一种睾丸管周肌样细胞的生物标志物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种睾丸管周肌样细胞的生物标志物及其应用。所述生物标志物包括ITGA9蛋白。基于ITGA9蛋白，制备鉴定睾丸管周肌样细胞的试剂盒，利用抗ITGA9蛋白抗体特异性识别结合管周肌样细胞，再通过如流式分析等方法可有效鉴定睾丸管周肌样细胞，此外，鉴定睾丸管周肌样细胞后即可将其与Leydig细胞进行区分，进而能够有效分离两种细胞，解决了常规分步消化、差异贴壁和梯度离心等方法难以将两者分离的问题，能够分离纯化得到高纯度的Leydig细胞以及高纯度的管周肌样细胞。以及高纯度的管周肌样细胞。以及高纯度的管周肌样细胞。

【技术实现步骤摘要】
一种睾丸管周肌样细胞的生物标志物及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，涉及一种睾丸管周肌样细胞的生物标志物及其应用。

技术介绍

[0002]睾丸是人体中组成成分最复杂的器官之一，包括：
①
由管周细胞、支持细胞和各级生精细胞组成的生精小管；
②
由Leydig细胞和免疫细胞等组成的睾丸间质；
③
由内皮细胞和血管平滑肌细胞组成的脉管系统等。其中，Leydig细胞是男性产生雄激素的最主要细胞，Leydig细胞的功能障碍可导致生精障碍和雄激素下降引起的全身症状，充分理解Leydig细胞的各项生理病理过程对于研究男性健康具有重要意义。此外，管周肌样细胞对于睾丸功能同样十分重要，是维持生精小管形态和活动性的主要细胞组分，近年来，管周肌样细胞的旁分泌功能也受到关注，学者普遍猜测管周肌样细胞对于睾丸局部生精微环境的稳态也十分重要。
[0003]在生命科学领域，分离、纯化和体外培养是研究某种类型细胞功能的必要手段，然而，最近的研究表明Leydig细胞和管周肌样细胞有着共同的分化谱系，两者的基因表达谱也十分相似，此外，在体外培养体系中，两者均为贴壁生长，难以通过分步消化、差异贴壁和梯度离心等方法将两者分离，如CN101191124公开了一种Leydig细胞的分离方法及其用途，所述方法包括：a.将用胶原酶消化的睾丸组织通过孔径为20
‑
100μm的滤网过滤，得到睾丸间质组织内细胞；b.将获得的睾丸间质组织内细胞在培养液中培养10分钟
‑/>4.5小时，取贴壁细胞得到Leydig细胞，但得到细胞中仍含较多管周肌样细胞。
[0004]受限于无法在体外有效分离Leydig细胞和睾丸管周肌样细胞，Leydig细胞和睾丸管周肌样细胞的相关研究进展缓慢。
[0005]近年来，有报道指出神经生长因子受体(Nerve Growth Factor Receptor，NGFR)可以作为分选Leydig细胞的标志物，然而，申请人近期通过单细胞测序和免疫组化发现，虽然生殖细胞、支持细胞和免疫细胞等不表达NGFR，但是管周肌样细胞同样表达NGFR蛋白，这些结果提示该方法不能成功分离较纯净的Leydig细胞和管周肌样细胞。
[0006]综上所述，如何提供一种有效分离方法，分别得到高纯度的Leydig细胞和高纯度的管周肌样细胞，便于进行细胞功能、病理等研究，是Leydig细胞和睾丸管周肌样细胞研究领域亟待解决的问题。

