一种N-甲基-D-天冬氨酸受体重组抗原、其制备方法及含有该重组抗原的试剂盒技术

本发明专利技术提供一种N

【技术实现步骤摘要】
一种N
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甲基
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D
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天冬氨酸受体重组抗原、其制备方法及含有该重组抗原的试剂盒


[0001]本专利技术涉及诊断原料试剂领域，具体涉及一种N
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甲基
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D
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天冬氨酸受体重组抗原、其制备方法及含有该重组抗原的试剂盒。

技术介绍

[0002]N
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甲基
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D
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天冬氨酸受体(NMDAR)是三种离子型谷氨酸受体的其中之一，作为离子通道位于人脑中，在人中枢系统的脑神经发育和神经元变化的过程中起到了重要的作用。NMDAR主要作用是神经信号传导感应，当脑细胞膜势差解除了镁离子阻碍的同时NMDAR与谷氨酸和甘氨酸结合时，NMDAR被激活后打开，带正电荷的离子通过细胞膜以达到传递神经信号的目的。N
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甲基
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D
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天冬氨酸特异性得与NMDAR结合，其不与其他谷氨酸受体结合。
[0003]与其他谷氨酸受体不同的是NMDAR打开离子通道需要同时结合两个不同的激动剂，分别时谷氨酸和甘氨酸。与镁离子结合后，NMDAR离子通道会随之关闭。NMDAR同时作于神经突触结合前与后，在结合前影响着神经信号得释放以及神经元可塑性，在结合后用于调整缓解突触结合后释放的电信号物质，同时调整神经元可塑性。NMDAR蛋白表达过程中的翻译后修饰过程也会对NMDAR表达的位置和通道开合有着巨大的影响。由于这些不寻常的作用模式，NMDAR作为人脑神经产生特异性生理反应的检测器。
[0004]常规的NMDAR蛋白是一个异构四聚体蛋白，其中包含两个甘氨酸结合亚单元GluN1和两个谷氨酸结合亚单元GluN2，每个亚单元还分成不同的亚型，不同亚型根据其自身作用特点，在不同的位置或时间点进行表达，研究表明神经突触上的NMDAR能抵抗神经毒素，而反之突出外NMDAR则会导致细胞凋亡。此外不同亚单元组成的NMDAR的作用主要区别于激动剂的结合效率，离子通过率及通道打开总概率。
[0005]由于NMDAR作用的独特性，其与多种疾病的发病相关，包括帕金森综合征，阿尔兹海默症，亨廷顿病，孤独症，其中最主要的病症为抗NMDAR自身抗体相关性脑炎。抗NMDAR自身抗体相关性脑炎最出被归类为副肿瘤综合征，是由于肿瘤引起的免疫反应与大脑产生交叉反应所引起的后遗症。后期研究发现，具有相关症状的病人样本内都发现了特异性的抗NMDAR自身抗体，这些自身抗体作用与大脑海马体，由此此疾病被命名为抗NMDAR自身抗体相关性脑炎。病理学角度上看，NMDAR所导致的抗NMDAR抗体渗透过大脑皮层至海马体，由此海马体上的NMDAR急剧减少，多项数据显示抗NMDAR抗体渗透入神经中枢并攻击NMDAR会影响和调节病情进展。抗NMDAR自身抗体相关性脑炎会有复发风险，其复发与抗体浓度的降低没有必然联系，由此推断其他生理因素也参与了发病机理。
[0006]抗NMDAR自身抗体相关性脑炎作为最常见的非病毒性脑炎，在所有年龄段的人群中都有发现，包括儿童和老年人，其主要发病在女性群体中，年轻患者居多，发病平均年龄为23岁，这一系列特点也符合免疫疾病在不同性别人群中的发病率差别较大这一特点相一致。
[0007]NMDAR自身抗体相关脑炎的症状主要包括精神病，记忆丧失，自律神经失调，癫痫。
有三至六成的患者患有肿瘤，尤其是卵巢瘤。后续研究发现以下症状也与抗NMDAR自身抗体有着密切的联系，包括不明原因的发热，失眠，神经性厌食症，儿童单边运动功能障碍症。
[0008]由于NMDAR蛋白是个膜蛋白且分子量大，无法使用原核细胞表达全长蛋白，而天然纯化也有较大难度且制备产量极小，同时NMDAR不同得亚单元互相作用起到了稳定蛋白结构的目的，单独表达胞外区域或单个亚单位很难得到接近天然蛋白活性的重组蛋白，且蛋白稳定性不佳。因此大规模表达NMDAR抗原蛋白成为了抗NMDAR抗体检测试剂研发中的主要难点。

