【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于体外诊断生化检测，具体涉及一种同型半胱氨酸检测试剂盒。
技术介绍
1、同型半胱氨酸(hcy)是体内三种含硫氨基酸之一，是蛋氨酸代谢的中间产物，其本身不参与蛋白质的合成。蛋氨酸分子含有s甲基；在与atp作用生成s腺苷蛋氨酸后，可通过各种转甲基作用为体内已知的约50多种具有重要生理活性的物质提供甲基。s腺苷蛋氨酸在甲基转移酶作用下将甲基转移至另一物质后，生成s腺苷同型半胱氨酸，后者进一步脱去腺苷，生成同型半胱氨酸。血浆中的同型半胱氨酸约70%与白蛋白结合，为结合型。其余的游离型则主要以二硫同型半胱氨酸和以二硫键结合的同型半胱氨酸-半胱氨酸化合物形式存在，只有少量以还原型同型半胱氨酸存在于血浆中。我们通常所指的浓度是总的同型半胱氨酸浓度。正常空腹状态下，hcy血浆浓度为5~15μmol/l，遗传或获得性因素使得hcy浓度持续高于正常值，即称为高同型半胱氨酸血症。近年来大量研究证实同型半胱氨酸水平升高与心脑血管疾病、外周血管疾病、神经系统退行性疾病、糖尿病、妊娠高血压综合征、肝硬化、慢性肾病等疾病高度相关。
2、目前用于检测hcy的方法主要有液高效液相法、循环酶法、酶联免疫法和化学发光免疫法。液高效液相(hplc)法需要进行衍生化处理，操作较为复杂，只能单个样本进行检测，不能满足市场需求，只能是进行研究用。循环酶法操作简单，是目前检测hcy在全自动生化分析平台常用方法，收费低，但此法主要使用的是酶，而且是多种酶一起使用，每种酶的保存条件和适应的缓冲环境都不太一样，导致酶法hcy试剂稳定性一直是市场一个痛点。酶联
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种各试剂稳定性更好，检测灵敏度更高的能够在现有全自动生化分析平台上使用的同型半胱氨酸检测试剂盒。
2、为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：
3、一种同型半胱氨酸检测试剂盒，所述同型半胱氨酸检测试剂盒包括第一试剂、第二试剂、第三试剂和样本稀释液，所述第一试剂的配方为：0.1~1ku s-腺苷-l-同型半胱氨酸水解酶、0.01~0.1wt% 防腐剂、0.05~2wt% 蛋白类物质、3~8wt% 糖类物质、0.05~0.5wt%表面活性剂、0.05~0.5mmol/l苯甲基磺酰氟或0.005~0.05wt% 精氨酸，其余为ph值7.2~8的pbs缓冲液，所述第二试剂的配方为：0.01~0.1g/l共轭s-腺苷-半胱氨酸、5~20mg/l腺苷、0.2~0.8mol/l柠檬酸，其余为ph值7~8的pbs缓冲液，所述第三试剂为含有包被s-腺苷-l-同型半胱氨酸抗体的微球的保存液，所述样本稀释液含有tcep。
4、优选地，所述防腐剂为庆大霉素、proclin300、硫柳汞中的一种或多种。
5、优选地，所述蛋白类物质为bsa、酪蛋白、卵清蛋白中的一种或多种。
6、优选地，所述糖类物质为蔗糖、海藻糖、山梨醇中的一种或多种。
7、优选地，所述表面活性剂为吐温-20、曲拉通x-100、peg中的一种或多种。
8、优选地，所述样本稀释液为浓度为0.01~0.1g/l的 tcep水溶液，进一步优选为浓度为0.01~0.05g/l的 tcep水溶液。
9、优选地，所述样本稀释液的ph值为4~6，进一步优选ph值为4~5。
10、优选地，所述微球为羧基含量为0.03~0.10 meq/g的羧基微球。
11、优选地，所述微球的材质为聚苯乙烯。
12、优选地，所述羧基微球的粒径为60~400nm，进一步优选为100~350nm，更进一步优选为150~300nm。
13、优选地，所述第三试剂的配方为：0.01~0.2g/l包被s-腺苷-l-同型半胱氨酸抗体的微球，0.05~0.2wt% bsa，5~15wt% 蔗糖，0.5~1.2wt% nacl，0.01~0.1wt% 防腐剂，其余为ph值7.0~7.5的hepes缓冲液。
14、优选地，所述第三试剂中的包被s-腺苷-l-同型半胱氨酸抗体的微球在制备过程中使用北京博尔迈生物技术有限公司的ce210或ce510进行封闭。
15、s-腺苷-l-同型半胱氨酸（sah）抗体包被羧基微球会存在非特异性吸附，使本底值异常，因此需要用到封闭剂，但实验发现常规使用的封闭剂如bsa、酪蛋白、明胶、peg等对抑制特异性吸附的效果一般，而北京博尔迈生物技术有限公司的ce210或ce510却能够尽可能保持抗体的构型及特性，极大的降低非特异性吸附，也提高了第三试剂的稳定性。
16、根据一些具体实施方式，所述第一试剂的配方为：0.4~0.6ku s-腺苷-l-同型半胱氨酸水解酶、0.03~0.08wt% proclin300、0.05~1.5wt% 蛋白类物质、3~8wt% 糖类物质、0.08~0.3wt% 表面活性剂、0.08~0.2mmol/l苯甲基磺酰氟或0.008~0.02wt% 精氨酸，其余为ph值7.2~7.6的pbs缓冲液。
17、根据一些具体实施方式，所述第二试剂的配方为：0.04~0.08g/l共轭s-腺苷-半胱氨酸、5~15mg/l腺苷、0.4~0.6mol/l柠檬酸，其余为ph值7.2~7.8的pbs缓冲液。