技术实现思路

[0007]针对现有技术的不足和实际需求，本专利技术提供一种睾丸管周肌样细胞的生物标志物及其应用，所述生物标志物可作为鉴定睾丸管周肌样细胞的标志物，从而能够有效区分睾丸管周肌样细胞和Leydig细胞，分离得到高纯度的Leydig细胞和高纯度的管周肌样细胞。
[0008]为达上述目的，本专利技术采用以下技术方案：
[0009]第一方面，本专利技术提供一种睾丸管周肌样细胞的生物标志物，所述生物标志物包
括ITGA9蛋白。
[0010]本专利技术中，深入分析睾丸管周肌样细胞和Leydig细胞的基因表达谱，发现睾丸管周肌样细胞特异表达ITGA9蛋白，而Leydig细胞不表达该蛋白，基于ITGA9蛋白，能够有效区分睾丸管周肌样细胞和Leydig细胞，从而解决了常规分步消化、差异贴壁和梯度离心等方法难以将两者分离的问题。
[0011]优选地，所述ITGA9蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO.1所示的序列。
[0012]SEQ ID NO.1：
[0013]YNLDPQRPVHFQGPADSFFGYAVLEHFHDNTRWVLVGAPKADSKYSPSVKSPGAVFKCRVHTNPDRRCTELDMARGKNRGTSCGKTCREDRDDEWMGVSLARQPKADGRVLACAHRWKNIYYEADHILPHGFCYIIPSNLQAKGRTLIPCYEEYKKKYGEEHGSCQAGIAGFFTEELVVMGAPGSFYWAGTIKVLNLTDNTYLKLNDEVIMNRRYTYLGYAVTAGHFSHPSTIDVVGGAPQDKGIGKVYIFRADRRSGTLIKIFQASGKKMGSYFGSSLCAVDLNGDGLSDLLVGAPMFSEIRDEGQVTVYINRGNGALEEQLALTGDGAYNAHFGESIASLDDLDNDGFPDVAIGAPKEDDFAGAVYIYHGDAGGIVPQYSMKLSGQKINPVLRMFGQSISGGIDMDGNGYPDVTVGAFMSDSVVLLRARPVITVDVSIFLPGSINITAPQCHDGQQPVNCLNVTTCFSFHGKHVPGEIGLNYVLMADVAKKEKGQMPRVYFVLLGETMGQVTEKLQLTYMEETCRHYVAHVKRRVQDVISPIVFEAAYSLSEHVTGEEERELPPLTPVLRWKKGQKIAQKNQTVFERNCRSEDCAADLQLQGKLLLSSMDEKTLYLALGAVKNISLNISISNLGDDAYDANVSFNVSRELFFINMWQKEEMGISCELLESDFLKCSVGFPFMRSKSKYEFSVIFDTSHLSGEEEVLSFIVTAQSGNTERSESLHDNTLVLMVPLMHEVDTSITGIMSPTSFVYGESVDAANFIQLDDLECHFQPINITLQVYNTGPSTLPGSSVSISFPNRLSSGGAEMFHVQEMVVGQEKGNCSFQKNPTPCIIPQEQENIFHTIFAFFTKSGRKVLDCEKPGISCLTAHCNFSALAKEESRTIDIYMLLNTEILKKDSSSVIQFMSRAKVKVDPALRVVEIAHGNPEEVTVVFEALHNLEPRGYVVGW。
[0014]第二方面，本专利技术提供第一方面所述的睾丸管周肌样细胞的生物标志物在制备鉴定睾丸管周肌样细胞的产品中的应用。
[0015]本专利技术中，以ITGA9蛋白为标志物，通过鉴定该蛋白的方法如流式分析等，即可快速鉴定出睾丸管周肌样细胞。
[0016]第三方面，本专利技术提供一种鉴定睾丸管周肌样细胞的试剂盒，所述试剂盒包括抗ITGA9蛋白抗体。
[0017]本专利技术的试剂盒中包括抗ITGA9蛋白抗体，利用该抗体可对ITGA9蛋白进行特异性识别，从而进行进一步检测(如流式分析)，鉴定睾丸管周肌样细胞。
[0018]优选地，所述抗ITGA9蛋白抗体修饰有荧光基团。
[0019]优选地，所述试剂盒还包括抗NGFR蛋白抗体，所述抗NGFR蛋白抗体修饰有荧光基团。
[0020]优选地，所述抗ITGA9蛋白的荧光基团与所述抗NGFR蛋白抗体的荧光基团的荧光颜色不同。
[0021]优选地，所述荧光基团包括FITC、PE、AlexaFluor488、Alex Fluor594或Cy5等。
[0022]优选地，所述试剂盒还包括封闭液。...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种睾丸管周肌样细胞的生物标志物，其特征在于，所述生物标志物包括ITGA9蛋白。2.根据权利要求1所述的睾丸管周肌样细胞的生物标志物，其特征在于，所述ITGA9蛋白的氨基酸序列包括SEQ ID NO.1所示的序列。3.权利要求1或2所述的睾丸管周肌样细胞的生物标志物在制备鉴定睾丸管周肌样细胞的产品中的应用。4.一种鉴定睾丸管周肌样细胞的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括抗ITGA9蛋白抗体。5.根据权利要求4所述的鉴定睾丸管周肌样细胞的试剂盒，其特征在于，所述抗ITGA9蛋白抗体修饰有荧光基团；优选地，所述试剂盒还包括抗NGFR蛋白抗体，所述抗NGFR蛋白抗体修饰有荧光基团；优选地，所述抗ITGA9蛋白的荧光基团与所述抗NGFR蛋白抗体的荧光基团的荧光颜色不同；优选地，所述试剂盒还包括封闭液；优选地，所述封闭液包括含有牛血清白蛋白的PBS溶液。6.权利要求1或2所述的睾丸管周肌样细胞的生物标志物或权利要求4或5所述的鉴定睾丸管周肌样细胞的试剂盒在分离纯化睾丸管周肌样细胞和/或Leydig细胞中的应用。7.一种分离纯化睾丸管...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵亮宇，汤育新，戴英波，叶昆，韩厦，陈玉琢，
申请(专利权)人：中山大学附属第五医院，
类型：发明
国别省市：