技术实现思路

[0009]本专利技术的目的是提供一种产量高，稳定性好且蛋白活性接近天然NMDAR蛋白的N
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甲基
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天冬氨酸受体重组抗原。
[0010]本专利技术的另一目的是提供一种编码所述的N
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甲基
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天冬氨酸受体重组抗原的多核苷酸。
[0011]本专利技术的另一目的是提供一种含有所述的多核苷酸的表达载体。
[0012]本专利技术的另一目的是提供一种含有所述的多核苷酸或所述的表达载体的细胞株。
[0013]本专利技术的另一目的是提供一种具有高表达量的N
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甲基
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D
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天冬氨酸受体重组抗原的制备方法。
[0014]本专利技术的另一目的是提供一种用于检测抗N
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甲基
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D
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天冬氨酸受体抗体或用于检测与抗N
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甲基
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天冬氨酸受体抗体阳性相关的疾病的试剂盒。
[0015]为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：
[0016]一种N
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甲基
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D
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天冬氨酸受体重组抗原，所述的N
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甲基
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D
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天冬氨酸受体重组抗原包括亚单位GluN1a重组蛋白，所述的亚单位GluN1a重组蛋白的氨基酸序列为：将SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中第22位半胱氨酸突变为丝氨酸，第61位天冬酰胺、第350位天冬酰胺、第471位天冬酰胺和第771位天冬酰胺突变为谷氨酰胺，第595位谷氨酸和第597位谷氨酸突变为丝氨酸，第598位谷氨酸突变为苏氨酸后的氨基酸序列，
[0017]所述的N
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甲基
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D
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天冬氨酸受体重组抗原还包括亚单位GluN2A重组蛋白和/或亚单位GluN2B重组蛋白，
[0018]所述的亚单位GluN2A重组蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，
[0019]所述的亚单位GluN2B重组蛋白的氨基酸序列为：将SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列中第348位天冬酰胺突变为天冬氨酸，第838位半胱氨酸和第849位半胱氨酸突变为丝氨酸后的氨基酸序列。
[0020]编码权利所述的N
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甲基
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D
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天冬氨酸受体重组抗原的多核苷酸包括编码所述的亚单位GluN1a重组蛋白的核苷酸片段和编码所述的亚单位GluN2A重组蛋白的核苷酸片段，
[0021]或，所述的多核苷酸包括编码所述的亚单位GluN1a重组蛋白的核苷酸片段和编码所述的亚单位GluN2B重组蛋白的核苷酸片段，
[0022]或，所述的多核苷酸包括编本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种N
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甲基
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D
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天冬氨酸受体重组抗原，其特征在于，所述的N
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甲基
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D
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天冬氨酸受体重组抗原包括亚单位GluN1a重组蛋白，所述的亚单位GluN1a重组蛋白的氨基酸序列为：将SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列中第22位半胱氨酸突变为丝氨酸，第61位天冬酰胺、第350位天冬酰胺、第471位天冬酰胺和第771位天冬酰胺突变为谷氨酰胺，第595位谷氨酸和第597位谷氨酸突变为丝氨酸，第598位谷氨酸突变为苏氨酸后的氨基酸序列，所述的N
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甲基
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D
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天冬氨酸受体重组抗原还包括亚单位GluN2A重组蛋白和/或亚单位GluN2B重组蛋白，所述的亚单位GluN2A重组蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列，所述的亚单位GluN2B重组蛋白的氨基酸序列为：将SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列中第348位天冬酰胺突变为天冬氨酸，第838位半胱氨酸和第849位半胱氨酸突变为丝氨酸后的氨基酸序列。2.编码权利要求1所述的N
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甲基
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天冬氨酸受体重组抗原的多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸包括编码所述的亚单位GluN1a重组蛋白的核苷酸片段和编码所述的亚单位GluN2A重组蛋白的核苷酸片段，或，所述的多核苷酸包括编码所述的亚单位GluN1a重组蛋白的核苷酸片段和编码所述的亚单位GluN2B重组蛋白的核苷酸片段，或，所述的多核苷酸包括编码所述的亚单位GluN1a重组蛋白的核苷酸片段、编码所述的亚单位GluN2A重组蛋白的核苷酸片段和编码所述的亚单位GluN2B重组蛋白的核苷酸片段。3.含有权利要求2所述的多核苷酸的表达载体。4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于...

【专利技术属性】
技术研发人员：葛霄鹏，
申请(专利权)人：迪亚莱博张家港生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：