


[0001]本专利技术属于微生物检测
，尤其涉及一种基于免疫磁分离和点击化学反应的金黄色葡萄球菌的检测试剂盒及其检测方法。

技术介绍

[0002]近年来，由食源性病原体引起的食品安全问题已成为全球共同关注的公共卫生问题之一。金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus，S.aureus)，简称金葡菌，作为一种常见的食源性致病菌，被认为是世界范围内最重要的食源性疾病之一。金葡菌常以奶、肉、蛋、鱼及其制品为载体，其产生的肠毒素可引起局部化脓性感染、伪膜性肠炎，心包炎，严重时可导致脓毒症、败血症等全身感染。同时，金黄色葡萄球菌感染也是我国医院获得性感染的重要原因，并且医院感染发病率呈逐年上升趋势。因此，对其进行现场监控与抽检的现场快速准确检测已成为公共卫生检测领域的研究热点之一。
[0003]目前，对于金葡菌检测一般采用分离培养生化鉴定技术、免疫学检测技术和分子生物学检测技术等。分离培养生化鉴定技术存在增菌耗时长、灵敏度较低等不足；基于抗原
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于免疫磁分离和点击化学反应的金黄色葡萄球菌的检测试剂盒，其特征在于，包括免疫磁纳米探针、显色液A、显色液B、10
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106CFU/mL标准菌检测比色卡、磁铁和无菌PBS缓冲液；所述显色液A为抗坏血酸磷酸酯与硫酸铜混合液；所述显色液B为叠氮基和乙炔基修饰的金纳米粒子混合液。2.根据权利要求1所述的金黄色葡萄球菌的检测试剂盒，其特征在于，所述的免疫磁纳米探针为碱性磷酸酶和金黄色葡萄球菌适配体标记的羧基化磁珠。3.根据权利要求1所述的金黄色葡萄球菌的检测试剂盒，其特征在于，所述的显色液A为抗坏血酸磷酸酯与硫酸铜按1:5比例配置而成，所述抗坏血酸磷酸酯浓度为5mM。4.根据权利要求2所述的金黄色葡萄球菌的检测试剂盒，其特征在于，所述的免疫磁纳米探针浓度为0.5mg/mL，显色液A为0.5mL，显色液B为0.5mL。5.根据权利要求2所述的金黄色葡萄球菌的检测试剂盒，其特征在于，所述的免疫磁纳米探针的制备方法，包括如下步骤：1)将将1.08g六水合氯化铁与22mL乙二醇超声混匀；2)向1)中加入1.2g结晶乙酸钠、0.2g柠檬酸三钠和0.2g聚乙二醇6000；3)将溶液2)置于反应釜中，在200℃的温度下反应18h，用磁铁分离得到的黑色磁性固体物质，用超纯水和乙醇交替清洗，得到羧基化Fe3O4纳米磁珠；4)取羧基化Fe3O4纳米磁珠超声分散于PBS缓冲液中，使其浓度为5mg/mL；5)向4)中加入1
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(3
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二甲氨基丙基)
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乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)和N
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羟基琥珀酰亚胺(NHS)，使其浓度为10mg/mL；6)30min后，用PBS缓冲液清洗并重悬于1mLPBS缓冲液中，加入1mg碱性磷酸酶，室温反应2...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘玉申，朱董楠，孙萌悦，徐迎春，乔文腾，王鲁良，胡振华，刘芳洁，柳全文，贡汉生，
申请(专利权)人：鲁东大学，
类型：发明
国别省市：