18、本专利技术的同型半胱氨酸检测试剂盒采用免疫竞争法原理对同型半胱氨酸进行检测，待测样本中不同形式的同型半胱氨酸被还原剂还原为游离的同型半胱氨酸，游离的同型半胱氨酸被s-腺苷-l-同型半胱氨酸水解酶和腺苷转化为s-腺苷-l-同型半胱氨酸，s-腺苷-l-同型半胱氨酸和共轭s-腺苷-半胱氨酸（sac）竞争有限的包被有sah抗体的羧基微球。当反应混合物中不存在s-腺苷-l-同型半胱氨酸时，sac通过sah抗体与微球结合并聚集，产生很强的透射光信号。当反应混合物中存在s-腺苷-l-同型半胱氨酸，其优先与sah抗体结合，s-腺苷-l-同型半胱氨酸浓度越高，sac通过sah抗体与微球结合并聚集的量越少，透射光信号越弱。本专利技术的同型半胱氨酸检测试剂盒中的各试剂稳定性好，该试剂盒的检测灵敏度高、准确度高，该试剂盒无放射性风险，可在全自动生化分析平台上使用，操作简单，检测时间短，不易出现交叉反应。
19、本专利技术与现有技术相比具有如下优势：
20、本专利技术的同型半胱氨酸检测试剂盒含第一试剂、第二试剂、第三试剂和样本稀释液，第一试剂为含有s-腺苷-l-同型半胱氨酸水解酶的保存液，第二试剂为含有共轭s-腺苷-半胱氨酸和腺苷的保存液，第三试剂为含有包被s-腺苷-l-同型半胱氨酸抗体的微球的保存液，样本稀释本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，所述同型半胱氨酸检测试剂盒包括第一试剂、第二试剂、第三试剂和样本稀释液，
2.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，所述防腐剂为庆大霉素、ProClin300、硫柳汞中的一种或多种；
3.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液为浓度为0.01~0.1g/L的 TCEP水溶液。
4.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液的pH值为4~6。
5.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，所述微球为羧基含量为0.03~0.10 meq/g的羧基微球，和或，所述微球的材质为聚苯乙烯。
6.根据权利要求5所述的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，所述羧基微球的粒径为60~400nm。
7.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，所述第三试剂的配方为：0.01~0.2g/L包被S-腺苷-L-同型半胱氨酸抗体的微球，0.05~0.2wt% BSA，5~15wt% 蔗糖，
8.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，所述第三试剂中的包被S-腺苷-L-同型半胱氨酸抗体的微球在制备过程中使用北京博尔迈生物技术有限公司的CE210或CE510进行封闭。
9.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，所述第一试剂的配方为：0.4~0.6KU S-腺苷-L-同型半胱氨酸水解酶、0.03~0.08wt% ProClin300、0.05~1.5wt%蛋白类物质、3~8wt% 糖类物质、0.08~0.3wt% 表面活性剂、0.08~0.2mmol/L苯甲基磺酰氟或0.008~0.02wt% 精氨酸，其余为pH值7.2~7.6的PBS缓冲液。
10.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，所述第二试剂的配方为：0.04~0.08g/L共轭S-腺苷-半胱氨酸、5~15mg/L腺苷、0.4~0.6mol/L柠檬酸，其余为pH值7.2~7.8的PBS缓冲液。
...【技术特征摘要】
1.一种同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，所述同型半胱氨酸检测试剂盒包括第一试剂、第二试剂、第三试剂和样本稀释液，
2.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，所述防腐剂为庆大霉素、proclin300、硫柳汞中的一种或多种；
3.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液为浓度为0.01~0.1g/l的 tcep水溶液。
4.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液的ph值为4~6。
5.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，所述微球为羧基含量为0.03~0.10 meq/g的羧基微球，和或，所述微球的材质为聚苯乙烯。
6.根据权利要求5所述的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，所述羧基微球的粒径为60~400nm。
7.根据权利要求1所述的同型半胱氨酸检测试剂盒，其特征在于，所述第三试剂的配方为：0.01~0.2g/l包被s-腺苷-l-同型半胱氨酸抗体的微球，0.05~0.2wt% bsa，5~15w...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐长银，管家业，殷栋强，吴悦，
申请(专利权)人：迪亚莱博张家港生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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